流式细胞仪测定奶牛全血多形核白细胞的吞噬功能和呼吸爆发作用

试验建立了用流式细胞仪同时测定奶牛全血中多形核白细胞（PMN）吞噬功能和呼吸爆发作用的微量检测方法。奶牛全血用二氢诺丹明处理后，与直径为1．75μm的蓝色荧光乳胶微球培养，PMN内的二氢诺丹明被呼吸爆发过程中产生的还原性物质转化成发绿色荧光的诺丹明（ROD）。用流式细胞仪计数PMN，仪器可在数秒钟内计数几十万个PMN，识别PMN是否吞噬蓝色荧光微球和／或含POD，并可检测每个PMN所吞噬的微球数量。当血液中含细胞松弛素B为1、2．5、5mg/L时，PMN的吞噬功能和呼吸爆发作用均下降。     

MTT法测定以牛血液及乳中多形核白细胞的杀菌功能

金黄色葡萄球菌和多形核白细胞于37℃培养一定时时间，用皂素破坏白细胞，然后加入3－（4，5－二甲基噻唑－2－YL）2，5－二苯基－四唑溴盐（MTT）溶液，未被白细胞杀死的金黄色葡萄球菌将MTT转化成蓝紫色甲沉淀，用二甲亚砚溶解沉淀，并用酶标仪测定甲相对含量，以此推算白细胞杀菌能力，结果表明，MTT法重复性好，一次可测定多个样品，与平板计数法比较，有较好的一致笥，用该法测定奶牛血液和乳中白细胞的杀菌功能，结果牛乳中白细胞杀菌功能显著低于血液中的白细胞，这有可能是奶牛乳腺易受感染的一个原因。     

多形核白细胞与巨噬细胞的超微结构及抗感染作用

基础免疫学(fundamental immunology)的快速发展是与分子生物学(moleocular biology)、细胞生物学(cell biology)和遗传学(genetics)的进步与应用密不可分.由于分子生物学概念、方法和技术的引入,细胞生物学在近十年取得了突破性的进展,并逐渐形成新的概念和新的领域.犹如中性粒细胞常被认为是一类终末细胞,仅与吞噬功能有关.现在研究资料表明,PMN能产生一系列细胞因子,参与细胞免疫与体液免疫的调节.因此就有必要对其功能应在较全面了解基础上,重新予以认识.     

多形核白细胞与巨噬细胞的超微结构及抗感染作用(续)

(接2007年第1期P43)如Ⅰ型颗粒中的髓过氧化物酶是中性粒细胞所特有,即使在有强吞噬作用的巨噬细胞中也极少或完全没有这种酶。在细胞化学中,一般将髓过氧化物酶作为中性粒细胞的标志。中性粒细胞受细菌产物、抗原抗物复合物、难溶的晶状物或脂溶性物质的作用时,细胞的颗粒内容     

奶牛乳房炎与核转录因子κB基因的表达调控

核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,参与机体的免疫反应、细胞黏附、细胞分化、细胞增殖与凋亡及应激反应等.在奶牛感染乳房炎时,大部分涉及中性白细胞移行和激活的炎性蛋白质的编码基因在他们的启动子区都包含一个可结合NF-κB的κB位点,因此在一定程度上依赖NF-κB调控这些基因的表达.笔者详细的阐述NF-κB基因在奶牛乳房炎发病过程中的特点、作用和表达机制,为从分子水平认识和治疗奶牛乳房炎提供一定的文献支持.     

