分子修饰前后人参皂苷体外抗马立克氏病毒鸡胚成纤维细胞模型的建立

用雏鸡将马立克氏病毒(MDV)血毒复壮,分离发病鸡淋巴细胞并接种于鸡胚成纤维细胞,观察其病变。获得适应鸡胚成纤维细胞(CEF)的MD强毒,通过电镜观察、琼脂扩散实验进一步鉴定病毒,并建立了MDV感染CEF细胞模型,为研究人参皂苷及其衍生物的体外抗病毒作用及其机制奠定基础。     

磷酸钙介导马立克氏病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞

提取马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｒｉｓｐｅｎｓｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）总ＤＮＡ，运用磷酸钙－ＤＮＡ沉淀转染ＣＥＦ，可以成功地得到ＭＤＶ的病变空斑。用每份沉淀含２０μｇ的ＭＤＶ和细胞总ＤＮＡ转染次代ＣＥＦ，其转染形成空斑的数量为４－２２１个，转染频率约为１－０＾－６＝１０＾－５；将磷酸钙－ＤＮＡ沉淀加入到ＣＥＦ中，于３７℃５％ＣＯ２培养箱中培养４ｈ后，室温下用１５％甘油休克２ｍｉｎ，由此可以提     

脂质体介导马立克病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞

利用粗提的马立克病病毒(MDV)CVI988感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA与脂质体包裹转染CEF,获得具有感染性的MDV。结果表明,使用3μg MDV感染的CEF总DNA转染CEF,6 d~7 d后可形成0~16个MDV特有空斑。     

用鸡胚检测鸡马立克氏病疫苗的免疫效果

将火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗接种于鸡胚卵黄囊、然后检查绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）上病毒痘斑（以下简称“痘斑”）生长情况,以此作为ＨＶＴ疫苗免疫前效力检测的手段,得到满意效果。１材料与方法１．１ＭＤ强毒（ｖＭＤＶ）分离自本公司某鸡场严重感染ＭＤ鸡的血液,经原北京农业大学鉴定为一株ｖＭＤＶ。历年采购的国产和进口ＨＶＴ疫苗３０批次,分甲、乙、丙３组进行观察。１．２经血清学检查（ＭＤ-ＡＧＰ）并证明无ＭＤ抗体的种鸡所产种蛋,按常规方法,孵育到４～５ｄ的鸡胚用于接种;卵黄囊接种已稀释好的ＨＶＴ疫苗,每份ＨＶＴ疫苗分１,２…     

鸡马立克氏病双价疫苗的研究 Ⅰ.马立克氏病SB-1病毒株在鸡胚皮肤细胞中的培养试验

以简便技术制备鸡胚皮肤(CES)细胞,进而进行了鸡马立克氏病(MD)SB-1株病毒适应于CES细胞和致CES细胞病变效应(CPE)的研究.试验表明,在形成CPE的细胞中可检出核内包涵体,MD的SB-1株病毒的CES细胞毒的蚀斑形成单位(pfu)为105.7201-7.2122/m L.本研究为以后用CES细胞增殖SB-1株病毒以代替鸡胚成纤维细胞(CEF)制造疫苗提供了依据.     

人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞最大安全浓度的测定

采用组织细胞培养方法,测试了人参皂苷及其衍生物在鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中的最大安全浓度。结果显示:药物在高浓度时,对CEF细胞表现出毒性,在中、低浓度时对CEF细胞具有促增殖作用。人参皂苷及其衍生物对CEF细胞的最大安全浓度为分别为375μg/mL和187.5μg/mL。     

鸡马立克氏病的诊断及防制

鸡马立克氏病是鸡常见的病毒性传染病,又称鸡麻痹症,对养鸡业危害很大,可造成重大损失.1 病原该病毒能在鸡胚绒毛尿囊膜上产生典型的痘斑,卵黄囊接种较好.能在鸡肾细胞、鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞上生长产生痘斑.完整病毒的抵抗力较强,在粪便和垫料中的病毒,室温下可存活4～6个月.细胞结合病毒在4℃可存活2星期,在37℃存活18小时,在50℃存活30分钟,60℃只能存活1分钟.     

人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病毒的作用

用马立克氏病毒(Marek′s disease virus,MDV)人工感染雏鸡为疾病模型,采取人参皂苷及其衍生物口服,通过间接免疫荧光试验动态观察人参皂苷及其衍生物能否减少MDV抗原在组织中的分布。结果人参皂苷组、衍生物组被检组织的阳性细胞数量明显比盐酸吗啉胍阳性对照组被检组织的阳性细胞数量少。表明人参皂苷及其衍生物抗MDV效果要优于盐酸吗啉胍。     

茎环RT-PCR检测马立克氏病毒感染鸡相关miRNA方法的建立

本研究旨在建立一种检测马立克氏病毒人工感染鸡相关miRNA表达变化的RT-PCR方法,探讨该方法在miRNA定量检测方面的应用价值.试验选择6个具有典型肿瘤结节的马立克氏病毒感染脾脏样品作为研究材料,同时采用6个正常鸡的脾脏样品作为对照材料.利用特异的茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对gga-miR-181a进行基于SYBRGreen Ⅰ的荧光定量PCR检测,并以U6为内参基因、2<'-ΔΔα>法检测gga-miR-181a的相对表达量.结果,在马立克氏病毒人工感染鸡的脾脏和正常鸡的脾脏中成功检测出gga-miR-181a-1的表达.证明茎环RT-PCR法能用于检测马立克氏病毒人工感染鸡的相关miRNA,并具有准确、快速、节约成本的优点.     

