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1.
利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4.另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向. 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的mRNA差异显示 总被引:3,自引:0,他引:3
利用柔嫩艾美耳球虫马杜霉素敏感虫株裂殖子和抗药虫株裂殖子为材料,对马杜霉素敏感虫株和抗药虫株进行差异显示PCR,共回收34条电泳差异片段,反向Northern点杂交鉴定4个片段为真正差异片段,并对4个片段进行测序、B1ast同源性比较.来自于马杜霉素抗药虫株裂殖子的ACD3-2序列与柔嫩艾美耳球虫微线-5同源性99%,说明AcD3-2序列是该基因的部分序列,微线-5蛋白与虫体融解宿主细胞膜、入侵、运动和溢出有关,在第二代裂殖子时期,抗药性虫株该序列发生转录,而在敏感虫株中沉默;HCD1序列来自马杜霉素敏感虫株,与柔嫩艾美耳球虫表面抗原16和17序列同源性分别为83%和86%,说明与这2个基因同源.AGD5片段来自抗药虫株,HAD8-2序列来自敏感虫株,通过比较这2条序列可能为新序列. 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导 总被引:11,自引:1,他引:11
采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。 相似文献
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为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18SrDNA的影响,分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株(ETAD)、马杜拉霉素抗药株(ETAM)和药物敏感株(ETDS)孢子化卵囊的18SrDNA基因进行了克隆测序,并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示,ETAM株有3个碱基发生突变(T170突变为C,T646突变为C,G694突变为C);ETAD株有1个碱基发生突变(T646突变为C)。经进一步分析比较,发现ETAM株18SrRNA的二级结构与ETDS株的差异很大,而ETAD株18SrRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E.tenella产生抗药性的原因之一。 相似文献
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从NCBI公共数据库获得2806条柔嫩艾美耳球虫敏感株与马杜拉霉素耐药株表达序列标签(EST),通过前处理得到全长为421.186kb的无冗余EST共1519条。在这些序列中搜索出202个简单重复序列(SSR),分布于1519条EST中,出现频率是17.45%。三核苷酸重复和四核苷酸重复是主要的类型,其中三核苷酸占67.92%,四核苷酸占25.28%,占总SSR的近93.20%。AAG/CTT和ACGT/ATGC是三、四核苷酸中的优势重复类型,分别占三、四核苷酸重复的62.72%和56.76%。 相似文献
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2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性 总被引:8,自引:0,他引:8
选择130只21日龄雏鸡,研究了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉毒(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)和氨丙啉(Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组,其中每株球虫均设5个感染用药组,1个感染不用药组,另设1个不感染不用药组,每组10只鸡。以POAA,RLS,ROP,ACI作为指标。结果表明,2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药,对地克珠利敏感或轻度抗药,对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示:目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉,对氯羟哟啶应慎用,对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。 相似文献
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采用药物浓度递增法,以0.07mg/L地克珠利为起始诱导浓度连续传代,以最适抗球虫指数(POAA)、病变记分减少率(RLS)和相对卵囊产量(ROP)3项指标综合判定抗药性。经12次传代,该诱导虫株对1.5mg/L地克珠利具有完全抵抗力。试验结果表明,用实验室方法诱导柔嫩艾美耳球虫抗药株完全可行。 相似文献
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为评估盐酸氟乙基硫胺素产生抗药性的倾向,采用药物浓度递增法,在实验条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药性的诱导研究。每组动物用10只快大黄肉鸡,每只鸡接种1×105个孢子化卵囊,以50 mg/kg盐酸氨丙啉和盐酸氟乙基硫胺素为起始诱导浓度连续传代,以病变记分、存活率和卵囊数三项指标综合判定耐药性。经过10次传代,盐酸氨丙啉对敏感虫株的ACI为192.6,而对耐药虫株的ACI为109.1;经过12次传代,盐酸氟乙基硫胺素对敏感虫株的ACI为197.5,而对耐药虫株的ACI为110.6,对盐酸氨丙啉耐药虫株的ACI为163.2;结果表明成功地诱导出对盐酸氨丙啉、盐酸氟乙基硫胺素完全耐药的虫株。盐酸氟乙基硫胺素产生耐药速度慢于盐酸氨丙啉,与盐酸氨丙啉有部分交叉耐药性。 相似文献
