血鹦鹉铜绿假单胞菌病原菌鉴定和药敏试验

对从患病血鹦鹉(Cichlasoma var.)肝、眼部脓肿处分离到2株细菌,对该分离菌进行人工感染实验、鉴定和药敏实验。结果显示:通过人工感染实验证明其对血鹦鹉有较强的致病性。分离菌革兰氏阴性杆状,氧化酶阳性、接触酶阳性、甲基红阴性,能够利用枸橼酸盐、丙二酸盐,发酵葡萄糖。综合分离菌的表型特征及分子生物学结果,鉴定分离菌为假单胞菌属(Pseudomonas)的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。药敏试验结果显示头孢哌酮、头孢他啶、壮观霉素、阿米卡星、阿奇霉素、氨噻酸单胺菌素和阿洛西林抑菌效果显著。     

患病黄额闭壳龟中产酸克雷伯菌的分离与鉴定

从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮等10种药物高度敏感。     

大鲵源致病性弗氏柠檬酸杆菌的分离、鉴定和药物敏感性

为鉴定患病大鲵(Andrias davidianus)病原菌,从大鲵肠、胃、脾脏中分离得到菌株int1705,分离菌株经形态特征观察、生理生化特性测定、16S rRNA和aspC管家基因序列测定及系统发育学分析,鉴定为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。经人工感染,结果显示:菌株int1705能使健康大鲵发病并致死,半致死浓度(LD50)为3.16×10 6 CFU/mL,且发病症状与自然发病相似。药敏试验结果显示,菌株int1705对多粘菌素B、头孢他啶、诺氟沙星、氧氟沙星、复方新诺明等10种药物敏感。     

一种益生菌对血鹦鹉三种免疫指标的影响

从血鹦鹉肠道内分离、纯化、培养细菌,获得菌株0129B。经细菌形态特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析,鉴定为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)。该细菌为革兰氏阳性菌,杆状。在测定的20种生理生化指标中,葡萄糖、甘露醇、明胶、硝酸盐(还原)、甘露糖等5项指标为阳性,麦芽糖、阿拉伯糖、木糖等15项指标为阴性。根据细菌16S rRNA的分子生物学细菌鉴定方法,扩增出16S rRNA片段1 451 bp。为了解该益生菌对血鹦鹉溶菌酶活性、超氧化物歧化酶和血清补体C₃等3种免疫指标的影响,用添加0129B的饲料进行饲养试验。结果表明,0129B对提高血鹦鹉血清中超氧化物歧化酶含量作用显著(P<0.05),对提高溶菌酶活性和血清补体C₃含量作用不显著(P>0.05)。     

血鹦鹉鱼木糖葡萄球菌的分离鉴定和耐药性研究

自患病血鹦鹉鱼肾脏分离获得优势菌CVSX1,做分离纯化培养、生化与分子鉴定、人工感染试验和药敏试验,以期对该病有效预防和治疗。分离菌株血液培养菌落呈圆形,表面光滑,边缘整齐,颜色灰白色至略黄,周围有弱溶血环。经过涂片染色镜检,该菌株革兰氏染色为阳性圆形球菌,直径约为0.8~1.0μm,多数成堆,少数散在、成对或四联状排列。该菌株无荚膜或鞭毛,亦无芽孢,根据形态和生理、生化性状可初步鉴定为木糖葡萄球菌。菌株的16SrDNA序列比对表明,菌株CVSX1与已登录GenBank数据库的木糖葡萄球菌16SrDNA序列的相似性99%,聚类分析结果表明菌株CVSX1与葡萄球菌属的木糖葡萄球菌遗传距离最小。通过人工感染试验证明木糖葡萄球菌CVSX1对血鹦鹉幼鱼有较强的致病性。应用临床常用的抗生素对木糖葡萄球菌CVSX1进行药敏检测,菌体CVSX1对磺胺嘧啶、青霉素G、诺氟沙星、四环素高度耐药,对红霉素、丁胺卡那敏感,对环丙沙星、氧氟沙星表现为中介。     