鸡马立克氏病的研究进展

前　　言马立克氏病(Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅ,ＭＤ)是由疱疹病毒引起的鸡淋巴细胞增生性肿瘤疾病。该病首次报道于1907年,其主要特征是病鸡的周围神经、性腺、各脏器、眼的虹膜、肌肉和皮肤的淋巴细胞浸润和形成肿瘤病灶。马立克氏病病毒最早由英国学者于1967年分离获得。本病主要发生于密集饲养的养鸡场,特别是肉仔鸡发生该病后损失严重。马立克氏病病毒还容易发生基因突变而增强毒力。不同品种的鸡对马立克氏病的易感性不同,采用马立克氏病疫苗可有效地控制该病的感染,但其免疫效果受许多因素的影响。要控制马立克氏病的发生,必须加…     

人参皂苷及其衍生物体内抗鸡马立克氏病毒的病理组织学观察

为探讨人参皂苷及其衍生物体内抗马立克氏病毒的作用机理,试验用马立克氏病毒人工感染雏鸡模型,口服人参皂苷及其衍生物,动态观察雏鸡的组织病理学变化,并比较治疗组和病毒对照组的病变差异.结果人参皂苷和衍生物治疗组的组织结构病变程度均低于病毒对照组.说明人参皂苷及其衍生物可以降低病毒对组织的损害程度,增强雏鸡对病毒的抵抗力.     

鸡马立克氏病疫苗概述

鸡马立克氏病(MD)是由疱疹病毒引起的淋巴组织增生性肿瘤疾病。预防接种是控制MD的有效手段。自1970年MD疫苗问世和应用以来,由MD造成的损失大大地减少了。如果按照1970年预防接种之前MD发病率计算,1983年美国应有6100万只鸡受MD肿瘤侵害,而实际上这一年仅360万只鸡发病,预防保护率达94％。     

用羽髓物鸡胚接种法诊断鸡马立克氏病

利用鸡胚卵黄囊接种试验 ,以绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）上病毒痘斑生长情况为依据 ,诊断鸡ＭＤ ,收到满意效果。１健康鸡胚经隔离饲养、血清学检验（ＡＧＰ）并证明无ＭＤ抗体的种鸡所产种蛋孵化的鸡胚。２羽髓浸液ＭＤ可疑鸡５只（７０日龄） ,每只鸡取翅羽２０根 ,剪下带羽囊的羽根放入消毒过的试管内 ,加入灭菌生理盐水３ｍＬ ,用消毒过的镊子挤出羽髓 ,弃去羽囊壳 ,破碎羽髓 ,搅拌后即为１份羽髓浸液 ,备用。３接种试验用上述羽髓浸液 ,按常规方法 ,即时（不加保存）接种于已孵化４～５ｄ的健康鸡胚卵黄囊 ,每份羽髓浸液接种１２个鸡胚 ,每胚…     

鸡马立克氏病病毒感染对鸡神经系统损伤的研究

为研究不同毒力的鸡马立克氏病毒(MDV)在鸡神经系统中的感染规律及其对神经系统的损伤进程,本研究选用不同毒力的血清1型MDV (MDV-1)病毒株感染4日龄的SPF鸡,在接毒后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、17 d、21 d、25 d、28 d和35 d动态检测病毒载量的变化,并对感染后5 d和21 d的不同病毒株感染鸡的脑部和坐骨神经进行组织病理学观察。结果显示,MDV-1强毒株在SPF鸡脑部的复制能力显著高于弱毒株(p<0.05);特超强病毒株BS在脑组织中出现的时间最早,早期复制最快。但不同毒力的MDV-1株在坐骨神经处的复制能力与其毒力无直接的关系。组织病理学观察显示,在感染早期MDV-1强毒株对SPF鸡脑组织的损伤强于弱毒株;在感染后21 d,强毒株和弱毒株造成的脑部损伤存在明显的不同;而在坐骨神经处,强毒株造成的损伤明显强于弱毒株。本研究揭示了不同MDV病毒株在SPF鸡脑和坐骨神经的复制动力学特征和组织病理学特征,为MDV-1在宿主神经系统中的感染、增殖及造成的损伤提供了实验依据。     

人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病毒的作用

为探讨人参皂苷及其衍生物体外抗马立克氏病毒(MDV)的作用机理,采用空斑试验测定人参皂苷及其衍生物对马立克氏病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的保护效果,结果发现人参皂苷及其衍生物均具有较好的抗病毒效果,特别是人参皂苷衍生物组增殖抑制的抗MDV空斑减少率达到盐酸吗啉胍的77%(55.62/72.52)。表明人参皂苷及其衍生物可以减轻病毒对CEF细胞的损伤程度。