N-linked glycosylation in Campylobacter jejuni and its functional transfer into E. coli

N-linked protein glycosylation is the most abundant posttranslation modification of secretory proteins in eukaryotes. A wide range of functions are attributed to glycan structures covalently linked to asparagine residues within the asparagine-X-serine/threonine consensus sequence (Asn-Xaa-Ser/Thr). We found an N-linked glycosylation system in the bacterium Campylobacter jejuni and demonstrate that a functional N-linked glycosylation pathway could be transferred into Escherichia coli. Although the bacterial N-glycan differs structurally from its eukaryotic counterparts, the cloning of a universal N-linked glycosylation cassette in E. coli opens up the possibility of engineering permutations of recombinant glycan structures for research and industrial applications.     

Role of inorganic polyphosphate in promoting ribosomal protein degradation by the Lon protease in E. coli

Inorganic polyphosphate (polyP), a polymer of hundreds of phosphate (Pi) residues, accumulates in Escherichia coli in response to stresses, including amino acid starvation. Here we show that the adenosine 5'-triphosphate-dependent protease Lon formed a complex with polyP and degraded most of the ribosomal proteins, including S2, L9, and L13. Purified S2 also bound to polyP and formed a complex with Lon in the presence of polyP. Thus, polyP may promote ribosomal protein degradation by the Lon protease, thereby supplying the amino acids needed to respond to starvation.     

传染性囊病病毒结构蛋白VP2的融合表达

将IBDV超强毒株HK46的结构蛋白vp2基因的cDNA片段插入表达质粒psoc的EcoRI位点,获得重组质粒pSOC-VP2．用pSOC-VP2转化E．coli BL21(DE3),获得表达VP2蛋白的工程菌BL-SOC-VP2．在1μG/mL IFIG诱导之下,BL-SOC-VP2表达了融合蛋白SOC-VP2,其相对分子质量为49000．SDS-PAGE检测表明,融合蛋白SOC-VP2的最大表达量为细菌总量的14．35％．ELISA分析表明,大肠杆菌表达的SOC-VP2能与IBDV阳性血清发生特异性反应．     

新生仔猪致病性大肠埃希菌的分离鉴定

从湖北某猪场发生典型黄痢的新生仔猪无菌采集粪便。上清接种小白鼠,取粪便和死亡小白鼠的心血接种麦康凯琼脂培养基,桃红色菌落,革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌,用法国BioMerieuxATB全自动细菌鉴定及药敏仪ID32E肠杆菌鉴定条鉴定。得到大肠埃希菌的极好鉴定结果。不同剂量接种小白鼠,证明其毒力,用163种O抗原标准血清玻板凝集试验定型为O101型。用ATB VET药敏试条进行药敏试验结果显示对7种抗生素敏感。     

鸡霉形体与大肠杆菌混合感染的诊断与防治

德州市某鸡场2002年3月从外地引进蛋雏鸡6000套,饲养在同一鸡舍内,1周后开始发病.主要症状为呼吸困难、口罗音,曾用环丙沙星等药物治疗,4天后症状明显减轻,停止投药.至20日龄时,由于鸡群密度大,舍内环境差,通风不良,氨味强烈,又激发了呼吸道症状,于是又投服环丙沙星、红霉素等,数天后症状减轻.期间停药后有复发,症状时轻时重.50天后开始出现大量病鸡,鸡群精神萎靡、羽毛蓬松、气喘、咳嗽、流鼻涕、呼吸口罗音,每天死亡90～120只,高峰时每天死亡150只,期间也曾用红霉素、强力霉素饮水,但效果不明显.     

功能性卵黄粉对断奶仔猪腹泻、肠道E.coli和生长性能的影响

在基础日粮中分别添加0.1%(试验Ⅰ组)和0.2%(试验Ⅱ组)的功能性卵黄粉,观察其对断奶仔猪生长性能、肠道菌群、肠绒毛形态的影响.结果表明:试验Ⅰ组和Ⅱ组仔猪的腹泻率分别极显著低于只喂基础日粮对照组的54.8%(P＜0.01)和84.3%(P＜0.01);试验第28 d,试验Ⅰ组粪便中致病性大肠杆菌数和细菌总数极显著...     

