ELISA法观察小鼠感染细粒棘球绦虫的抗体变化

在ELISA法作用之下应用高纯度细粒棘球绦虫六钩蚴抗原、以及囊液抗原,分别针对一次感染、以及二次感染细粒棘球绦虫六钩蚴小鼠血清进行测定,用ELISA法对所测定结果详细分析。对模型小鼠原发性感染细粒棘球绦虫后,特异性抗体的变化规律展开分析与研究。     

细粒棘球绦虫锌指蛋白基因的克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达分析

旨在分析并预测细粒棘球绦虫锌指蛋白(Echinococcus granulosus zinc finger peotein,Eg-ZFP)结构、功能及其在细粒棘球绦虫发育过程中的表达模式,预测其在细粒棘球绦虫防治中潜在的作用。通过对前期细粒棘球绦虫原头蚴(protoscolex,PSC)转录组高通量测序结果中Unigene进行筛选,克隆Eg-ZFP基因并进行序列分析,实时荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)分析Eg-ZFP在原头蚴及成虫中的表达特征,利用全量组织原位杂交(Whole mount in situ hybridization,WISH)检测该蛋白mRNA在原头蚴和成虫组织中的分布情况。结果显示,细粒棘球绦虫Eg-ZFP基因的CDS序列长852bp,具有完整的开放阅读框(852bp),编码283个氨基酸,预测表明Eg-ZFP分子质量大小及等电点为31.6ku和8.89;qPCR检测发现,Eg-ZFP在原头蚴及成虫阶段均有表达,且在成虫阶段表达量高;全量组织原位杂交检测结果表明,Eg-ZFP mRNA在原头蚴及成虫中分布广泛,且在成虫的生殖系统中丰度较高,提示Eg-ZFP与虫体生殖发育有关。结果表明Eg-ZFP在细粒棘球绦虫发育过程中具有重要作用,为进一步研究Eg-ZFP在E.granulosus防治中的作用奠定基础。     

包虫病流行情况调查与防治建议

<正>一、山南市包虫病发展情况包虫病,又称棘球蚴病,是细粒棘球绦虫的幼虫感染人体所致的疾病。该病为人畜共患病,狗为终宿主,牛、羊是中间宿主。人因误食虫卵成为中间宿主而患包虫病,主要在我国西部地区流行。据2013年西藏自治区第3次疫病普查资料显示,山南市牛羊经解剖在肝脏、肺脏发现感     

抗包虫病犬用吡喹酮缓释注射剂效果试验

我们研制了两种吡喹酮缓释注射剂(4号和5号),并进行了预防犬感染细粒棘球绦虫的试验。吡喹酮的浓度为20%;犬皮下注射剂量为10mL。试验犬分为三组,缓释注射荆4号组3只,5号组2只,对照组3只.试验犬注射缓释剂4个月时,每只犬用3000个细粒棘球蚴的原头节进行攻击感染。攻击感染后1个月对试验犬进行剖检,检查小肠内的细粒棘球绦虫数。结果为:①注射剂4号组感染犬数为3/3,每只犬平均感染虫体11条,感染强度1～30条,共发现虫体33条,和对照组比较虫体总数下降81.36%.②注射剂5     

阿拉善右旗骆驼、羊棘球蚴病的调查

骆驼、羊的棘球蚴病（称：包虫病）是细粒棘球绦虫（Ecinococous，granulosus）的幼虫，寄生于绵羊、山羊、牛、骆驼、猪等中间宿主的肺、肝、脾等脏器而引起的一种慢性寄生虫病。在其流行区域内人也易感染，对我旗人体健康和畜牧业生产的发展造成了严重的危害。     

细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性分析

 【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western- blot 和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为2.54mg•mL-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG 、IgM 和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG 、IgM 和IgA的P/N值分别为4.9、3.2和6.4。未检测到特异性IgE。Wenstern-blot检测结果显示,抗血清与原头蚴粗提虫体蛋白、细粒棘球绦虫成虫表膜蛋白、表膜糖抗原有效识别。IFA显色结果显示糖抗原在细粒棘球绦虫虫体表膜中有表达。【结论】经蛋白酶K消化后提取的细粒棘球绦虫表膜糖抗原具有良好的的免疫原性和免疫反应性,有望用于包虫病的诊断和免疫。     

