新城疫病毒中国株F48E9融合蛋白基因序列分析

该研究经全自动序列测定,获得了新城疫病毒中国株Ｆ４８Ｅ９融合蛋白（Ｆ）基因１８３８ｂｐ的ｃＤＮＡ核苷酸序列,并推导出编码５４９个残基的氨基酸序列。序列分析表明,该序列中有６个潜在的糖基化位点,１３个半胱氨酸残基,裂争位点区氨基酸序列为Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ。同源性分析表明,新城疫病毒中国株Ｆ４８Ｅ９融合蛋白（Ｆ）氨基酸序列与国外发表的其他新城疫病毒株Ｆ蛋白相比,同源性在９６．１７％～９２．１６％之间。     

鸽新城疫病毒分离株的分子基础和免疫学研究报告

用电镜技术对鸽新城疫病毒分离株进行了形态学鉴定，ＡＧＰＣ法提取病毒的ＲＮＡ，反转录后用ＰＣＲ方法扩增到该分离株Ｆ０裂解位点附近的３００ｂｐ的基因片段。序列分析表明：该分离株与鸡新城疫强毒Ｔｅｘａｓ的同源性为８７．７％，而与弱毒株Ｄ２６／７６及Ｌａｓｏｔａ的同源性分别为９１．７％和９８％；证实其Ｆ０裂解位点的氨基酸顺序为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ，属于新城疫弱毒。将分离毒株接种无新城疫母源抗体的９日龄鸡胚制成油乳苗，每只幼鸽接种０．２５ｍｌ，成年鸽接种０．５ｍｌ，１０天后即可产生坚强的免疫力，保护率达１００％，免疫效力可维持６个月。     

鸽新城疫病毒分离株F0裂解位点的基因克隆及序列分析

为探索鸽新城疫的流行特点，在分子水平上阐明鸽新城疫病毒分离株鸡新城疫毒株之间的相互关系，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了分离株Ｆ０裂解位点附近３００ｂｐ的基因片段，将其克隆到ｐＵＣ１９载体上得到一重组克隆ｐＮＤＶ２１，序列分析表明，插入片段与鸡析城疫强毒Ｔｅｘａｓ相应区域的同源性为８７．７％，而与弱毒株Ｄ２６／７６及Ｌａ Ｓｏｔａ的同源性分别是９１．７％和９８％。     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

猪温流行野毒Ｅ^rns基因的序列分析

利用反转录（ＲＴ）和ＰＣＲ技术完成了５株近期（１９９７－１９９８年）猪瘟流行毒和１株猪瘟Ｃ－株弱毒疫苗毒（兰州）Ｅ^rns（或称Ｅ０）基因的核酸序列测定。通过序列分析发现,这５株流行毒与Ｃ－株疫苗毒的核酸序列同源性为８３％－８４％;推导的氮其酸序列同源性为８８％－９１％,我国５０－６０年代流行的中国石门株（ＳＭ）的核酸序列同源性为８５％;氮其酸序列同源性为８９％－９１％。而５株流行毒间的核酸序列同源性为９１％－９８％;氨其酸序列同源性为９４％－９８％。     

鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

传染性喉气管炎病毒北京E2株gC基因的克隆及其部分序列测定

根据传染性喉气管炎病毒美国６３２株和英国Ｔｈｏｒｎｅ株ｇＣ基因的序列设计１对引物,以北京Ｅ２株为模板,用ＰＣＲ方法扩增到长度为１．９ｋｐ的片段,并将其克隆至质粒ｐＡ－Ｔ。用碱小量法制备质粒ＤＮＡ,以酶切和质粒ＰＣＲ的方法对其进行了鉴定,并以正向和反向引物测定其两翼序列,结果正向引物测出４９８个碱基,反向引物测出４９９个碱基,将所得序列输入ＧｅｎＢａｎｋ与其他毒株进行比较,结果发现其与美国６３２株的     

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ     

鸡新城疫病毒V4株一些特性的研究

对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｖ４株的毒价、血凝（ＨＡ）稳定性和致病指数进行了研究，结果显示ＮＤＶＶ４株的毒价（ＥＩＤ）为１０－８．３～１０－１０．１／０．１ｍＬ，２５℃存放２８ｄ、３７℃存放１２ｄ及反复冻融７次ＨＡ滴度不变，其１日龄雏鸡脑内接种、６周龄鸡静脉接种发病指数和鸡胚平均致死时间分别为：ＩＣＰＩ＝０．００，ＩＶＰＩ＝０．００，ＭＤＴ＞１５０ｈ     

