全放牧牦牛与舍饲牦牛瘤胃细菌多样性比较

以青海省黄南藏族自治州河南蒙古族自治县全放牧牦牛和青海省畜牧兽医科学院舍饲牦牛瘤胃内容物为样本,对牦牛瘤胃细菌多样性进行分析及比较。使用细菌通用引物进行瘤胃细菌16S rRNA基因序列的扩增,以16S rRNA序列分析技术分析瘤胃细菌多样性,并构建16S rRNA基因克隆文库。结果表明,放牧牦牛与舍饲牦牛瘤胃细菌都主要分为两大类:Firmicutes类和Bacteroidetes类。放牧牦牛瘤胃Firmicutes类所占比例(79.52%)比舍饲牦牛瘤胃Firmicutes类所占比例(62.79%)要高,Bacteroidetes类在瘤胃内所占比例放牧牦牛(19.27%)比舍饲牦牛(25.58%)要低。放牧牦牛与舍饲牦牛瘤胃内纤维降解菌的差别不大,都为瘤胃内优势菌群,但舍饲牦牛瘤胃内比放牧牦牛瘤胃内的蛋白降解菌和淀粉降解菌更丰富。     

徐淮白山羊瘤胃细菌和原虫的类群结构研究

 【目的】研究以稻草为主的日粮条件下徐淮白山羊瘤胃细菌和原虫的类群结构。【方法】以4只安装瘤胃瘘管的徐淮山羊为试验动物,PCR扩增瘤胃细菌16S rDNA序列,利用分子克隆与测序分析、细胞计数等技术,解析瘤胃细菌和原虫群体的类群组成。【结果】获得的细菌克隆基本归为两簇：与瘤胃球菌R.bromii YE282相似性为95%的XHGR1、与瘤胃R-7菌相似性为98%的XHGR3,XHGR2位于另立的R. flavefaciens簇。瘤胃球菌属细菌占细菌克隆总数的比例较高（33.33%）,原虫生物量略低于细菌,占瘤胃生物总量的44.83%。群体主要有内毛属、双毛亚科、前毛属、头毛属和等毛科等原虫,其中内毛属原虫比例最高为74.25%。【结论】以稻草为主的日粮条件下,徐淮白山羊瘤胃中细菌和原虫生物量相近,瘤胃球菌属细菌和内毛属原虫分别是瘤胃细菌和原虫区系的优势类群。     

用荧光染色法研究山羊瘤胃原虫对细菌吞噬速率的初报

 【目的】采用荧光染色标记细菌（fluorescence labeled bacteria,FLB）技术,研究山羊瘤胃中原虫对细菌的吞噬速率。【方法】利用4只装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊,采集瘤胃液以获取瘤胃原虫和细菌。试验设置清洗原虫祛除瘤胃自由细菌的荧光全标组（WFLB）及未清洗原虫保留瘤胃自由细菌荧光标记组（FLB）。【结果】WFLB组和FLB组的吞噬速率分别为398.4 cells/(cell•h)和230.4 cells/(cell•h),换算为细菌N为：2.15 pg N/(cell•h)/和1.24 pg N/(cell•h)。【结论】每天每头羊由原虫在瘤胃内循环中带出的细菌N损失在WFLB组和FLB组分别估计为103.2 mg N/(d•头)、59.5 mg N/(d•头),或者细菌蛋白损失为0.645 g/(d•头)和0.372 g/(d•头)。结果同时表明,荧光染色标记技术可以应用于瘤胃原虫对细菌吞噬速率的研究。     

体外共培养法研究瘤胃真菌对瘤胃细菌发酵的影响

采用体外厌氧共培养技术，研究了山羊瘤胃真菌对瘤胃细菌发酵的影响。结果表明：在瘤胃真菌与瘤胃细菌共培养24h内，瘤胃真菌对瘤胃细菌表现出一定的抑制作用，共培养组24h时底物稻草表观干物质消失率（5．85％）、总挥发性脂肪酸浓度（28．21mmol／L）及乙酸浓度（20．32mmol／L）显著低于瘤胃细菌培养组（10．49％、32．66mmol／L和24．39mmol／L）；而共培养组在48h和72h时稻草表观干物质消失率（24．37％、29．04％）均高于瘤胃细菌培养组（21．69％、26．41％）；试验结果同时显示，经灭菌处理的瘤胃真菌发酵液可显著降低瘤胃细菌对稻草片段的降解活力。     

