重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗免疫效果评价

为了解重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-8株)的免疫效果,为临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序提供依据,随机抽取6个厂家的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-8株)进行免疫效果评价试验。结果表明,二免后28 d H5亚型二价灭活疫苗组的免疫抗体合格率Re-6株在88.89%以上,Re-8株均为100.00%,免疫效果较好。     

浅谈鸡群免疫失败的原因及提高免疫率的技术措施

<正>近年来,随着养鸡业的迅猛发展,广大养鸡专业户对疫病的防疫意识明显加强,大型养鸡企业更要制定严格的免疫程序;但是免疫失败却时有发生,致使大量鸡群死亡。如2011年10月15日桐山街道某村一养殖户2000多只肉鸡注射了重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株),注射量     

禽流感灭活疫苗和重组禽流感灭活疫苗免疫鸡抗体消长规律的比较研究

<正>禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)各3批,以重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄SPF鸭。结果为:(1)免疫后1周,各免疫组均未测到HI抗体;(2)鸡免疫后4⁵周,HI抗体效价达到峰值1∶26.05周,HI抗体效价达到峰值1∶26.0¹∶27.0,随后2周下降相对较快,平均每周下降0.31∶27.0,随后2周下降相对较快,平均每周下降0.3⁰.7个滴度,之后HI抗体效价缓慢下降,直到试验结束,平均每周下降0.040.7个滴度,之后HI抗体效价缓慢下降,直到试验结束,平均每周下降0.04⁰.17个滴度;(3)免疫     

爆发高致病禽流感疫区的自主活动鸟类禽流感及新城疫的血清学调查与分析

应用血凝抑制试验(HI),对采自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中的54份血清血清学检测,分析结果显示,在总共采集的54份血清样品中,抗新城疫病毒(NDV)抗体流行血清型(seroprevalence)与抗H6亚型禽流感病毒(H6)抗体、抗H9亚型禽流感病毒(H9)、抗H5亚型禽流感病毒(H5)抗体阳性率分别为64.8%、75.9%、29.6%。而根据血凝抑制试验检测结果发现,H5亚型禽流感病毒抗体滴度较低,最高仅为320,其阳性率为29.6%,推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒,可能为与该次流感爆发相关的新病毒,这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证;新城疫病毒在该生态系中的稳定循环,构成了对家禽潜在的威胁,我国目前非典型新城疫的一个主要原因是带毒鸟类的传入。     

三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗抗体检测实验探讨

为进一步了解三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活苗的免疫效果。随机选取了4个三黄鸡养殖培育场开展了三价灭活疫苗以及血清保护作用的抗体蛋白质检测实验。通过实验不仅能够进一步了解三黄鸡养殖培育场的H5及H7亚型禽流感的抗体水平,还能够根据检测结果,进一步认知抗体消长规律,从而指导养殖场制定合理的免疫程序,为有效地防控禽流感的发生以及流行提供参考。     

我国H5N1禽流感疫苗研究取得新突破

<正>近年来,哈尔滨兽医研究所在新型禽流感疫苗的研制方面取得了显著进展。2007年研制成功的表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组新城疫病毒载体疫苗,可以同时预防H5N1禽流感和鸡新城疫两种家禽烈性传染病。2010年研制成功的表达H5亚型HA基因的重组鸭瘟病毒载体疫苗,可以显著提高H5N1禽流感的免疫覆盖率。2013年研制成功的H5N1禽流感DNA疫苗,具有易于生产和储存,可以同时诱导细胞和体液     

柳城县某鸡场禽流感和新城疫抗体水平监测

为了解柳城县某鸡场禽流感H5亚型、禽流感H7亚型和新城疫免疫情况,在2017年1月和2月两次采集某鸡场血清共60份,应用血凝和血凝抑制试验检测禽流感H5亚型抗体、禽流感H7亚型抗体和新城疫抗体。结果显示禽流感H5亚型抗体合格率是100%,禽流感H7亚型抗体合格率是100%,新城疫抗体合格率是100%。     

鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆分离株A/Goose/XJYL/10/2003HA基因的克隆和序列测定与分析

