感染传染性法氏囊病毒雏鸡的免疫抑制及其机理

本实验共用412只滨白雏鸡,分别在1日龄或4周龄时感染 IBDV,检测了雏鸡感染后其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中 IgG,IgM 和 IgA 含量、血液 T 细胞免疫功能和脾脏 B 细胞抗体生成功能、血液 T,B 细胞、淋肥细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠、哈德尔腺、支气管粘膜中浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE+T)数量的动态变化,结果如下:(1)雏鸡感染 IBDV 后,法氏囊、脾脏的浆细胞明显减少,脾脏 B 细胞抗体生成功能降低;胸腺、法氏囊、脾脏的 ANAE+T 细胞数量显著下降,说明感染鸡免疫器官的体液免疫功能和细胞免疫功能显著减弱.(2)IBDV 感染雏鸡引起呼吸道和消化道局部免疫组织一哈德尔腺、支气管粘膜、盲肠扁桃体、十二指肠粘膜固有层,丕氏斑的浆细胞和 ANAE+T 细胞较对照鸡显著减少;泪液、气管液、胆汁、肠液中 IgG,IgA,IgM 含量明显下降,表明感染鸡呼吸道和消化道局部的细胞免疫和体液免疫水平均显著降低.(3)感染鸡外周血液 T,B 细胞数量减少,T 细胞功能降低,IgG,IgA,IgM 含量明显下降,表明和标志全身体液免疫和细胞免疫水平降低,是免疫器官细胞免疫和体液免疫功能显著降低的反映和表现.(4)1日龄雏鸡感染 IBDV 后,B 细胞功能抑制时间明显长于 T 细胞,证明感染鸡 B 细胞功能的损害重于 T 细胞.(5)4周龄雏鸡感染 IBDV 引起的免疫抑制程度低于1日龄感染鸡,呈现一定的感染日龄差异.     

感染传染性法氏囊病毒雏鸡新城疫疫苗二次免疫的免疫增强效应

本实验以 IBDV 感染1日龄滨白雏鸡,在感染鸡14和28日龄或14日龄时点眼,滴鼻接种 Lasota 疫苗,测定了其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中 IgG,IgM 和 IgA 含量,血清、泪液、气管液 HI 滴度、血液 T 细胞免疫功能和脾脏 B 细胞抗体生成功能、血液 T、B 细胞和淋巴细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺、丕氏斑、十二指肠、支气管粘膜的浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE~+T)数量的动态变化,结果表明:1.1 日龄感染 IBDV 雏鸡 ND 疫苗二次免疫后,其法氏囊,脾脏、哈德尔腺、支气管粘膜、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠粘膜固有层的浆细胞数量、外周血液 B 细胞数量均明显增高,脾脏 B 细胞抗体生成功能明显增强,血清、泪液、气管液中 IgG,IgA,IgM 含量和 HI 滴度、肠液、胆汁的 IgA,IgM,IgG 含量均显著高于感染一次免疫鸡,但明显低于健康对照二次免疫鸡。感染鸡 ND 二免后,法氏囊出现淋巴滤泡增生,脾脏和盲肠扁桃体的淋巴小结数量增多,直径增大。表明感染鸡 ND 二免后,其全身和消化道、呼吸道局部的体液免疫应答水平较感染一次免疫鸡明显增高,呈现免疫增强效应。2.感染鸡 ND 二免后,其免疫器官和消化道,呼吸道局部免疫组织的 ANAE~+T 细胞数量、外周血液 T 细胞数和免疫功能均较感染一免鸡明显升高。但显著低于对照 ND 二免鸡,证明感染鸡 ND 二免后,其全身和消化道、呼吸道局部的细胞免疫应答较感染一免鸡显著增强。3.ND 强毒攻击后,感染二免鸡的免疫保护率明显高于感染一免鸡,低于对照二免鸡,表明 ND 二次免疫对 IBDV 感染鸡的免疫保护力具有明显的加强作用,这与其全身和消化道、呼吸道局部的体液免疫和细胞免疫应答增强密切相关。     

单克隆抗体在鸡传染性法氏囊病上的应用

本文将纯化的鸡法氏囊病毒免疫BALB/C小白鼠后,用免疫脾细胞与骨髓瘤细胞SP_2/O在PEG存在下进行融合,经HAT筛选,并通过3次克隆化后,获得3株能稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株。经ELISA测定,均属于IgG_1亚类。通过阻断试验证明其作用的特异性,并证明其在pH6～8下1小时,37℃时2天、-30℃下3个月均对效价无明显影响,而在60℃下30分钟,效价下降。应用特异性单抗作为诊断试剂来检测鸡法氏囊病是一种快速、灵敏、准确而有效的方法,仅需极微量的抗原(1μg/ml)即可显示阳性反应,不同品种发病鸡(三黄鸡、罗斯鸡、AA鸡)口服单抗一次,均有明显的疗效;发病鸡越早服用单抗、效果越好。初步建立了单抗制剂的检测体系及治疗方法、应用于BD的防治上。     