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鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的抗药性研究 总被引:1,自引:1,他引:0
使用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)西宁株(Et XN)感染13日龄岭南黄肉鸡,进行该虫株对轻灭(地克珠利,Diclazuril)、马度米星铵预混剂(Maduramicin Aminonium Premix)、球痢灵(磺胺氯吡嗪钠,Sulfachoropyridazine)、球迪2000(盐酸氯丙啉,Amprolium Hydrochloride)4种药物的抗药性研究。以相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫活性百分数(POAA)、抗球虫指数(ACI)作为指标进行综合判定。结果表明:该虫株对马度米星铵预混剂具有轻度抗药性,对球痢灵具有中度抗药性,对轻灭和球迪2000具有完全抗药性。 相似文献
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银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因 总被引:5,自引:0,他引:5
以柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料,用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板.用Oligo(dT)12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR,产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带,进行2次PCR扩增,产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后,再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现,地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段(可能为新的基因片段),这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。 相似文献
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用5×104个柔嫩艾美耳球虫石家庄株孢子化卵囊感染14日龄雏鸡,对卵囊潜隐期、最早孢子化时间、形态及大小等生物学特性进行了测定。并以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)为指标,检测了常用抗球虫药对其敏感性。结果表明:(1)该虫株寄生于盲肠,呈宽卵圆形,壁光滑,分2层,多数可见极粒。卵囊大小范围为(19.68~27.76)μm×(15.21~23.99)μm,平均大小为(23.41±2.22)μm×(19.34±2.27)μm,卵囊指数1.21。孢子囊大小范围为(8.30~14.28)μm×(4.05~9.15)μm,平均大小为(11.69±1.53)μm×(6.74±1.26)μm,孢子囊指数1.73。潜隐期和最短孢子化时间分别为133h和20h。(2)该虫株对马杜霉素、克球粉与球敌呈完全抗药性;对瑞冠球呈轻度抗药性;而对氨丙啉和金三特无抗药性。 相似文献
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雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化 总被引:7,自引:0,他引:7
为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2~ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4~ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫感染肉鸡后盲肠粘膜iNOS活性变化 总被引:5,自引:1,他引:4
本研究旨在探讨肉鸡柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)感染与盲肠粘膜诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性之间的时间 -效应和剂量 -效应关系。 1日龄黄羽肉鸡 ,在实验室条件下用雏鸡日粮饲养两周后供试。在时间 -效应关系试验中 ,4 5只肉鸡中用 5只鸡作对照 ,其余每只鸡接种 1.0× 10 4 个球虫孢子化卵囊 ,接种前捕杀对照组雏鸡 ,于接种后每 2 4 h分别捕杀 5只 ,取其盲肠粘膜样本 ,按分光光度法检测 i NOS活性 ,连续 8天。试验结果表明 ,与对照组相比 ,肉鸡盲肠组织 i NOS的活性在接种球虫后不同时间明显不同 ,其中接种后第 96 h活性最高 (2 3.70± 7.6 5) ;在剂量 -效应关系试验中 ,4 0只肉鸡以不同的剂量 0、0 .5× 10 4 、1.0× 10 4 、1.5× 10 4 、2 .0× 10 4 、2 .5× 10 4 、3.0× 10 4 、3.5× 10 4 个 /只分别口服接种 ,然后按时间 -效应关系中酶活性最高的时间点取样 ,以同法检测 i NOS活性。试验结果显示 ,接种不同剂量的雏鸡 ,其盲肠组织中 i NOS活性不同 ,与对照组相比各剂量组 i NOS活性均显著增高 (P<0 .0 1) ,在 7个剂量组中 ,以 2 .5× 10 4 个 /只剂量组活性最高 (2 3.37± 8.32 ) 相似文献