鸽新城疫病毒分离鉴定

从病死美国鸽脾脏分离到１株病毒,经血凝抑制试验（ＨＩ）和电镜观察,确诊为新城疫病毒（ＮＤＶ）。采用ＳＰＦ鸡胚和ＳＰＦ鸡测定其致病指数分别为：ＭＤＴ＝６１．４,ＩＶＰＩ＝２．５３,ＩＣＰＩ＝１．６８,属于强毒株,该毒株经滴鼻／点眼途径可在９６ｈ致死６周龄非免疫鸡并出现典型的新城疫病变和症状,鸽子攻毒试验同样出现了新城疫症状和病变,超过鸽子产生高滴度的ＨＩ抗体。     

新城疫病毒融合蛋白基因片段的构建与鉴定

本文重缚和构建了新城疫病毒（ＮＤＶ）融合蛋白基因,并对该基因进行了鉴定,将新城疫病毒Ｆ基因片段经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,插入经ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ酶切的克隆载体ｐＵＣ１８及表达载体ｐＧＥＭＥＸ,转化大肠杆菌ＪＭ１０９株,用氨苄青霉素平板法初步筛选克隆,再用双酶切法,核酸探针,ＰＣＲ及核苷酸序列分析法鉴定,表明插入成功并且阅读框架正确。     

测定狂犬病疫苗效价的快速荧光技术

取０．５ｍｌＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４ｈ制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用驴抗兔荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿色结构判定病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒快速荧光技术法（ＲＦＡＴ）。并用ＲＦＡＴ检测了１５批Ｆｌｕｒｙ－ＬＥＰ株培养液，１５批ＥＲＡ株培养液，和１５批鹿毒８２０２株培养液，ＴＣＩＤ平均滴度分别为５．６８、６．０５、４．８６，并同时进行了小白鼠脑内接种平行试验，ＭＬＤ５０平均滴度分别为５．５０、５．６５、４．２５。从试验结果看，ＲＦＡＴ是取代ＭＬＤ５０测定法的理想方法     

真鲷的生长和生态转换效率及主要影响因素

采用室内流水模拟实验法测定了真鲷的生长和生态转换效率。及其温度、摄食水平、饵料生物种类和群居行为因素的影响。真鲷的特定生长率随温度或摄食水平升高而减速增长,其关系分别右用公式ＳＧＲ＝２．０１ＬｎＴ－４．６９（Ｒ＾２＝０．９８８１）或ＳＧＲ＝０．９７Ｌｎ（ＦＬ）－０．２５（Ｒ＾２＝０．９９８４）定量描述;而生态转移效率则随温度或摄食水平增大而增至一峰值,然后随其进一步增加而降低,其关系分别可用二次曲线Ｅｇ＝－０．１７Ｔ＾２＋７．１９Ｔ－５４．０６（Ｒ＾２＝０．９９４５）或Ｅｇ＝－１．１０ＦＬ＾２＋１０．１６ＦＬ＋５．５４（Ｒ＾２＝０．９９９５）定量描述,且依据上述公式可分别求得实验条件下的最佳生长温度为２０．８℃,维持摄食量和最佳摄食量分别为真鲷体重的１．２９％和４．６０％。真鲷的群居性和摄食小型鱼类饵料,有利于     

传染性囊病病毒CJ801 VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０、ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７４％、９７６％和９６９％，与变异株Ａ、Ｅ、ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６５％、９６３％和９６７％。而与Ⅱ型毒株的同源性只有８１％左右。从遗传进化树上看，ＣＪ８０１处于标准Ⅰ型毒株和变异株之间。根据ｃＤＮＡ序列推导出蛋白质序列，比较蛋白质序列发现，ＣＪ８０１与Ⅰ型ＩＢＤＶ毒株的同源性均在９６％以上，其中与５２／７０的同源性最高，为９８２％。ＣＪ８０１ＶＰ２高可变区的七肽区（Ｓ－Ｗ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｇ－Ｓ）未发生变化。以上结果说明ＣＪ８０１为ＩＢＤＶⅠ型强毒株。另外，ＣＪ８０１和所有ＩＢＤＶ强毒株在ＶＰ２的２５３、２７９和２８４位上的氨基酸均相同，分别为Ｑ、Ｄ和Ａ；而ＣＪ８０１的细胞适应株ＣＪ８０１ＢＫＦ和所有弱毒株一样，其相应位置的氨基酸分别为Ｈ、Ｎ和Ｔ。这３个氨基酸可能和ＩＢＤＶ的毒力有关。     