中草药胶囊治疗犬绦虫病

绦虫病是犬常见的寄生虫病。寄生于小肠内的绦虫种类很多,其中常见的有犬复孔绦虫、猫泡尾带绦虫、泡状带绦虫、豆状带绦虫、多头绦虫、细粒棘球绦虫、中线绦虫、孟氏迭宫绦虫、连节绦虫、螺状裂头绦虫、阔节裂头绦虫等。以犬复孔绦虫、猫泡尾带绦虫、泡状带绦虫最为常见。犬绦虫的幼虫寄生于人或家畜的内脏器官,引起绦虫蚴病。人犬共患的绦虫有犬复孔绦虫、细粒棘球绦虫、多头绦虫、连节绦虫、孟氏迭宫绦虫、阔节裂头绦虫、螺状裂头绦虫等。     

吉林省四平地区猪棘球蚴病的调查

棘球蚴(Echinococcus)又叫色虫,是寄生在终末宿主犬及其它肉食兽小肠内的细粒棘球绦虫的幼虫。可在多种动物和人体的各实质器官内寄生。因其体积大,生长力强,不但使被寄生组织受到严重破坏,而且引起继发感染,特别是当蚴体发生破裂时引起剧烈的变态反应,甚至造成寄主的死亡。据资料报道,棘球蚴呈全球性分布,尤以畜牧业为主的地区较多。在我国的甘肃、青海、内蒙古、新疆等牧业地区广为流行。到目前为止,关于我省家畜和人的棘球蚴病还未见报道。作者在四平市肉联厂随机调查了1000头屠猪棘球蚴的感染情况,简报如下:     

羊夏季常见绦虫幼虫病的防治

<正>1羊棘球蚴病羊棘球蚴病是由羊棘球蚴寄生在羊体内引起的羊寄生虫病。棘球蚴又称包虫,是棘球绦虫的幼虫。棘球绦虫的终末宿主要是犬、狼等肉食动物。虫卵和孕节随宿主的粪便排出体外,含有被虫卵和孕节污染的食物被羊吞食后而受到感染。虫卵和孕节内的六钩蚴在羊的消化道内孵出,钻入羊的肠壁,并随血流或淋巴液到达羊体内各处,以肝、肺、脾、肾最常见。六钩蚴经6~12个月的生长发育,最终成为具有     

绵羊肝包虫病的诊治

包虫病,也称棘球蚴病,俗称肝包虫病。棘球蚴病是由细粒棘球（Echinococcusgranulosus）的中绦期一棘球蚴（Echinococcus）寄生在哺乳动物脏器内所引起的疾病,细粒棘球绦虫也属带科．它的中绦期对人、畜的危害极为严重。棘球蚴可寄生于人、畜任何部位,因为体积大,生长力强,不但使周围组织受到高度压力而萎缩,也易产生继发性感染;如果蚴体破裂,后果尤为严重。     

黑龙江省汤旺河流域犬寄生蠕虫区系调查

本文报告了黑龙江省汤旺河流域犬寄生蠕虫的调查结果。沿河两岸20个点,剖检狗84只、蠕虫感染者83只,感染率占98.81％。本次共检获寄生蠕虫16种,其中吸虫7种,涤虫4种和线虫5种,他们分属于13科,16属。1犬体内检出1种虫体者占8.33％,检出2、3种者占26.19％和23.81％,检出4、5种者各占13.09％和16.67％,5种以上者占10.71％。分布广泛,危害严重者:犬钩口线虫,犬弓首线虫,旋毛形线虫,犬复孔绦虫,卫氏并殖吸虫,泡状带涤虫,线中殖孔绦虫和华支睾吸虫。横川后殖吸虫,园圃棘口吸虫,日本棘隙吸虫和毛细线虫在我省系首次报道。据文献记载,上述16种蠕虫均为人畜共患寄生虫,在我省人体内有重要意义的有4种:华支睾吸虫,卫氏并殖吸虫,棘球蚴和旋毛形线虫。其余虫种可能偶尔感染人。上述结果提示,狗是人畜共患寄生蠕虫的重要宿主。     

