MDCK细胞感染犬传染性肝炎病毒后的超微结构观察

MDCK细胞感染犬传染性肝炎病毒(ICHV)BJ—1株后6h未见明显改变;12～18h胞核肿大,核内形成黑色颗粒样球状体;24h胞核内偶见病毒粒子,36h许多细胞内含病毒、病毒副晶体、形态各异的包涵体和多种板层样结构;48h感染细胞核膜以破损或出芽方式将成熟病毒粒子释入胞浆.     

MDCK细胞悬浮驯化及对H9亚型禽流感病毒敏感性的研究

为获得对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮MDCK细胞株,通过逐渐降低血清的方法对贴壁依赖的MDCK细胞进行了无血清纯悬浮驯化,最终获得了一株对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮细胞株MDCK-sus。通过测定表明,该细胞株能够迅速增殖,倍增时间为24h,使用H9亚型禽流感病毒BX13株感染该细胞,培养72h,培养液的病毒HA价可达到1∶512,每0.1mL病毒含量达到108.5EID50,为利用生物反应器大规模悬浮培养制备H9亚型禽流感病毒抗原奠定了基础。     

犬细小病毒出血肠炎型继发犬瘟热的防治措施

正犬细小病毒病是由犬细小病病毒所引起的一种急性传染病。潜伏期7~14d。出血性肠炎型临床上表现,以呕吐、胃肠道出血和白细胞减少为特征。无论哪品种犬的临床表现均已发病率高、死亡率高和传染性强为特征,如不及时治疗很容易继发感染犬瘟热。长途运输,冬春、秋冬季节交替发病率更高。1出血性肠炎细小病毒病发病情况2014年4月21日于某拉来一条3月龄,体重31kg重,     

H9N2流感病毒诱导MDCK细胞自噬对病毒复制的影响

本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的 MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自噬。随后试验利用3-MA抑制细胞自噬、Rapamycin诱导细胞自噬,荧光定量PCR检测NP mRNA水平,TCID50检测病毒的滴度进行细胞自噬与病毒复制的研究。结果表明： Rapamycin可显著增加NP mRNA水平和病毒滴度（P ＜ 0.01）|3-MA可以显著降低NP mRNA水平和病毒滴度（P ＜ 0.01)。说明H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬可促进流感病毒的复制。 [关键词] H9N2 流感病毒|细胞自噬|病毒复制|MDCK细胞|诱导     

抗犬瘟热病毒与犬细小病毒特异性免疫制剂的检测

正近年来,随着我国社会经济的发展,我国的宠物文化也相应有了较大的提升,越来越多的宠物进入到人们的日常生活中,它们已经成为众多人生活中的重要组成部分。据统计,在饲养宠物的人群中,大约80%的人饲养宠物犬,因此犬的健康问题也越来越引起人们的重视,宠物犬在饲养中遇到的常见病比较多,其中犬瘟热和犬细小病毒病因其传染性强、发病率高、死亡率高,已成为危害我国养犬业的主要传染病。目前,疫苗免疫注射对预防这     

同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。     

犬传染性肝炎病毒提纯及其部分物理化学特性的分析

用聚乙二醇提纯犬传染性肝炎病毒(ICHV)。对提纯病毒,测定其完整粒子和不完整粒子的浮密度分别为1.336g/ml和130g/ml,沉降系数分别为747S和285S;用PAGE分析病毒蛋白质,含12种多肽,用SDS—PAGE测定其分子量,分别为11.5、7.8、7.0、6.4、5.8、5.4、3.2、2.7、2.4、1.8、1.6和1.3KD;提纯病毒核酸,测定其沉降系数为28S,分子量为18.77×10~6D,解链温度约为82℃,病毒核酸为线状双链DNA,核酸含量为12.5％。     

犬传染性肝炎病毒在犬肾传代细胞中增殖过程的观察研究

用免疫荧光技术对犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）在感染犬肾传代细胞中的增殖过程进行了观察。结果：ＩＣＨＶ感染犬肾传代细胞吸附时间为１ｈ，在感染过程中出现二次“隐蔽期”和二次“繁殖高峰”。结果表明，ＩＣＨＶ感染犬肾传代细胞４８ｈ收毒较为合适。     

同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立

为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物.通过优化反应条件,建立同时扩增CDV (507 bp)、CPV (287 bp)、CAV-Ⅰ (590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法.实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性;CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9 TCID50、101.7 TCID50、101.7 TCID50和102.2 TCID50.利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33％(7/30)、CPV阳性率为20％(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33％(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断.     