牛瘤胃内主要细菌结构与功能探查

正通常年每毫升瘤胃液含10~9~10~(10)个细菌,种类达300多种以上,现已鉴定出60种瘤胃细菌。1纤维分解菌1.1瘤胃球菌白色瘤胃球菌和黄色瘤胃球菌是瘤胃中主要的纤维分解菌,均为严格厌氧型革兰氏阳性球菌。两种菌能产生大量的纤维素酶和半纤维素酶,将纤维素降解。黄色瘤胃球菌能产生结构复杂的木聚糖酶、多种内切酶和一种外切酶,可将结构复杂的纤维物质降解成纤维二糖、戊糖和挥发性脂肪     

瘤胃微生物不同种群对小麦秸体外降解的研究

实验设置5个处理组,研究瘤胃微生物不同种群对小麦秸的降解作用。结果发现：瘤胃细菌在整体上对纤维素性物质的降解力强;瘤胃真菌也能降解部分粗纤维类物质,但作用较小;瘤胃细菌和真菌在降解中具有一定的互作关系。体外干物质降解率、总挥发性脂肪酸、总气体产量、总甲烷气体产量、羧甲基纤维素酶活力可以作为评定瘤胃微生物降解活力的指标。     

瘤胃中微生物的多样性及其对饲料消化率的影响

在反刍动物的瘤胃内栖息着复杂、多样、非致病的各种微生物,包括瘤胃细菌、厌氧真菌和瘤胃原虫,还有少数噬菌体。瘤胃内容物中细菌为105￣108万个·mL-1,原虫为10￣102万个·mL-1,真菌为0.1￣10万个·mL-1。不同种或品种的反刍动物瘤胃微生物的种类和数量存在着差异,从而也影响宿主对饲料的消化率。     

棉酚对瘤胃真菌和细菌体外发酵稻草活力的影响

体外研究了不同质量浓度5、20、40 mg/L棉酚对瘤胃厌氧真菌和瘤胃细菌发酵稻草活力的影响。瘤胃真菌发酵试验中,各处理组的底物消失率均显著低于对照组(0)(P<0.05)。产气量结果表明,20、40 mg/L两试验组的发酵明显滞后于其它各组,且发酵24 h和48 h的累计产气量显著低于对照组及51、0 mg/L试验组(P<0.05),说明20 mg/L和40 mg/L的棉酚可显著抑制瘤胃真菌的发酵。在瘤胃细菌发酵试验中,51、0 mg/L棉酚处理组的底物消失率与对照组(0)无明显差异,而20和40 mg/L棉酚处理组的底物消失率显著低于对照组(P<0.05)。累计产气量结果表明,各浓度水平的棉酚对瘤胃细菌发酵无明显的滞后效应。因此,瘤胃真菌对棉酚较为敏感,而瘤胃细菌对棉酚有较强的耐受能力,但高浓度的棉酚对细菌发酵活力有一定的抑制作用。     

不同粗精比日粮对绵羊小肠中瘤胃微生物蛋白质利用的影响

用4 只装有瘤胃瘘管、十二指肠瘘管和回肠瘘管的去势(公母各半)萨福克羊(体重平均为45.5±5.2 kg),在不同粗精比日粮条件下,研究瘤胃细菌、纤毛虫体蛋白质在小肠内的利用情况。结果表明:到达十二指肠的瘤胃细菌和纤毛虫的量,随日粮中精饲料水平的提高而显著减少(P< 0.05)。与此相反,过瘤胃饲料蛋白质的量则显著增加(P< 0.05)。小肠内的细菌利用率显著受日粮变化的影响,而纤毛虫利用率则不易受日粮影响,且显著地高于细菌的利用率(P<0.05)。小肠内被吸收的细菌和纤毛虫对微生物氮的贡献率在全试验组中分别平均约为50% 。     

瘤胃原虫的作用及影响其数量的外源因素

反刍动物瘤胃内栖居着大量微生物,主要包括细菌、真菌和原虫,它们对于饲料在瘤胃内营养物质的降解、微生态环境的稳定起着十分重要的作用。通过查阅大量文献,在近几十年来国内外对反刍动物瘤胃原虫研究的基础上,对其在瘤胃内环境指标和营养物质代谢方面的作用予以系统阐述,从正反两方面的作用对原虫的去留进行客观评价,同时对调控原虫数量的措施加以探讨。     

