天等1号辣椒遗传转化再生体系的研究

对天等1号辣椒的子叶、带柄子叶、带柄真叶和F lam ingo-b ill外植体进行了遗传转化,比较不同激素及其水平对不同外植体芽分化的影响,以及外植体对卡那霉素的敏感性。结果表明,仅有以F lam ingo-b ill为外植体所形成的愈伤组织,能在培养基M S ZT 1.0m g/L IAA 0.2m g/L A gNO32.0m g/L上诱导芽的分化(63%的分化率),在培养基M S ZT 1.0m g/L IAA 0.2m g/L A gNO32.0m g/L GA32.0m g/L上使诱导芽伸长(15%的芽伸长率)。抗性筛选最适卡那霉素浓度为50m g/L。通过根癌农杆菌介导法转化,共获得33株抗性再生苗。PCR和PCR-Sou thern杂交检测结果表明,94%的抗性植株检测到报告基因nptII片段。     

榨菜子叶和带柄子叶再生植株的研究

以榨菜子叶及带柄子叶等为外植体,在添加不同激素的MS培养基上,经不定芽诱导,不定芽伸长,生根等步骤,获得了完整的再生植株.结果表明:4 d苗龄的子叶再生能力最强,带柄子叶的最佳苗龄为5～6 d.子叶和带柄子叶分别在MS BA 2 mg/L NAA 0.4 mg/L AgNO3 5 mg/L和MS BA 2 mg/L NAA 0.2 mg/L AgNO3 5 mg/L的培养基中不定芽分化的效果较好.不同基因型间对子叶外植体的再生影响不大,但对带柄子叶的再生影响较明显.     

白菜类作物子叶高频再生体系的建立

以大白菜品种北京80号、油青矮脚45天菜心、四季菜心王的带柄子叶为外植体,研究不同基因型、苗龄、激素组合、预处理条件及琼脂质量浓度对不定芽再生的影响。结果表明,北京80号的最佳培养基为MS+5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2mg/L AgNO3,再生频率为83.6%;油青矮脚45天菜心和四季菜心王的最佳培养基为MS+0.2 mg/L TDZ+1 mg/L NAA+2 mg/L AgNO3,再生频率分别为73.1%和83.2%。3个基因型的带柄子叶在0.5～1mg/L 2,4-D中预处理3d,再生频率达84%以上。4～5d苗龄的外植体诱导不定芽效果较好。琼脂的质量浓度以12g/L为宜。通过不定芽继代培养和生根驯化建立白菜类作物较高再生频率的再生体系。     

雪里蕻高效再生体系的建立

以雪里蕻(Brassica juncea Coss. var. multiceps Tsen et Lee)子叶、带柄子叶、子叶柄和下胚轴为外植体,在添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行分化培养.结果表明:在4种外植体中,带柄子叶不定芽分化能力最强.子叶和带柄子叶不定芽分化的最适培养基分别为MS+2 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3和MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3.带柄子叶和子叶不定芽分化的最佳苗龄都为5 d.AgNO3能显著地促进带柄子叶不定芽的分化,以5 mg/L的浓度为最佳.不同基因型对带柄子叶不定芽分化影响不大,但对子叶影响较明显.不定根诱导的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA.     

大白菜“早熟5号”不定芽再生体系的优化

选用大白菜品种“早熟5号”为材料,分析了外植体、苗龄、AgN03和植物激素对其不定芽再生的影响.结果表明:不同外植体类型中,采用4～5d苗龄的带柄子叶为外植体再生频率最高,添加AgN03后在3～7 mg/L的浓度范围内外植体分化率大幅度提升,分化率最高达到78.33％,带柄子叶于MS+6- BA 5 mg/L+ NAA 1 mg/L+ AgNO33 mg/L培养基上不定芽分化率最高,达到86.41％.     

野生黄木香的离体培养及其再生体系研究

以野生黄木香茎段为外植体,探讨了不同生长调节物质对其不定芽诱导、增殖和生根的影响,并建立了野生黄木香的高效再生体系。结果表明,利于野生黄木香分化的诱导培养基为M S+A gNO33.0 m g/L+6-BA1.5 m g/L+NAA 0.5 m g/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L;以M S+A gNO33.0 m g/L+6-BA 1.5 m g/L+NAA0.05 m g/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L为增殖培养基时的增殖效果最好,增殖倍数为5.5;黄木香高效的再生体系为1/2 M S+A gNO34.5 m g/L+IBA 0.2 m g/L+质量分数0.2%活性炭+琼脂4.0 g/L+蔗糖20 g/L,其生根率可达95%。     

京彩甜椒离体培养及植株再生的研究

利用甜椒的下胚轴、子叶、带柄子叶的外植体诱导分化和植株再生。结果表明：带柄子叶的分化能力最强，6-9d苗龄的带柄子叶在MS 5.0mg/L6-BA 0.5-1.0mg/L IAA 4.0mg/L AgNO3培养基上，分化频率最高可达100%。并形成大量的不定芽（1个外植体可产生15-20个以上的芽），幼苗在MS 0.2mg/L IAA培养基上能正常生根，长成健壮的再生植物。     