根据已发表的H5N1亚型禽流感病毒的HA基因全序列,设计了1对引物,对禽流感病毒新疆株A/Goose/XJYL/10/2003(H5N1)提取RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,获得长为1758bp的HA全基因序列。序列测定后,分析结果表明,本试验株与广东、香港和东南亚等不同地区的H5N1禽流感病毒HA的核甘酸序列的同源率很高,其氨基酸切割位点附近具有高致病性禽流感病毒的特征。系统进化树分析表明,新疆株为独立分支,属于欧亚种系。     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗免疫丹顶鹤抗体消长规律

用禽流感H5N1亚型油乳剂灭活疫苗免疫丹顶鹤,免疫后不同时间检测H5亚型HI抗体,结果表明,免疫后2周即能检测出抗体,之后逐渐上升,至第八周抗体水平达到高峰且较稳定,然后缓慢下降,免疫后20周时免疫抗体降至3.38log2,保护期可达4～5个月。新生丹顶鹤初免后4周免疫抗体低于保护临界值(临界值为4log2)。二次免疫后4周可使免疫抗体达到免疫保护临界值,并可持续4个月以上。     

抗鸡新城疫病毒特异性血清制备的研究与鉴定

目的 探索最优免疫程序制备出效价较高的抗鸡新城疫病毒特异性血清的方法。方法 试验选用4周龄SPF鸡，采用不同免疫剂量、免疫周期、免疫方法、免疫部位等进行分组，共分为7组免疫程序，每组10只SPF鸡，每组均从首免后3周开始测抗体。结果 第4组和第5组抗体表现最好，为首免用鸡新城疫病毒液(La Sota株)进行基础免疫，首免后1～2周进行2免，2免至4免均为鸡新城疫病毒灭活疫苗(La Sota株)加倍剂量(2羽份)多点免疫，每次灭活疫苗加强免疫间隔2～3周，最终可使抗体水平达到13log2,中和效价均大于1:1 300。结论 先用活疫苗进行基础免疫，1～2周后进行2～3次加倍剂量的多点、加强免疫效果最好，同时从环境控制、SPF鸡筛选、免疫、中间监测、冻干、检测等建立了血清制备及鉴定方法。     

草鱼出血病病毒VP6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果

为了探讨草鱼出血病病毒(GCRV)VP6亚单位疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用,将vp6基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),构建了重组质粒pET28a(+)-VP6。SDS-PAGE和Western-blotting显示,重组VP6蛋白的分子量约为43 ku,主要以包涵体形式存在,重组蛋白占菌体总蛋白的20%左右;Ni2+柱纯化后的重组蛋白,以每尾500μg肌肉注射免疫草鱼(14～20 cm,60～120 g),并在第14、21、28、49、70天通过间接凝集反应检测抗体水平,结果显示,免疫注射后第14天可检测到鱼体产生的特异性抗体,第21天达到最高峰,第70天仍可检测到抗体的存在;免疫注射第21天人工接种GCRV,免疫后的草鱼对出血病的保护力达100%。     

益生芽孢菌制剂对鸡免疫促进作用的研究

本研究利用益生芽孢杆菌微生态饲料添加剂混料饲喂雏鸡,在7日龄和21日龄进行2次新城疫疫苗免疫后,检测相关指标。结果显示,试验组的新城疫血凝抑制效价(HI)明显高于对照组,差异极显著(P<0.01);脾脏指数、胸腺指数均显著高于对照组,差异显著(P<0.05);法氏囊指数高于对照组,差异不显著(P>0.05)。结果表明本制剂对雏鸡具有免疫调节作用。     

溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护研究

为研究溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护作用,实验构建了重组真核表达质粒pcDNA-flaC并将该质粒肌肉注射红笛鲷,采用PCR、RT-PCR、ELISA和攻毒试验等方法检测了该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达和对红笛鲷的免疫保护.PCR结果显示,免疫接种7和28 d,注射点周围肌肉、鳃、肾脏、肝脏和脾脏都存在质粒分布;RT-PCR结果显示,免疫接种后第7天、14天和28天,红笛鲷不同组织内均有目的基因表达.ELISA结果表明,鱼血清内产生了抗FlaC蛋白的抗体,表明DNA疫苗免疫后鱼体表达了目的蛋白,并诱导产生了相应抗体.攻毒实验表明,免疫后的红笛鲷能较好地抵抗致病性溶藻弧菌的感染.结果表明,质粒pcDNA-flaC可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的疫苗候选物.     