单双羔绵羊卵巢组织差异表达microRNAs筛选

【目的】全面了解绵羊卵巢组织miRNAs表达情况,分析产单羔和产双羔绵羊卵巢miRNAs表达差异,从而为探讨miRNAs在繁殖力调控中的作用提供依据。【方法】应用多物种miRNA芯片对绵羊卵巢组织miRNA进行表达分析。首先选择经产单羔羊和双羔羊,发情后采集双侧卵巢提取总RNA,分离小片段 RNA与miRNA芯片杂交,然后进行数据分析获得绵羊卵巢组织miRNAs表达谱;利用生物信息学软件,以q-value ≤ 5%,且Fold Change ≥2 或≤0.5的标准筛选单羔羊和双羔羊卵巢差异表达miRNAs,并利用q-PCR技术验证芯片结果;分别采用microT和miRDB两种方法预测差异表达miRNAs的靶基因,然后合并两种方法结果数据取二者的交集,用在线软件对靶基因进行GO功能注释。【结果】在检测的来自所有物种的miRNAs中,有5 448个miRNAs在单羔和双羔羊卵巢组织中共同表达,22个在单羔羊卵巢中特异性表达,15个在双羔羊卵巢中特异性表达;对绵羊中已报道的103个miRNAs,比较其在两组母羊卵巢组织中的表达变化,共获得11个差异表达miRNAs,其中4个上调表达,7个下调表达;随机选择一个上调和一个下调表达的miRNAs进行q-PCR验证,定量结果与芯片结果一致,说明芯片结果准确、可信;预测获得7个miRNAs的靶基因,分别是：oar-miR-370-5p、oar-miR-376b-5p、oar-miR-381-5p、oar-miR-412-5p、oar-miR-541-3p、oar-miR-544-5p和oar-miR-1185-5p,每个miRNA获得的靶基因个数分别为：115、71、1、5、8、135和23个。GO注释结果显示,miR-376b-5p和miR-1185-5p的靶基因主要参与形成细胞内组分和细胞器,在分子功能分类中,绝大部分基因为连接分子类和催化活性分子类,在生物学过程分类中,主要参与细胞增殖、分化、凋亡过程和代谢过程;同时miR-376b-5p的靶基因IGF-1、DAZL、MTOR、MET、NEDD4和miR-376b-5p的靶基因AHR参与生殖过程的调控。【结论】成功构建了绵羊卵巢miRNAs表达谱,获得产单羔母羊和产双羔母羊卵巢组织差异表达miRNAs,这些miRNAs可能与绵羊卵泡发育和产羔数多少有关。     

植物microRNA及其作用靶位的研究进展

microRNA(miRNA)是指真核生物中长度约21～25个核苷酸的小型内生的非编码RNA家族.它们能识别体内特定的mRNA,并在转录及转录后水平有调控基因的表现.microRNA在植物生长发育、代谢平衡、信号传导等很多方面具有必不可少的调节功能.主要对植物microRNA的特点、作用机制及其作用靶位的研究进展进行了综述.     