鲤科疱疹病毒Ⅱ型射阳株的分离与鉴定

对患"鳃出血"病的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)病灶组织进行分离,并通过回归感染试验、细胞分离鉴定、电镜观察以及PCR几种方法结合来鉴定。结果显示:健康异育银鲫注射组织滤液5 d后开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为80%,对照组没有死亡。对患病鱼内脏组织经超薄切片,电子显微镜观察发现组织内有大量的病毒颗粒,成熟的病毒粒子直径大小170~200 nm,与疱疹病毒Ⅱ型病毒粒子相符。滤液经疱疹病毒Ⅱ型特异性的PCR检测,获得阳性目的片段,同时将无菌处理的病样滤液接种胖头鲤细胞(FHM),培养1 d后出现明显的细胞病变(CPE),单层细胞网状收缩,坏死细胞聚集。收集细胞培养液,进行病毒特异性的PCR检测,并检测到436 bp的阳性片段。结果表明:从江苏射阳某"鳃出血"病异育银鲫养殖鱼塘分离到的病毒为疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)病毒。     

鲤鱼细菌性败血症病原菌的分离鉴定及药敏试验

2018年从重庆某水产养殖场患有典型细菌性败血症的鲤鱼肝脏中分离到两株细菌(P-H1和P-B1),经菌体形态观察、回归感染试验、生化鉴定和16S rDNA分析,确认两株致病菌均为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)。对健康鲤鱼进行回归感染试验,结果与原病源鱼发病症状一致,且发现P-H1菌株的致病速度、致病强烈程度明显高于P-B1菌株。本研究可为鲤鱼细菌性败血症诊断和防治提供一定的参考依据。     

美洲鲥致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

从自然感染发病的美洲鲥肝脏、肾脏和肠道中分离出1株细菌,经革兰染色镜检及PCR鉴定,确定为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。用该菌株接种健康美洲鲥,鉴定其致病力,从人工感染50 g左右的健康美洲鲥发现,菌株具有很强的致病力,试验鱼在感染后72 h内全部死亡,且患病症状与自然发病的鱼症状一致。进一步采用药敏纸片法测定分离菌株对多种抗生素的敏感性,结果发现:维氏气单胞菌对恩诺沙星、氧氟沙星、头孢噻吩三种药物极为敏感,对红霉素、头孢唑啉中度敏感,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、四环素、链霉素不敏感。     

紫贻贝(Mytilus edulis Linnaeus)大量死亡原因的初步研究

从发病紫贻贝（Mytilus edulis）的内脏团内分离出一株菌SS1，通过人工感染试验，证实其为致病菌。经形态、生理生化等几项指标鉴定，该菌株性状与溶藻弧菌基本相符。药物敏感试验结果表明羧苄青霉、万古霉素、克林霉索、氨苄青霉索、阿莫西林等9种药物对该菌株均有明显的抑制作用。     

紫贻贝(Mytilus edulis Linnaeu)大量死亡原因的初步研究

从发病紫贻贝（Mytilus deulis）的内脏团内分离出一株菌SS1，通过人工感染试验，证实其为致病菌。经形态、生理生化等几项指标鉴定，该菌株性状与溶藻弧菌基本相符。药物敏感试验结果表明羧苄青霉、万古霉素、克林霉素、氨苄青霉素、阿莫西林等9种药物对该菌株均有明显的抑制作用。     

黄颡鱼暴发性流行病病原的分离鉴定及其3种毒力基因检测

为查明黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)暴发性流行病的病原菌及其3种毒力基因的携带情况,以常规方法进行细菌分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API 20NE和16S rRNA基因序列分析进行细菌鉴定,PCR扩增法检测病原菌的3种毒力基因。结果显示,从发病症状典型的黄颡鱼肝脏中分离到1株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)GXGP1,与嗜水气单胞菌标准株ATCC 7966T的同源性为99.9%,对黄颡鱼有很强致病力,是引起黄颡鱼暴发性流行病的病原菌,该菌携带有Aer、hly和ahp 3种毒力基因。     