大菱鲆迟缓爱德华氏菌福尔马林灭活疫苗研究

以大菱鲆为免疫对象,采用0.5福尔马林灭活的方法,将迟缓爱德华氏菌制成全菌疫苗,验证了其具有可靠的安全性。以浸泡和注射两种免疫接种方法对养殖大菱鲆14d内进行2次免疫,第二次免疫后第10天,对免疫鱼和各自的对照鱼进行爱德华氏菌的人工感染试验,获得注射接种疫苗的大菱鲆对腹水病的免疫保护率为70,浸泡接种疫苗的大菱鲆对腹水病的免疫保护率为35。表明注射和浸泡接种迟缓爱德华氏菌全菌疫苗都能使大菱鲆对腹水病产生免疫效果,并且注射免役效果优于浸泡免疫。     

草鱼出血病病毒vp6核酸疫苗的免疫效果评估

为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游,获核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6。按每尾分别注射疫苗载体10、30、60μg的剂量免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(体长14～20 cm,体质量60～120 g),同设pFastBacTMDual载体(30μg/尾)阴性对照组及空白对照组(0.4 mL/尾无菌水)。于免疫后不同时间通过RT-PCR检测免疫鱼体中vp6基因的表达,并于免疫后第14、21、28、49、70天分别通过间接凝集反应检测血液中的抗体水平,并在免疫第21天感染GCRV评估免疫保护效果。结果显示,核酸疫苗免疫草鱼后,各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第28天达到最高;攻毒后每尾注射疫苗载体10、30、60μg组的死亡率分别为0%、0%、5%,pFastBacTMDual载体对照组和空白对照组分别为30%和100%。表明构建的核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果。     

Protective Immunity of Goldfish Against Ichthyophthirius multifiliis Infection Induced by Different Trophont Vaccine Preparations

Ichthyophthirius multifiliis, commonly called “Ich,” is a protozoan parasite that infects the epidermis and gills of freshwater fish. Here, we used goldfish (Carassius auratus) to determine whether the four vaccine preparations (live trophonts, formalin‐fixed trophonts, freeze‐thawed trophont lysates, and trophont cilial and cell cortical fractions) of I. multifiliis (Fouquet) can elicit resistance of immunized fish against subsequent theront challenge, and whether a relationship exists between in vitro immobilization of theronts in sera or mucus from immunized fish and host protective immunity against the parasite. Experimental goldfish were randomly divided into five groups with five parallel controls, with each group or subgroup consisting of 20 individuals. Each test goldfish was immunized with one of the four Ich vaccine preparations administered by one of the three routes: live trophonts by gavage (Group 1), formalin‐fixed trophonts by injection (Group 2) or by immersion (Group 3), freeze‐thawed trophont lysates by injection (Group 4), and trophont cilial and cell cortical fractions by injection (Group 5). The fish were then challenged by a standard Ich theront challenge on Day 21 postimmunization. For every 10 d following immunization, we tested the in vitro immobilization of Ich theronts by sera or mucus from immunized and control fish. We found that although all control (nonimmunized) and Group 3‐immunized goldfish died following theront challenge, more than half (55–65%) of the immunized fish from Groups 1, 2, 4, and 5 survived. Furthermore, except for the fish from Groups 3 and 4, the number of mean days to death in each test group was significantly higher than that in the respective control. These results indicate that goldfish immunized by injection or by gavage with any of the four vaccine preparations gained resistance to Ich infection. Further analysis indicated that this protective immunity was closely associated with the in vitro immobilization of Ich theronts by fish sera or mucus.     