六味地黄丸对乳我形核白细胞的免疫调节作用

以水提醇沉法制备六味地黄丸药液，处理乳牛外周血和乳中吞噬细胞，应用３－（４，５－二甲基噻唑－２－ＹＬ）２，５－二苯基－四唑溴盐（ＭＴＴ）法和硝蓝四氮唑（ＮＢＴ）法测度六味地黄丸乳牛多形核白细胞（ＰＭＮＬＳ）杀茵功能和超氧基释放水平的影响。结果表明，六昧地黄丸能极显著地促进外周血及乳中多形核白细胞的杀茵能力（Ｐ＜０．０１），能显著地提高血液和乳中吞噬细胞超氧基的释放水平；在适当浓度范围内，六味地黄丸     

牛血液多形核白细胞吞噬功能检测方法的研究

以啤酒糖酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）为吞噬材料,用吖啶橙染色指示牛血液多形核白细胞的吞噬活性。该方法直观、简便、可靠,一项试验可同时获得吞噬百分率、杀伤百分率、吞噬指数和杀伤指数４项指标,从不同角度反映了机体免疫功能状态。此外,用透射电镜和扫描电镜观察了牛血液多形核白细胞吞噬经牛血清调理的啤酒糖酵母的情况。     

奶牛乳房炎的综合预防措施

奶牛乳房炎是奶牛最常见的疾病之一，也是对奶牛生产危害性最大的疾病，不仅对乳产量、质量有很大影响，还延长奶牛产后发情和妊娠时间，严重时还使奶牛丧失生产能力而被淘汰，给我国奶牛业的发展造成了极其严重的经济损失，所以要做好奶牛乳房炎的预防工作迫在眉睫。     

A Low-molecular-weight Fraction of Bovine Colostrum and Milk Enhances the Oxidative Burst Activity of Polymorphonuclear Leukocytes

Bovine colostrum and milk contain many immunomodulatory components. The low-molecular-weight fraction (<10 kDa) was separated from colostrum and milk by gel filtration chromatography, and its effect on the oxidative burst of bovine polymorphonuclear leukocytes (PMNL) was investigated in vitro. The oxidative burst activity induced by Staphylococcus aureus was considerably enhanced when PMNLs were incubated with this low-molecular-weight fraction. However, phorbol 12-myristate 13-acetate did not trigger a burst after priming with this fraction. The oxidative burst activity enhanced by this fraction was reduced after heating. These results confirmed that a low-molecular-weight substance(s) of less than 10 kDa, present in bovine milk and colostrum, enhances the oxidative burst activity of PMNL.     

奶牛血和乳中性粒细胞的形态与功能研究概述

中性粒细胞(PMN)是感染性奶牛乳腺炎的重要防御屏障。文章着重介绍了奶牛PMN在光学显微镜、透射电子显微镜和扫描电子显微镜下的形态特点,并叙述了PMN动力学和各类PMN的生长期、PMN生存期调节与发生奶牛乳腺炎之间的关系,最后提出奶牛PMN的研究方向。     

Adherence as a Prerequisite for Infection of the Bovine Mammary Gland by Bacteria

Using a simple in vitro test it was demonstrated that staphylococci, Streptococcus agalactiae, and micrococci, the species of bacteria which are commonly isolated from udder infections, adhered to mammary gland epithelial cells readily and in large numbers. Some strains of organisms which are associated with sporadic outbreaks or occur less commonly, like Str. dysgalactiae and Str. uberis, adhered moderately. Escherichia coli, Klebsiella spp., Corynebacterium pyogenes, C. bovis, Str. bovis, and Str. faecalis, species which are isolated occasionally, adhered poorly. From these studies, it appears that selective adherence of bacteria to the epithelial cells is a factor contributing to the ability of organisms to infect the mammary gland and may, therefore, be considered an important stage in the pathogenesis of bovine mastitis.     

Study on Effect of IGF-1 on Proliferation and Apoptosis of Bovine Mammary Epithelial Cells by Adding Inhibitor