基于MiSeq技术的枯草期放牧蒙古羊瘤胃细菌多样性分析

为了阐明枯草季节牧草对放牧蒙古羊瘤胃生理功能的影响,明确放牧蒙古羊瘤胃消化的限制性因素,随机选取终年放牧的6只蒙古羊,在枯草期通过口腔采取蒙古羊瘤胃液,利用MiSeq高通量测序技术分析了瘤胃细菌种群的结构和多样性。结果表明,共得到了2 774个操作分类单元(Operational taxonomic unit,OTU),平均每个样品OTU为462.30。放牧蒙古羊瘤胃细菌共有13个门、24个纲、30个目、59个科、85个属被鉴定。在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes,58.59%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,18.18%)为放牧蒙古羊瘤胃中的优势细菌种群;在科水平上,主要包括瘤胃菌科(Ruminococcaceae,15.43%)、毛螺菌科(Lachnospiraceae,14.86%)和克里斯蒂娜科(Christensenellaceae,11.90%);在属水平上,普雷沃氏菌属(Prevotella,2.89%)和Candidatus saccharimonas(2.89%)是放牧蒙古羊瘤胃中的优势种群。说明冬春季枯草期放牧蒙古羊瘤胃细菌表现出典型的纤维消化菌群特征,因此,为瘤胃菌科和毛螺菌科提供营养,能够有效改善蒙古羊瘤胃的发酵功能,提高其对牧草的消化率。     

泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌群落组成与多样性变化

本研究旨在探究泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌群落组成及其多样性的变化。共设置2个试验：试验1，选取20头泌乳中期健康高产荷斯坦奶牛，饲喂相同饲粮，持续8周，分别在第0、4、7周的第7天采集瘤胃内容物；试验2，选取30头泌乳中期健康高产荷斯坦奶牛，在基础饲粮的基础上补充20 g/d瘤胃保护蛋氨酸，持续8周，分别在第0、8周的第7天采集瘤胃内容物。分析2个试验在不同时间点采集到的瘤胃内容物的细菌群落组成与多样性变化，以及功能稳定性差异。结果发现：2个试验中，瘤胃细菌的α多样性、β多样性、功能稳定性在不同时间点之间都不存在显著差异（P>0.05）。试验1在高丰度细菌的门和属水平上分别发现6个与1个差异细菌，分别是放线菌门、变形菌门、蓝菌门、绿弯菌门、互养菌门、纤维杆菌门与Lachnospiraceae＿NK3A20＿group；试验2在高丰度细菌的门和属水平上分别发现3个与1个差异细菌，分别为放线菌门、螺旋体门、迷踪菌门与unclassified＿f＿Lachnospiraceae。由此可见，在相同的饲粮条件下，泌乳中期荷斯坦奶牛瘤胃细菌组成随时间变化的程度有限，其多样性与功能稳定性均未发...     