下口鲇烂尾病病原的分离与鉴定

对患烂尾病下口鲶(Hypostomus plecostomus)的肝脏、脾脏、肾脏进行病原菌分离,分离到NY635菌株,用NY635菌株人工感染体重在20～30 g的健康鱼,人工感染的下口鲇出现与自然发病鱼相似的症状,并从人工感染的下口鲇病灶中分离出菌落形态相同的细菌。初步证明NY635是引起下口鲇烂尾病的病原。对NY635进行菌落形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,确定菌株NY635为碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes),并对其进行了药敏试验。     

斑点叉尾(鮰)"腹水症"病原的分离鉴定及体外芽孢杆菌拮抗试验

为了解斑点叉尾(鮰)(Ictalurus punctatus)"腹水症"的发病原因,提高防控技术,试验在佛山市某渔场患典型"腹水症"的病(鮰)上分离出优势菌落,通过形态学观察、生化及分子生物学鉴定确定该细菌为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).通过对健康斑点叉尾(鮰)的回归感染实验发现,与原感染鱼发病症状相似,且分离鉴定得到相同病原菌.体外药敏试验结果显示:该温和气单胞菌菌株对恩诺沙星、氟苯尼考等7种药物敏感,而对四环素、强力霉素耐药.本研究还探讨了4种芽孢杆菌对分离的温和气单胞菌的拮抗作用,结果表明地衣芽孢杆菌对该病原的拮抗作用最好.     

中华鳖温和气高胞菌病的病原研究

中华鳖温和气单胞菌病是集约化温室养鳖的主要疾病之一.1994-1997年间先后从垂死病鳖的血液和肝脏分离到94-10-28、95-3-20、96-2-1、96-3-A和97-6-13五菌株.经细菌学鉴定均为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).任选其中二菌株进行人工感染,均使鳖100%患病.发病鳖的症状与自然病鳖的症状一致,再分离菌株的各种特性与原分离菌株相同.采用二倍稀释法,测定比较了八种药物对上述二菌株的最低抑菌浓度(MIC),5号药的抑菌效果最佳.     

黄鳝源嗜水气单胞菌DB01分离鉴定及药敏特性研究

从患病的黄鳝(Monopterus albus)体内分离到一株致病菌株DB01,对该菌株进行人工感染、生理生化鉴定及16S r DNA序列分析。结果显示:人工感染黄鳝出现与自然发病相同的症状,表明菌株DB01为发病黄鳝的病原菌。菌株DB01为革兰氏阴性杆菌,无芽孢和荚膜,在兔血平板上能形成明显的β-溶血。序列分析显示,菌株DB01与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的同源性达99%。药敏试验结果显示,菌株DB01对诺氟沙星、左氧氟沙星、阿奇霉素及氟苯尼考等抗生素高度敏感,五倍子、黄柏、地榆及乌梅等中草药对菌株DB01抑菌作用强。     

花鲈弧菌病病原菌（哈维氏弧菌）的分离与鉴定

1999年4－5月，山东省青岛市胶南海区网箱养殖场花鲈（Lateolabrax japonicus)幼鱼发生暴发性传染病，死亡率达50％。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到1株优势菌SF－1，经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF－3菌株的再感染试验结果表明，所分离的菌株为此次花钙烂层病的致病菌，经形态、生理生化等64项特征指标鉴定，SF－1和SF－3均为哈维氏弧菌（Vibrio harveyi)。药敏试验结果表明，头孢噻肟，头孢三嗪，头孢孟多，呋喃妥因，氯霉素,氧哌嗪青霉素，磺胺类，复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶，多粘菌素E等10种药物对该菌株有明显的抑制作用。     