鲖爱德华菌口服疫苗对斑点鲖的免疫效果

为评价鲖爱德华菌口服微球疫苗对斑点鲖的免疫效果,实验以天然高分子聚合物海藻酸钠和鲖爱德华菌灭活疫苗为材料,制备鲖爱德华菌口服微球疫苗。将实验动物随机分为鲖爱德华菌微球疫苗组、鲖爱德华菌灭活疫苗组、空微球组和对照组,以拌料口服方式进行免疫,通过检测血清中溶菌酶活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、补体替代途径(ACH50)活性等非特异性免疫指标,抗体效价以及相对免疫保护率评价疫苗免疫效果,采用荧光定量PCR检测口服疫苗对斑点鲖免疫相关基因表达量的影响。结果显示,鲖爱德华菌口服微球疫苗能够较长时间增强斑点鲖非特异性免疫功能;血清凝集效价于第5周达到峰值,为1∶16,免疫后第7周仍可检测到特异性抗体;口服鲖爱德华菌微球疫苗的斑点鲖获得的抗鲖爱德华菌相对免疫保护率为60.7%,远高于灭活疫苗组(14.3%)及空微球组(10.7%);荧光定量分析结果显示,攻毒后48 h相比攻毒前各免疫基因表达量均有上调,鲖爱德华菌微球疫苗对受免鱼肾脏、脾脏中免疫基因的表达影响尤为明显。结果表明,鲖爱德华菌口服微球疫苗能增强斑点鲖非特异性免疫功能,对鲖爱德华菌病起到一定的预防作用。     

Development,distribution and expression of a DNA vaccine against nodavirus in Asian Seabass,Lates calcarifier (Bloch, 1790)

Fish nodavirus (betanodavirus), a viral pathogen responsible for viral nervous necrosis (VNN) was isolated from infected Asian sea bass (Lates calcarifer). The distribution, clearance and expression of nodavirus vaccine, on the basis of DNA vaccine (pFNCPE42 DNA‐pcDNA3.1) construction, were analysed in tissues of the Asian seabass by PCR, RT‐PCR, ELISA and Immunohistochemistry. Fish immunized with a single intramuscular injection of 20 μg of the pFNCPE42‐DNA vaccine showed a significant increase in the serum antibody level in the 3rd week after vaccination, compared to control eukaryotic expression vector pcDNA3.1 vaccinated fish. Results from PCR studies indicated that the vaccine‐containing plasmids were distributed in heart, intestine, gill, muscle and liver 10 days after vaccination. Clearance of pFNCPE42‐DNA vaccine was studied at 10, 25, 50, 75 and 100 days of post vaccination (d p.v). At 100 days p.v. pFNCPE42‐DNA was cleared from muscle of vaccinated sea bass. In vitro and in vivo expression of fish nodavirus capsid protein gene (FNCP) was determined by fluorescent microscopy. Asian seabass was immunized with pFNCPE42‐DNA vaccine at a dose of 20 μg per fish and were challenged with betanodavirus by intramuscular injection. The vaccinated seabass was protected from nodaviral infection and 77.33% of relative percent survival (RPS) was recorded.     

野生水禽高致病性禽流感卵黄抗体监测

为了解野生水禽对高致病性禽流感病毒(AIV)自然被动免疫状况,于2010—2011年,在大庆龙凤湿地分别采集绿头鸭、须浮鸥、黑翅长脚鹬三种野生水禽巢卵150、184和128枚,采用血凝抑制试验检测H5和H7两种AIV的卵黄抗体。结果表明,绿头鸭H5和H7亚型禽流感卵黄抗体的阳性率分别为53.33%和14.67%,平均卵黄抗体滴度分别为4.55和3.45(log2);须浮鸥H5和H7亚型禽流感卵黄抗体的阳性率分别为34.78%和11.96%,平均卵黄抗体滴度分别为3.78和3.18(log2);黑翅长脚鹬H5和H7亚型禽流感卵黄抗体的阳性率分别为31.25%和9.38%,平均卵黄抗体滴度分别为3.85和3.67(log2)。由此可见,野生水禽种群对于高致病性禽流感的接触情况是较为频繁的,提示需要进一步加强对其种群的病毒携带情况进行监测。