感染传染性法氏囊病毒雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答抑制和机理

本研究在雏鸡1日龄时感染法氏囊病毒,14日龄时点眼、滴鼻接种新城疫疫苗,检测了感染鸡ND免疫后其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中IgG,IgM,IgA含量,血液T细胞免疫功能和脾脏B细胞抗体生成功能、血清、泪液和气管液HI滴度的变化,测定了血液T,B细胞与淋巴细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺、十二指肠粘膜、丕氏斑,支气管粘膜的浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性T细胞(ANAE~+T)数量的动态变化。结果如下: 1)1日龄感染IBDV雏鸡ND免疫后,其法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体、十二指肠粘膜固有层、丕氏斑、哈德尔腺、支气管粘膜固有层的浆细胞数量和脾脏B细胞抗体生成功能均显著降低;外周血液B细胞数量、HI滴度、血清、泪液、气管液、肠液和胆汁IgG,IgA,IgM含量较对照免疫鸡显著减少,这表明感染鸡对ND疫苗的全身和消化道、呼吸道相关局部的体液免疫应答功能显著抑制。 2)感染鸡ND免疫后,其胸腺、脾脏、法氏囊、消化道和呼吸道相关局部免疫组织的ANAE~+T细胞数量、外周血液T细胞免疫功能和T细胞数量均显著低于正常免疫鸡,这说明感染鸡对ND疫苗的全身和局部细胞免疫应答机能显著减弱。 3)ND强毒攻击后,感染鸡的ND免疫保护率明显低于健康免疫鸡,其免疫保护效应降低,与其对ND强毒的全身和消化道、呼吸道局部体液免疫和细胞免疫反应水平显著下降密切相关。     

雏鸡感染法氏囊病毒后免疫器官中浆细胞的变化

本项研究对人工感染传染性法氏囊病毒(IBDV)的1日龄雏鸡和未感染 IBDV的相应对照雏鸡的免疫器官组织——法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体和哈德尔腺中的浆细胞总数、成熟浆细胞和前浆细胞数量及其分布的动态变化进行了检测。结果表明,1日龄雏鸡感染 IBDV 后,免疫器官组织中浆细胞总数和成熟浆细胞数明显低于对照雏鸡;前浆细胞数在感染初期也呈现一定的减少。浆细胞的上述变化在法氏囊的淋巴小结皮质、脾脏的红髓和鞘动脉外周、盲肠扁桃体的弥散区、哈德尔腺的集合小管和排泄管周围、胸腺的髓质等区域最明显。表明1日龄雏鸡感染IBDV 后,免疫器官的体液免疫反应呈现明显抑制。     

感染法氏囊病毒雏鸡新城疫2次免疫后免疫器官组织的免疫学变化

研究了１日龄感染法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）２次免疫及强毒攻击后免疫器官组织中浆细胞、酯酶阳性Ｔ细胞（ＴＡＮＡＥ＋）、巨噬细胞（ＭΦ）和淋巴细胞数量的动态变化，结果表明，１ＢＤＶ感染鸡中枢及外周免疫器官以及呼吸道、消化道局部免疫组织对ＮＤ苗的２次免疫应答具有明显的增强作用，并提示ＢＤＶ所致的免疫抑制不是不可逆的，但不能完全恢复到正常免疫应答水平。     

雏鸡感染传染性法氏囊病病毒后对新城疫疫苗的免疫反应

本文对人工感染传染性法氏囊病病毒(IBDV)雏鸡接种新城疫(ND)疫苗后的红细胞凝集抑制(Hi)抗体滴度和免疫保护力进行了检测。结果表明,人工感染IBDV雏鸡一次接种ND疫苗后的Hi抗体滴度和免疫保护力,明显低于未感染IBDV的对照雏鸡;人工感染IBDV雏鸡二次接种ND疫苗后的Hi抗体滴度和免疫保护力,比一次接种ND疫苗时明显升高。     

雏鸡感染法氏囊病毒后血清免疫球蛋白的动态

本项研究对传染性法氏囊病毒(IBDV)人工感染1日龄和4周龄雏鸡后,1～8周血清IgM,IgG和γ-球蛋白含量的动态变化进行了检测。结果表明,1日龄和4周龄雏鸡感染IBDV后,血清IgM和IgG含量均明显低于对照雏鸡,而γ-球蛋白含量仅呈一过性降低,其中血清含量降低的程度和持续时间均较IgG明显。1日龄雏鸡感染IBDV后血清IgM和IgG含量的下降较4周龄感染雏鸡明显,呈现一定的感染日龄差异。     

禽传染性支气管炎——肾变病型病毒的分离和初步鉴定

从发病雏鸡的肾脏中分离到一株禽传染性支气管炎——肾变病型〔AvianInfectious Bronchitis(IB)——Nephrosis Form〕病毒。经盲传三代接种鸡胚后,出现典型的侏儒胚病变。该病毒能被乙醚、氯仿灭活,经56℃30分钟后被灭活,但能抵抗 pH2 30分钟。在电子显微镜下,病毒粒子直径为103nm,有19nm 宽的囊膜,囊膜上有典型的球状突起呈花冠状。病毒粒子内部有一典型的马蹄型结构     