蓝鳃太阳鱼诺卡氏菌的分离鉴定及药敏分析

为探明患结节病蓝鳃太阳鱼的病因,从蓝鳃太阳鱼(Lepomis macrochirus)脾脏结节处分离获得一病原菌SD1810。通过菌落形态、细菌生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,确定所得菌株为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)。人工回归感染试验结果显示,注射浓度为2.8×107 CFU/mL的菌液能使蓝鳃太阳鱼患病致死,发病症状与原感染鱼相似。从死亡太阳鱼体内可重新分离到与SD1810形态特征、生理生化指标相一致的病菌。对分离获得的鰤鱼诺卡氏菌进行药敏试验分析,结果表明,鰤鱼诺卡氏菌SD1810对红霉素、利福平、庆大霉素、氯霉素、阿米卡星、氟苯尼考等10种抗生素极其敏感,对头孢唑啉,诺氟沙星,青霉素、氨苄青霉素和阿莫西林等6种抗生素具有耐药性。     

泥鳅白头病病原菌的分离鉴定、药敏试验及拮抗菌的筛选

为确定连云港市墩尚镇泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)白头病的病原菌,本研究采用常规微生物分离鉴定技术和分子生物学相关方法,对患病泥鳅进行病原菌的分离、鉴定并分析其药物敏感性,采用滤纸片抑菌圈法筛选了该病原菌的拮抗菌.从患病泥鳅病灶部位分离到1株病原菌并命名为W1,经人工感染发现体腔注射浓度为...     

黑斑蛙歪头病病原米尔伊丽莎白菌的分离、鉴定及特性分析

为查明湖北石首大垸农场养殖的黑斑蛙（Rana nigromaculata）歪头病病原与致病原理，本研究应用微生物分离技术，从病蛙脑、肝、脾和肾脏组织中分离、纯化病菌，采用形态特征、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析进行细菌种类鉴定，通过组织病理学方法分析患病蛙病理损伤，及人工回归感染确定其致病性，并利用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果显示：分离菌（BSH3）与米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）聚为一支，结合该菌的形态学特征和生理生化特征，综合鉴定为米尔伊丽莎白菌。组织病理切片结果表明分离菌（BSH3）会导致蛙脑组织基质水肿，基质中出现空泡和炎性细胞浸润的现象；肝、脾和肾脏组织出现变性、坏死和炎症细胞浸润。人工回归感染试验显示，菌株可使黑斑蛙出现与自然发病蛙相似症状，半数致死浓度为6.3×10⁴ CFU/mL。药敏试验结果表明菌株已呈现多重耐药性，仅对少数检测抗生素（米诺环素、氟苯尼考、利福平和万古霉素）敏感，根据药敏试验结果及农业部水产用药规定，推荐使用氟苯尼考治疗该疾病。     

淡水白鲨头部溃烂病病原的分离鉴定及药敏试验

从患头部溃烂病的淡水白鲨(Pangasius sutchi)肝脏中分离到1株优势菌BS1,分别以腹腔注射、创伤浸泡和直接浸泡三种方式感染淡水白鲨。结果显示:该菌株能感染淡水白鲨,且毒力较强,腹腔注射0.2 m L该菌液(1×108cfu/m L)可导致受试淡水白鲨100%死亡,创伤浸泡感染(1×107cfu/m L)死亡率达83.3%,直接浸泡感染(1×107cfu/m L)死亡率为0%,受感染淡水白鲨出现与自然感染相同的症状。对菌株BS1进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。进一步选用16S rRNA对该菌进行分子鉴定,序列结果进行BLAST分析并构建进化树,结果表明:16S rRNA基因与Gen Bank上登录的嗜水气单胞菌的相应序列具有很高的同源性,进化树聚为一支。综合生理生化与分子鉴定结果,判定所分离的菌株为嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示:该菌株对左氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、妥布霉素、阿奇霉素9种药物高度敏感。