犬瘟热的诊治

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性传染病,其传染性强,发病率高,临床症状也极其复杂,是当前对养犬业危害最大的疫病。     

犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及ATP酶的影响

为了研究犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及能量代谢的影响,建立了犬细小病毒感染模型,并于病毒感染后6、12、18、24、30 h和36 h,观察细胞的生长状态,同时检测细胞增殖能力和ATP酶活性。与对照细胞相比,病毒感染细胞在24、30、36 h时增殖活性明显下降(P0.05)。     

瘟热病毒的研究现状

瘟热病毒是副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）麻疹病毒属（Ｍｏｒｂｉｌｉｖｉｒｕｓ）内对食肉目、鳍足目等动物致病的一类相关病原,包括犬瘟热病毒（Ｃａｎｉｎｅｄｉｓ－ｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ,ＣＤＶ）、海豹瘟热病毒（Ｐｈｏｃｉｎｅｄｉｓｔｅｍ－ｐ...     

犬传染性肝炎病毒的形态发生学及抗原定位研究

应用免疫金电子显微镜技术研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的增殖过程及其病毒抗原在感染细胞内外的定位.结果显示:(1)吸附在细胞膜表面的病毒粒子,主要通过细胞吞饮作用侵入细胞,而吸附在微绒毛膜表面的病毒粒子则可直接“渗入”细胞;(2)在病毒感染不同时用的细胞核内观察到均质型、微粒型、颗粒型、副晶格型、病毒包涵体型及致密型等6种类型包涵体,其中前5种能被免疫金标记,它们是尚未形成病毒粒子的抗原蛋白、病毒装配后剩余的抗原蛋白或ICHV的病毒粒子结晶,致密型包涵体未被免疫金标记,可能是病毒DNA;(3)感染细胞内出现的某些特殊结构均不具有病毒抗原性,其中纤维样结构和管状结构在病毒增殖过程中起支持作用.     

犬传染性喉气管炎病毒的分离及鉴定

用犬肾细胞 (MDCK)从疑似犬传染性喉气管炎病毒感染犬的急性期血清中分离到 1株病毒 ,经血凝试验、免疫电镜观察、中和试验、免疫荧光抗体试验、细胞培养特征观察和回归动物试验等鉴定 ,证明所分离的病毒为犬传染性喉气管炎病毒 ,命名为 BJ- JB- 3。     

犬传染性肝炎病毒的细胞质内发生途径

应用免疫金电子显微镜技术,研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的形态发生及抗原定位,发现ICHV除了在宿主细胞核内发生外,还有细胞质内发生途径.在细胞质内,病毒核壳体的装配以均质致密包涵体和副晶格包涵体为“基地”,这与细胞核内形态发生方式相似.免疫金标记显示,细胞质包涵体中含有大量的ICHV抗原成分,是核壳体在细胞质内装配的病毒结构蛋白来源.同时,在感染的细胞质内也观察到与细胞核内相同的病毒核心样结构.     

H5N1 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞中增殖条件的研究

目的：探索H5N1亚型禽流感病毒在MDCK中增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H5N1亚型禽流感病毒接种到6孔板培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量、不同浓度TPCK-胰酶,接毒后不同时间病毒的HA滴度。根据确定的最佳增殖条件将病毒接种到微载体培养的MDCK细胞中进行大规模增殖。结果：最佳病毒增殖条件接毒量MOI为5＆#215;10-4、TPCK-胰酶浓度为4μg/mL,在5 L生物反应器中重复验证,获得稳定的试验结果,病毒血凝价最高为8 log2。结论：本研究为禽流感疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。