鸡传染性支气管炎病毒血凝性的研究

用中国和澳大利亚分离的Ａ型魏氏梭菌培养液、Ⅰ型卵磷酯酶Ｃ和胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），制备的血凝抗原能凝集鸡红细胞，为鸡传染性支气管炎的诊断提供了方法。对鸡传染性支气管炎Ｍ（４１）、Ｈ（１２０）、Ｈ（５２）、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ、ＧＩＢＶ等７个毒株进行了血凝性的比较，以Ｈ（１２０）毒株血凝价最高，其次是Ｍ（４１）、ＧＩＢＶ、Ｇｒａｙ，而Ｈ（５２）、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ等毒株血凝性低或无血凝性。作者还对影响鸡传染性支气管炎病毒血凝试验的各种因素进行了研究。     

雏鸡感染传染性法氏囊病毒后血液的T细胞变化

本项研究对雏鸡感染传染性法氏囊病毒(IBDV)后,1～8周外周血液的 ANAE~+淋巴细胞(T 细胞)、淋巴细胞和白细胞数量的动态变化进行了检测。结果表明,1日龄雏鸡感染 IBDV 后,其血液中 ANAE~+,淋巴细胞数量明显低于对照雏鸡,表明其细胞免疫机能降低;4周龄雏鸡感染 IBDV 后,其 ANAE~+淋巴细胞数量呈一过性降低,变化不如1日龄感染雏鸡明显,说明 IBDV 对雏鸡存在感染年龄差异;对 ANAE~+淋巴细胞绝对数的检测较百分比能更真实地反映 IBD 鸡的细胞免疫功能变化的实质。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的定量检测

以免抗鼠 IgG 作为抗血清,首先验证了应用单向琼脂扩散法与酶联兔疫测法(ELISA)测定中试样品中抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)单抗浓度的相应关系;以 DEAE 纤维离子交换层析法纯化的鼠 IgG(3.8mg/ml)作标准样品,以单向琼扩法确定中试样品 F.中具有生物活性单抗含量为330uG/ml,并以 F.作为 ELISA 标准样品,作标准曲线,检测不同样品中抗 IBDV 单抗含量皆在50ug/ml(此为1:10稀稀应用的浓度标准值)以上,ELISA 效价皆在10~(-4)以上。证明了我们的中试产品 OD 值在0.050以上,都可以1:10稀释,可靠地投放市场广泛应用。     

禽传染性支气管炎病毒纤突蛋白的研究进展

本文对禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）纤突蛋白的形态，结构，免疫学活性，血凝活性，与病毒血清型的关系，尤其是其分子生物学研究的新近进展进行了综述，以期对ＩＢＶ基因工程疫苗的制备及疾病的快速诊断和防治打下基础。     

腺胃病变型鸡传性支气管炎病毒暂定名的研究

通过对我国"鸡传染性腺胃病"病原分离、鉴定、病原分离株的抗原性和血清型分析、病原分离株S1纤突基因克隆、全序列测定等多方面系统研究和分析比较,首次在我国提出并证明本病原是致腺胃病变型为特征的鸡传染性支气管炎病毒.     

含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建

以含有鸡传染性支气管炎病毒Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因的重组质粒ｐＵＣ１８－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＵＣ１８－Ｓ‘１．Ｈｏｌｔｅ为材料,分别构建了可表达ＩＢＶ Ｓ１基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（含ＩＢＶ先导序列）,ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（ＩＢＶ先导序列为融合短肽）,ｐＡｃＧＨＬ－Ｃ－Ｓ１,Ｈｏｌｔｅ。     

鸡传染性法氏囊炎病毒的分离与提纯

取接种4周龄雏鸡的法氏囊,经匀浆,高速离心,超速离心,CsCI 密度梯度离心,可获得纯化的鸡法氏囊炎病毒(IBDV)条带。通过电子显微镜观察,说明 IBDV 呈球状,直径约60nm,无囊膜,其浮力密度为1.32g/ml。本试验所分离的病毒粒子的平均含量为957μg/ml,病毒有活力,并具有抗原的特异性。     

传染性腺胃炎病鸡中分离出的呼肠孤病毒

从患有鸡传染性腺胃炎的病鸡肿胀腺胃中分离到的一株病毒，用电镜技术、病理组织学技术、免疫学试验、病毒毒力试验对其进行了系统的鉴定，发现在病鸡腺胃细胞中有包涵体，病毒粒子呈圆形，无囊膜，直径60－80nm，呈类晶格状排列。分离株病毒对牛、羊、兔、鸡、猪及人“O”型血红细胞无血凝性，与鸡呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应，在琼扩板上形成沉淀线。分离株病毒可致鸡胚发育迟缓，胚体出血，在绒毛尿囊膜上形成痘斑，可使7日龄攻毒的雏鸡表现自然发病鸡的病状和病变，上述结果表明该分离病毒株为呼肠孤病毒属成员。动物实验表明，该病毒可能是鸡传染性腺胃炎的原因之一。