The test was aimed to study the effect of insulin-like growth factor 1(IGF-1) on the proliferation of bovine mammary epithelial cells (BMECs),and provide a theoretical basis for the subsequent regulating mammary gland development using IGF-1. The optimal IGF-1 concentration for inhibiting BMECs apoptosis was obtained by measuring the apoptosis rate at 12, 24, 48 and 72 h after the addition of IGF-1 at four groups (0, 10, 50 and 100 μg/mL). Then divided into six groups:BMECs group, BMECs+IGF-1 group, BMECs+LY294002 group, BMECs+IGF-1+LY294002 group, BMECs+RAPA group and BMECs+IGF-1+RAPA group,and the apoptosis rates were detected by flow cytometry. The results showed that the heterologous IGF-1 had an inhibitory effect on the apoptosis of BMECs with an optimal concentration of 50 μg/mL. The apoptosis rates of BMECs+IGF-1+LY294002 and BMECs+IGF-1+RAPA groups were extremely significantly higher than BMECs+IGF-1 group (P<0.01). This study suggested that IGF-1 could activate the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway and thereby inhibit the apoptosis of BMECs. Moreover, IGF-1 might also promote the "repair" mechanism for the inhibited PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, and therefore make it reparticipate in BMECs life process.     

添加通路阻断剂对IGF-1影响奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的研究

试验旨在研究胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）增殖的影响,为后期利用IGF-1调控乳腺发育奠定理论基础。以奶牛乳腺上皮细胞为材料,首先分4组分别外源添加0（对照组）、10、50、100 μg/mL IGF-1且分别培养12、24、48、72 h,测定抑制BMECs凋亡率的最佳浓度;然后分6组：单纯BMECs组、BMECs+IGF-1组、BMECs+LY294002组、BMECs+IGF-1+LY294002组、BMECs+RAPA组和BMECs+IGF-1+RAPA组,采用流式细胞术测定各组细胞凋亡率。结果表明,外源性添加IGF-1对BMECs凋亡率具有抑制作用,最佳浓度为50 μg/mL;BMECs+IGF-1+LY294002与BMECs+IGF-1+RAPA组细胞凋亡率均极显著高于BMECs+IGF-1组（P<0.01）。推断IGF-1能够活化PI3K/Akt/mTOR信号通路,参与BMECs凋亡的调控作用,进而抑制BMECs细胞凋亡;IGF-1可能会对被抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路产生"修复"机制,使其能够重新参与BMECs的生命进程。     

奶牛乳腺免疫与乳腺炎易感性研究进展

奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业最常见的疾病之一,给奶牛生产造成巨大的经济损失。其乳腺防御机理、发病机理虽取得了一定的研究成果,但深层次的一些问题仍然未能弄清楚,在这方面还需继续进行大量的研究工作。现就国内外奶牛乳腺自我防御方面的一些机理进行讨论,从乳汁血液当中的免疫活性细胞、体液因子、细胞因子等对乳腺防御方面的功能作详尽的叙述,尤其对泌乳周期中各种白细胞群的分布、功能以及影响奶牛围产期阶段免疫机能下降的一些因素作了分析,对了解和预防奶牛乳腺炎的发生具有一定的参考和应用价值。     

硒对奶牛乳腺炎的调节作用及抗炎机制

奶牛乳腺炎在临产和泌乳期奶牛中发病率较高,严重影响乳腺健康和牛奶生产,对世界范围内的奶牛业造成重大经济损失。微量元素硒可降低奶牛乳腺炎的发病率和严重程度。本文从硒与奶牛乳腺炎的关系、硒在炎症中对先天性免疫和获得性免疫的调节作用以及硒对炎症相关信号转导机制的调控等几个方面进行了综述,为通过饲粮补硒以改善奶牛乳腺健康提供理论支持。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌8种毒力基因的PCR检测

为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和FnBPB 8种毒力基因在临床型乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(70株)、100.0%(70株)、0(0株)、5.7%(4株)、100.0%(70株)、11.4%(8株)、97.1%(68株)和100.0%(70株);在隐性乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(55株)、100.0%(55株)、0(0株)、70.9%(39株)、98.2%(54株)、9.1%(5株)、100.0%(55株)和100.0%(55株)。结果表明,nuc、ClfA、Hla、Hlb和FnBPA 5种毒力基因是引起奶牛乳房炎的SA的最主要毒力基因;PVL基因可能是引起隐性乳房炎的重要致病基因。