烟草花叶病毒蚕豆分离物移动蛋白基因克隆及序列分析

根据已报道的ＴＭＶ Ｕ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）的序列设计了特异性引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从烟 草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）上扩增移动蛋白（ＭＰ）基因及其邻近序列。将此ｃＤＮＡ片段克隆于 ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ ＳＫ质粒上,进行测序分析。结果表明：ＭＰ基因由８０７个核苷酸组成,编码２６８个氨基酸。与 ＴＭＶ－Ｕ１的ＭＰ基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为９９．０１％和 ９８．８９％。与ＴＭＶ－Ｙｕ的ＭＰ基因序列比较,同源性分别为９８．１４％和９８．８９％。说明ＴＭＶ的ＭＰ基因 在不同株系中是非常保守的。     

真鲷的生长和生态转换效率及主要影响因素

采用室内流水模拟实验法测定了真鲷的生长和生态转换效率。及其温度、摄食水平、饵料生物种类和群居行为因素的影响。真鲷的特定生长率随温度或摄食水平升高而减速增长,其关系分别右用公式ＳＧＲ＝２．０１ＬｎＴ－４．６９（Ｒ＾２＝０．９８８１）或ＳＧＲ＝０．９７Ｌｎ（ＦＬ）－０．２５（Ｒ＾２＝０．９９８４）定量描述;而生态转移效率则随温度或摄食水平增大而增至一峰值,然后随其进一步增加而降低,其关系分别可用二次曲线Ｅｇ＝－０．１７Ｔ＾２＋７．１９Ｔ－５４．０６（Ｒ＾２＝０．９９４５）或Ｅｇ＝－１．１０ＦＬ＾２＋１０．１６ＦＬ＋５．５４（Ｒ＾２＝０．９９９５）定量描述,且依据上述公式可分别求得实验条件下的最佳生长温度为２０．８℃,维持摄食量和最佳摄食量分别为真鲷体重的１．２９％和４．６０％。真鲷的群居性和摄食小型鱼类饵料,有利于     

番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定

利用ＰＣＲ技术,从纯化番鸭细小病毒Ｍ９１Ｇ２７毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽ＶＰ３基因。将该ＰＣＲ扩增片段克隆入ｐＵＣ１８质粒载体的ＨｉｎｃⅡ和ＳａｃⅠ位点之间,酶切分析筛选到含１．６ｋｂ基因片段的重组质粒ＭＰ１３。结果表明：该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有９８．８％的同源性,氨基酸序列有９８．１％的同源性,证明该重组质粒是ＶＰ２基因的克隆。     

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。     

鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析‘

鹅副粘病毒分离株ＹＧ９７经１０日龄鸡胚增殖后纯化,提取病毒基因组ＲＮＡ,采用ＰＴ－ＰＣＲ一次性扩增出与预期设计的１．７ｋｂ大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入ｐＥＧＭ＾Ｒ－Ｔ载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,初步获得了含鹅副粘病毒Ｆ基因的阳性克隆,并进行了序列测定。序列分析表明：扩增的Ｆ基因片段的长度为１６９５ｂｐ,共编码５５３个氨基酸,Ｆ蛋白裂解位点的氨基酸顺序为＾１１２Ｒ－ＲＱ－Ｋ－Ｒ－     

牛生长激cDNA的表达与检测

利用低融点琼脂糖凝胶电泳，回收牛生长激素ｃＤＮＡ全序列，克隆于原核表达载体ＰＴ７７－７中Ｔ７启动子下游，转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，经分离，酶切分析，获得６个牛生长有质粒ＰＴＧＨ１－６，选取其中两质粒ＰＴＧＨ１１－２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＫ８３＝ｐＧ１－２，４２℃诱导３０ｍｉｎ，收集，破裂菌体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，于２２ＫＤ处有一特异性蛋白带，经ＳｈａｍａｄｚｕＣＳ９３０扫描测定，其表达量