双价表达载体转化辣椒的体系优化

将含有PamPAP和Cry2Aa2的双价表达载体通过农杆菌介导法转化辣椒,并对其遗传转化体系进行优化,从而建立辣椒Flamingo-bill农杆菌介导的高效遗传转化体系。结果表明：Flamingo-bill外植体的不定芽容易伸长,不定芽分化率明显高于带柄子叶;延迟筛选4~6d可显著提高Flamingo-bill外植体不定芽的分化率和抗性率;Flamingo-bill外植体最适筛选浓度为甘露糖18g/L和蔗糖12 g/L;抗性苗生根最佳培养基为MS+0.2 mg/LNAA+     

2种基因型大白菜高效子叶离体不定芽再生研究

以2个优质大白菜材料德高早熟长江5号(DG)和双耐(SN)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度对子叶不定芽再生的影响,建立了2种大白菜的子叶不定芽高效再生体系,为进一步有效的利用基因工程技术改良大白菜品种奠定了基础.结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导子叶不定芽再生更有效.在单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基上,不能诱导子叶不定芽的分化.DG在MS+ 1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/LNAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为73.80％,最适苗龄为6d,平均再生系数为4.27.SN在MS+1 mg/L TDZ +0.4 mg/L NAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为59.09％,最适苗龄为6d,再生系数为4.03.     

农杆菌介导的菜心遗传转化体系的建立

以建立的菜心高频再生体系为基础,利用GU S染色组织分析法研究了根癌农杆菌菌株、乙酰丁香酮(A S)、预培养时间、浸染时间和共培养时间等因素对菜心((B rassica camp estris L.var.p arach inesis)子叶遗传转化的影响,探讨了适宜菜心转化的卡那霉素与抑菌抗生素使用浓度。结果表明,农杆菌菌株AGL 0对菜心的浸染能力最强,添加100μm o l/L的乙酰丁香酮有利于菜心转化;子叶外植体预培养2 d后浸染(菌液浓度OD600值为0.8)15m in,共培养2 d,然后转移到含15 m g/L卡那霉素和100 m g/L T icarc illin的筛选培养基上,进行转化植株的再生,植株再生率及外植体GU S阳性率均较高,是较优的转化条件;本试验共获得8株转化植株,转化率达2.44%,经PCR分析和Sou thern杂交检测表明,GU S基因已整合进入菜心基因组。     

西瓜组织培养的研究

为建立西瓜顶芽培养与子叶培养的实验流程,以西瓜子叶、顶芽为外植体,进行了不定芽的诱导、芽的伸长,生根以及再生植株的移栽与嫁接试验,结果表明,顶芽诱志不定芽的诱导率高于子叶,苗龄４－５ｄ,刚刚由黄色较浅绿色的子叶诱导不定芽的诱导率最高,苗龄８￣９ｄ的顶芽诱导产生的不定芽最多;用子叶诱慰定芽的适宜培养基为ＭＳ＝１．０ｍｇ／ＬＢＡ,用顶芽诱导不定芽的适宜培养基为ＭＳ＋３．０ｍｇ／ＬＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＩ     

罗汉果的组织培养与快速繁殖

[目的]进一步探讨罗汉果高效再生系统的建立条件。[方法]通过研究外植体苗龄、激素组合等因素对罗汉果离体繁殖影响,建立了罗汉果高效再生系统。[结果]3~9 d苗龄子叶与不定芽分化的关系研究表明,在3~6 d内,子叶不定芽的分化率随着苗龄的增加而增加,以6 d的子叶出芽效果最好(83.3%),随后不定芽分化率逐渐下降。BA和IBA不同浓度组合对子叶不定芽诱导的影响表明,在MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂(pH值5.8)培养基上子叶外植体不定芽的诱导率达到85.7%;在1/2 MS+IBA1.0 mg/L液体培养基上无菌苗发根率可达91.7%。抗生素敏感性试验表明,当培养基中添加10和20 mg/L的潮霉素即能完全抑制不定芽和不定根的分化。[结论]IBA与BA配合使用对罗汉果不定芽的分化有明显的促进作用。     

导入抗逆基因的转双抗虫基因741杨的获得

为培育更多抗非生物胁迫的转基因杨树,以转双抗虫基因741杨(P.alba×(P.davidaiana×P.sirnonii)×P.tomentosa)为材料,建立了叶片诱导的转双抗虫基因741杨的高频再生体系,并采用根癌农杆菌介导法,探索了影响其遗传转化效率的主要因子。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA;继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA,最佳生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L IBA。对影响转化因子的研究结果表明,共培养时间为3 d时,不定芽诱导率最高;共培养培养基加入乙酰丁香酮、pH值调到5.2时,诱导潮霉素抗性芽效果最显著;最佳潮霉素筛选质量浓度为3 mg/L;将抗逆基因AtNDPK2通过农杆菌导入到转基因741杨中,经PCR检测,在抗性植株DNA中扩增出与目的基因大小相同的片断,初步确认目的基因已经整合到转基因741毛白杨基因组中。     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。     