基于DGGE和T-RFLP分析采食不同粗饲料梅花鹿瘤胃细菌区系

【目的】细菌区系在梅花鹿（Cervus nippon）瘤胃发酵中发挥着重要作用,然而有关梅花鹿瘤胃细菌区系的研究鲜有报道。研究梅花鹿瘤胃细菌区系,为梅花鹿瘤胃发酵调控提供分子生物学依据。【方法】选取4头2岁龄的装有永久性瘤胃瘘管的成年雄性梅花鹿为研究对象,分别饲喂以柞树叶（OL组,梅花鹿A和B）和玉米秸秆（CS组,梅花鹿C和D）为主要粗饲料的日粮,持续饲喂30 d。通过瘤胃瘘管取瘤胃内固液混合物,提取瘤胃微生物基因组DNA。扩增瘤胃细菌16S rRNA基因V3区以及16S rRNA基因,分别用于DGGE和T-RFLP分析。DGGE图谱进行聚类分析,并切取优势条带进行克隆测序,鉴定瘤胃内细菌组成。根据T-RFLP图谱结果计算细菌群落的多样性、优势度、均匀度和丰富度,通过Microbial Community AnalysisⅢ（MiCAⅢ）数据库推测T-RFs可能代表的微生物种类,并进行T-RFLP图谱的聚类分析。【结果】DGGE图谱聚类表明,CS组和OL组瘤胃细菌区系相似性低于65%,表明粗饲料种类影响梅花鹿瘤胃细菌区系。OL组梅花鹿A和B的DGGE图谱相似度大于70%,CS组梅花鹿C和D的DGGE图谱相似性大于75%,而且同组不同个体之间瘤胃细菌区系存在差异。OL组和CS组分别获得20和24个DGGE特异性条带。序列分析表明,CS组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门,而OL组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和互养菌门。OL组与CS组中存在大量Prevotella spp.,但不同组中Prevotella spp.在种水平组成不同,主要纤维降解菌为Clostridium spp.与Eubacterium spp.。T-RFLP结果显示,梅花鹿D（CS组）具有最高的丰富度、多样性、均匀度和最低的优势度,梅花鹿A和B的各项指数相近但低于梅花鹿D,说明OL组中的粗饲料（柞树叶）影响瘤胃中微生物的相对生物量。梅花鹿C和D的各项指数相差较大而且梅花鹿C的指数低于梅花鹿A和B,表明同组不同个体之间存在差异。81、214、272和308 bp的T-RFs为OL组优势条带,90、95、175、273和274 bp的T-RFs为CS组优势条带,161、259、264、266和284 bp的T-RFs为共同条带。根据MiCAⅢ结果,这些T-RFs代表细菌归类于拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和酸杆菌门。T-RFs图谱聚类表明,4头梅花鹿T-RFs聚为两类,粗饲料来源影响梅花鹿瘤胃细菌T-RFs图谱特征,其中梅花鹿A、B和C的T-RFs特征条带图谱相似。【结论】Prevotella spp.是梅花鹿瘤胃优势细菌,但不同粗饲料影响梅花鹿瘤胃细菌区系组成。     

牛羊营养成分与瘤胃生态环境剖析

<正>针对瘤胃内容物的营养成分以及生态环境进行剖析,为牛羊也喂配合饲料奠基。1瘤胃内容物稀释率和外流率牛羊食物营养成分是粗纤维、淀粉、粗脂肪和粗蛋白质,细菌和厌氧性真菌消化纤维,细菌和纤毛虫消化淀粉、脂肪和植物性蛋白质。微生物将食物消化成固体和液体两种形态,液体分布在瘤胃腹囊的底部,固体分布在中间,固体发酵产生的气体分布在底部。瘤胃内容物借瘤胃壁有节律性     

在反刍动物饲养中尿素的合理使用

尿素是当前反刍动物饲养中使用最多的非蛋白氮源。它在瘤胃中被尿素酶降解释放NH_3,构成瘤胃降解氮的一部分,主要是为瘤胃细菌提供合成细菌细胞蛋白所需的NH_3—N。然而,适宜的瘤胃NH_3—N不是决定细菌最大生长的唯一因素,还必需要有能被微生物迅速利用的能量,以及一定的天然氨基酸和理想的瘤胃稀释率、PH等。根据这些因素,特别是日粮的能量和可降解蛋白含量,才能确定尿素的适宜添加量。只有在饲粮的瘤胃可降解蛋白不能满足瘤胃微生物最大生长的需要时,补充尿素才是有益的。否则不仅会造成浪费,而且还会造成NH_3中毒。另外,含有尿素的化合物和混合物,由于结构和加工处理不同,会影响尿素的适口性和释放NH_3的速度,进而不同程度地影响微生物生长效率。     

不同pH对瘤胃细菌数量和菌群结构的影响

【目的】试验旨在研究瘤胃不同pH下瘤胃酸中毒相关细菌数量和瘤胃细菌菌群结构的变化。【方法】选取5头干奶期荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体,调节瘤胃液pH分别为6.5、5.8、5.5、5.2和5.0。培养3 h后,采用qPCR技术测定瘤胃酸中毒相关细菌数量,采用16S rDNA高通量测序技术研究瘤胃细菌菌群结构的变化。【结果】（1）瘤胃pH对白色瘤胃球菌（Ruminococcus ablus）的相对数量没有影响（P>0.05）,但显著影响了乳酸产生菌和乳酸利用菌的相对数量（P<0.05）。其中牛链球菌（Streptococcus bovis）相对数量随着pH的下降而升高,在pH 5.0处极显著高于其余各组（P<0.05）;埃氏巨型球菌（Megasphaeraelsdenii）、反刍兽新月单胞菌（Selenomonas ruminantium）及乳酸杆菌（Lactobacillus species）随pH下降呈现先升高后下降的趋势,pH分别在pH 5.5或pH 5.2处达到最大值（P<0.05）;(2)α多样性结果显示,瘤胃细菌数量和菌群的丰富度及多样性呈现随瘤胃pH下降先...     