意大利蜜蜂幼虫肠道在球囊菌侵染前期的 差异表达microRNA及其调控网络

【目的】 微小RNA（microRNA,miRNA）是一类重要的基因表达调控因子,可影响宿主与病原间的互作过程。蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）是一种特异性侵染蜜蜂幼虫的致死性真菌病原。本研究旨在对意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica,简称意蜂）幼虫肠道在球囊菌胁迫前期的差异表达miRNA（differentially expressed miRNA,DEmiRNA）及其靶基因进行深入分析,在miRNA组学水平探究意蜂幼虫在球囊菌侵染前期的胁迫应答,并通过构建显著DEmiRNA的调控网络筛选出与宿主应答相关的关键miRNA。【方法】 利用small RNA-seq（sRNA-seq）技术对正常及球囊菌侵染的意蜂4日龄幼虫肠道（AmCK和AmT）进行高通量测序,首先对原始数据进行质控和评估,随后将过滤后的数据与西方蜜蜂（Apis mellifera）参考基因组进行比对;将比对上的序列标签（tags）注释到miRBase数据库,得出已知miRNA的表达量;通过TPM（tags per million）算法对各样本中miRNA的表达量进行归一化处理,以|log₂ fold change|≥1且P≤0.05作为标准筛选得到显著DEmiRNA;利用TargetFinder 软件预测显著DEmiRNA的靶基因,并对其进行GO和KEGG代谢通路（pathway）富集分析。利用Cytoscape软件对miRNA-mRNA调控网络进行可视化。最后,利用茎环反转录PCR（Stem-loop RT-PCR）和荧光定量PCR（qPCR）验证测序数据的可靠性。【结果】 AmCK和AmT样品的测序分别得到13 553 302和10 777 534条原始读段（raw reads）,经严格过滤后得到的有效读段（clean reads）数分别为13 186 921和10 480 913条。各样品的生物学重复间的Pearson相关性系数分别在0.9822和0.9508以上。共有10个显著DEmiRNA,包括4个上调miRNA和6个下调miRNA。显著DEmiRNA在AmT的整体表达水平低于AmCK。10个显著DEmiRNA可靶向结合3 788个靶基因,其中上调miRNA的1 240个靶基因可注释到GO数据库中的39个GO条目,主要富集在结合、细胞进程、代谢进程和应激反应等;下调miRNA的749个靶基因可注释到34个GO条目,主要富集在细胞进程、结合、代谢进程和应激反应等。KEGG数据库注释结果显示,上调miRNA和下调miRNA的靶基因分别注释到95和66条代谢通路,富集基因数最多的分别是Wnt信号通路、Hippo信号通路、光传导以及内吞作用、磷脂酰肌醇信号系统、嘌呤代谢。对于上调和下调miRNA,分别有31和52个靶基因注释到内吞作用,15和7个靶基因注释到泛素介导的蛋白水解,11和5个靶基因注释到Jak-STAT信号通路,1和3个靶基因注释到MAPK信号通路。显著DEmiRNA与靶mRNA之间形成复杂的调控网络,7个显著DEmiRNA靶向结合96个与Wnt信号通路相关的mRNA,8个显著DEmiRNA靶向结合55个与内吞作用相关的mRNA。Stem-loop RT-PCR和qPCR结果验证了测序数据的可靠性。【结论】 对意蜂幼虫肠道在球囊菌侵染前期的DEmiRNA及其靶基因进行预测和分析,并构建和分析了DEmiRNA-mRNA调控网络,研究结果提供了宿主miRNA的表达谱和差异表达信息,揭示了DEmiRNA通过调控细胞生命活动、新陈代谢以及部分细胞和体液免疫等生物学过程参与宿主的胁迫应答。miR-4331-y、miR-4968-y、miR-8440-y、novel-m0023-5p和novel-m0025-3p共同参与了宿主的Wnt信号通路和内吞作用的调控,可作为白垩病治疗的潜在分子靶标。     

植物microRNAs在干旱胁迫响应中的研究进展

干旱是常见且反复出现的气候特征,严重影响农作物生产.microRNAs(miRNAs)是一类长度为18～24 nt的小分子非编码RNA,转录后的miRNAs可调节基因表达,参与植物生长发育过程.从miRNAs 的发现、合成及作用机制,干旱胁迫响应miRNAs 的种类及其靶基因、miRNAs介导干旱胁迫的响应机制等方面进...     

Identification of novel and differentially expressed micro RNAs in ovine ovary and testis tissues using Solexa sequencing and bioinformatics

Micro RNAs(mi RNAs) are small, single stranded, non-coding RNA molecules, about 19–25 nucleotides in length, which regulate the development and functions of reproductive system of mammal.To discover novel mi RNAs and identify the differential expression of them in ovine ovary and testis tissues, the study constructed two libraries by using next-generation sequencing technologies(Solexa high-throughput sequencing technique).As a result, 9 321 775 and 9 511 538 clean reads were obtained from the ovary and testis separately, which included 130 562(90 genes of ovary) and 56 272(85 genes of testis) of known mi RNAs and 486 potential novel mi RNAs reads.In this study, a total of 65 conserved mi RNAs were significantly differentially expressed(P0.01) between the two samples.Among them, 28 mi RNAs were up-regulated and 3 mi RNAs were down-regulated on ovary compared with testis.In addition, the known mi RNAs with the highest expression level(5 mi RNAs) and 30 novel mi RNAs with the functions related to reproduction were validated using the real-time quantitative RT-PCR.Moreover, the gene ontology(GO) annotation and Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG) pathway analysis showed that differentially expressed mi RNAs were involved in ovary and testis physiology, including signal transduction, gonad development, sex differentiation, gematogenesis, fertilization and embryo development.The results will be helpful to facilitate studies on the regulation of mi RNAs during ruminant reproduction.     

新奇的调控分子——microRNA

microRNA(miRNA)是一类内源性表达的在转录后基因调控中发挥重要作用的小分子非编码RNA。在动植物细胞中,miRNA通过翻译抑制和靶mRNA去稳定性来调控靶基因,从而调控生长、发育、分化、死亡等生物过程。综述了miRNA的发现、形成、特点及调控机制。