红茄子叶的不定芽诱导及植株再生

【目的】研究不同激素浓度和组合对红茄不定芽及根诱导的影响,建立红茄的高频再生体系,为开展茄子的遗传转化研究奠定基础。【方法】以红茄子叶为外植体,采用0.5~2.0 mg/L 6-BA、0.1~0.5 mg/L IAA激素组合对不定芽进行诱导,采用0~0.5 mg/L IAA对根进行诱导,筛选出最佳的分化培养基和生根培养基。【结果】在不定芽诱导培养基中,当6-BA浓度在0.5~2.0 mg/L时,随着浓度增加,不定芽分化率逐渐升高;当 IAA浓度在0.1~0.5 mg/L 时,随着IAA浓度的增加,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 2.0 mg/L、IAA 0.3 mg/L的诱导效果最好,分化率高达86%。在根诱导培养基中,随着IAA浓度的增加,根诱导率呈先降低后升高趋势,诱导率可达100.0%。【结论】红茄子叶不定芽诱导最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA;不定芽生根最佳培养基为MS+0.1 mg/L IAA。     

南瓜离体培养及植株再生的研究

研究了不同外植体、消毒方法、激素水平等对南瓜离体培养及植株再生的影响。结果表明:以子叶作为外植体可以通过愈伤组织途径之后形成再生植株;而以子叶节作为外植体可以直接诱导不定芽形成再生植株。诱导不定芽的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA;诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D;诱导南瓜不定根的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LIAA。     

红茄子叶的不定芽诱导及植株再生

【目的】研究不同激素浓度和组合对红茄不定芽及根诱导的影响,建立红茄的高频再生体系,为开展茄子的遗传转化研究奠定基础。【方法】以红茄子叶为外植体,采用0．5～2．0mg／L6-BA、0．1～0．5mg／LIAA激素组合对不定芽进行诱导,采用0～0．5mg／LIAA对根进行诱导,筛选出最佳的分化培养基和生根培养基。【结果】在不定芽诱导培养基中,当6-BA浓度在0．5～2．0mg／L时,随着浓度增加,不定芽分化率逐渐升高;当IAA浓度在0．1,-0．5mg／L时,随着IAA浓度的增加,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6．BA2．0mg／L、IAA0.3mg／L的诱导效果最好,分化率高达86％。在根诱导培养基中,随着IAA浓度的增加,根诱导率呈先降低后升高趋势,诱导率可达100．0％。【结论】红茄子叶不定芽诱导最佳培养基为MS＋2．0mg／L6-BA＋0-3mg／LIAA;不定芽生根最佳培养基为MS＋0．1mg／LIAA。     

杂交构树叶片愈伤诱导及植株再生

以杂交构树试管苗叶片为外植体,探讨了不同植物生长调节剂组合、叶片着生部位、GA3浓度对杂交构树不定芽再生的影响,建立了叶片不定芽再生体系,为今后的遗传转化奠定了基础。结果表明:杂交构树叶片愈伤诱导和不定芽分化的最适培养基是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L,愈伤诱导率为100%,不定芽再生率为91.7%;叶片培养最佳取材部位是自试管苗顶端向下伸展叶第l～3片叶;培养基添加0.5mg/LGA3,芽增殖系数高达8.22,芽有一定的伸长生长;附加低浓度的6-BA0.3mg/L,芽明显伸长,长为3.89cm,得到壮苗,可直接用于生根培养;生根培养添加NAA1.0mg/L,诱导生根的时间最短为9d,生根率最高,达86.7%。     

甜瓜‘黄蛋子’子叶再生完整植株研究

为了通过不定芽发生途径建立甜瓜‘黄蛋子’体细胞再生完整植株的技术体系,并了解掌握该品种的再生能力和再生特点,以‘黄蛋子’的幼龄子叶作为外植体,进行了组织培养条件下的再生试验。试验结果表明,在MS+6-BA2.0mg/L不定芽诱导培养基上外植体发出的再生芽(丛)为不定芽来源。58块外植体的不定芽分化频率平均为44.8%,并产生质地、数量不等的愈伤组织。在MS+6-BA0.05mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长长大,但存在程度不同的玻璃化现象。在1/2MS+IAA0.5mg/L生根培养基上无根苗发根,生根率可达99%。与相关文献中报道过的其他甜瓜厚皮品种相比较,‘黄旦子’属再生能力弱的品种,但品种内个体之间存在再生能力上的明显差异,通过选择自交技术有可能获得再生能力得到提高的纯化株系。     

甘草下胚轴离体再生体系的建立

以甘草下胚轴为外植体,对影响下胚轴离体再生不定芽的因素进行研究。结果表明:KT具有显著作用,与6-BAI、BA结合,可高效诱导下胚轴直接产生不定芽,优化的分化培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L KT 0.5 mg/L IBA 0.5 mg/L,芽苗分化率平均为41.5%。同时,进一步研究了不同基因型、预培养处理对甘草下胚轴再生的影响,结果发现:胀果甘草下胚轴离体再生频率最高,达44.7%;预培养4 d对甘草下胚轴再生不定芽具有促进作用。建立甘草下胚轴离体再生不定芽体系,为甘草基因工程品种改良及优良品种快速繁殖打下基础。