定量检测瘤胃纤维降解细菌的RT-PCR法

 【目的】建立一种适用于瘤胃主要纤维降解细菌的RT-PCR定量检测方法,通过培养技术监测瘤胃纤维降解细菌在不同环境下的数量变化,为深入研究反刍动物瘤胃发酵机理以及对纤维素资源的有效利用提供技术支持。【方法】分别以Fibrobacter succinogenes、Ruminococcus flavefaciens与Ruminococcus albus 的16SrDNA为靶序列设计相应的引物,建立SYBR GreenⅠRT-PCR定量体系。【结果】本研究所采用的引物及相应的PCR反应体系具有较高的特异性和灵敏度,检测极限可达50拷贝。采用RT-PCR方法检测瘤胃纤维降解细菌的定量结果与传统计数结果具有一致的变化趋势,相关性较高（r2=0.9591,P＜0.05）,表明RT-PCR定量检测方法可以较为准确、迅速的检测绵羊瘤胃纤维降解菌群的数量随环境变化的情况。【结论】本研究所建立的RT-PCR检测方法能够较准确反映瘤胃纤维降解细菌数量的变化。     

游离棉酚对绵羊瘤胃发酵和微生物区系的影响

文章旨在分析游离棉酚对绵羊瘤胃发酵及微生物细菌的影响。将2018年9月至2020年4月作为研究时段,将20只身体健康,体重在50kg左右的蒙古半细毛绵羊随机分成两组,按要求记录为对照组与实验组,组内各设置10只绵羊。对照组绵羊日粮中不增加游离棉酚,实验组绵羊日粮中添加0.1g/kg的游离棉酚。在1个月的饲养试验后,相关工作人员对绵羊瘤胃pH值、干物质降解率、瘤胃发酵类型进行评估,分析差异。本次研究结果显示,实验组与对照组绵羊瘤胃pH、干物质降解率、瘤胃发酵类型无显著差异（P>0.05）;与对照组,饲喂2h后,实验组绵羊瘤胃的氨氮浓度明显高于对照组,且总挥发性脂肪酸含量显著降低（P<0.05）。实验组细菌数量相较于对照组明显升高,但其中的真菌数量明显降低,各数据经对比分析差异显著（P<0.05）。结论：研究发现,瘤胃细菌及纤维分解菌和原虫可能对提高反刍动物游离棉酚的耐受性有良好作用,相关研究人员应引起重视,并对这一指标进行综合管理,只有这样才能使绵羊成长发育得到保障。     

应用人工瘤胃法调制小麦秸的研究 第四部分:调制过程中粗纤维的消化率与瘤胃细菌数量变化关系的研究

一引言应用人工瘤胃法调制小麦秸,以提高其营养价值,主要表现在经过调制后挥发性脂肪酸、纯蛋白质、及维生素 B 组含量的增加,已在本报告第一、二、三部分阐明;但是这些营养物质的增加是与瘤胃细菌的生长繁殖及小麦秸粗纤维的分解都有相关。过去学者研究有关人工瘤胃法的问题,每每注意一个部分而对另一部分联系不够。例如克维怯(Quicke et al.,1959)应用人工瘤胃法,只研究比较体外消化试验与常规消化试验所测定的纤维质消化率。勒肥弗里(Le Fevre。et al.,1960)利用绵羊癌胃细菌及牛的瘤胃细菌进行人工瘤胃法试验,比较它们对同一牧草标样的粗纤维消化率有无差异。车尔齐(Church,1960)的研究比     

田专家信箱

<正>热线电话:0371-65993062河南汤阴的张先生咨询:为什么必须给肉牛饲喂青、粗饲料?答复:肉牛除了具备与猪、禽等相似的物理、化学和后消化道的微生物消化方式以外,其瘤胃、网胃和瓣胃特别是瘤胃强大的微生物消化决定了它必须以青、粗饲料为主。瘤胃微生物区系由已知的六十几种细菌和纤毛虫组成,在1毫升瘤胃内容物中,大约有细菌100亿个、纤毛原虫100万个,正是这些强大的瘤胃