绵羊Granulysin在大肠杆菌中的表达与鉴定

根据GenBank中公布的绵羊Granulysin基因序列设计引物,用PCR法从重组质粒中扩增出含BamHI/XhoI酶切位点的Granulysin片段,双酶切后克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-Granulysin,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白分子量约为41 kDa,并以包含体形式存在。     

金针菇免疫调节蛋白基因克隆及其表达

根据金针菇免疫调节蛋白基因(FIP-fve)合成1对引物,以从金针菇鲜子实体提取的RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到目的片段,构建重组质粒pUC19-FIP-fve,测序将其与pET30a质粒分别用限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ酶切,连接,构建原核高效表达载体pET30a-FIP-fve,转化感受态大肠杆菌DE3(BL21),经IPTG诱导该基因在大肠杆菌DE3(BL21)中获得了大量表达。该结果对将金针菇免疫调节蛋白开发为免疫调节、抗过敏、抗肿瘤新药具有重要意义。     

禽源性大肠杆菌HPI irp2基因序列的扩增及比较

从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌（Escherichia coli）,用其中YZG040515、NTLFC040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛（HPI）irp2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PCR产物克隆到pGEM-T-easy中,经EcoR I酶切鉴定为阳性者进行序列测定。结果表明：该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达98％以上。证明禽源性大肠杆菌中具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,结合临床发病情况和流行病学,提示该毒力岛与日趋严重的家禽大肠杆菌病可能有一定的相关性。     

大肠杆菌987 P基因工程菌苗预防实验性仔猪黄痢试验

用基因工程技术构建的大肠杆菌HB101/pBP52菌株能产生987 P型菌毛,但不产生热稳定肠毒素(ST),用该茵株制备灭活苗,在产前21天免疫18头第一胎怀孕母猪.在分娩后24～48小时内,用产热稳定肠毒素(ST)大肠杆菌987菌株(O9:K103,987P:NM)人工感染所产仔猪102头,88头仔猪在观察期(攻毒后7天)结束时安全无恙,保护率达86.27％.结果表明:用无毒大肠杆菌HB 101/pBP 52菌株制备的灭活苗可以有效地预防987P菌毛型致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢.     

乳糖诱导成纤维细胞生长因子-21在大肠杆菌中的表达

[目的]研究用乳糖作为诱导剂诱导成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor 21,FGF21)基因重组蛋白的表达,以探讨其工程化生产的可能性。[方法]对影响重组表达产物的乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度等进行比较,并以IPTG诱导作为对照,确定最佳的乳糖诱导条件。[结果]对于重组目的蛋白,乳糖可以起到很好的诱导效果,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。其最佳表达条件为:在A600为0.8～1.0时,加入乳糖至终浓度为0.5 g/L,在35℃下诱导6 h。[结论]乳糖可诱导FGF21基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了试验数据和借鉴。     

鹌鹑大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离与鉴定

通过对病鹌鹑的肝脏和脾脏中分离到的细菌，进行培养、生化鉴定及动物接种试验，确诊为大肠杆菌和沙门氏菌混合感染，在不同禽舍中采取的三处水样中，同样分离出了上述两种细菌，分离的6株大杆菌血清型鉴定结果Y2，Y6，Y8为O1；Y3，Y7，Y9为O22，并且均产生肠毒素，药敏试验结果从脏器中分离细菌对庆大霉素、卡那霉素、新霉素高度敏感；水样中分离的细菌对氯霉素高度敏感。     

非洲鸵鸟粪便中大肠杆菌的分离与鉴定

为探讨非洲鸵鸟（Struthio camelus）腹泻是否与大肠杆菌有关,以9羽非洲鸵鸟粪便为研究对象,将纯化培养后的细菌进行革兰氏染色、细菌形态学鉴定、生化鉴定。结果表明,2～9号菌株在麦康凯培养基生长为红色、湿润的圆形菌落,1号菌株在麦康凯培养基生长为白色透明、湿润的圆形菌落;革兰氏染色均为阴性,镜检均为红色杆菌;9株菌株均能发酵葡萄糖、甘露醇、阿拉伯糖、麦芽糖,大部分菌株能分解山梨醇、乳糖、鼠李糖、蔗糖、棉子糖,1株菌不能发酵乳糖且在麦康凯培养基上呈白色透明菌落,所有菌株均不能利用硫化氢、枸橼酸盐,所有菌株VP试验、尿素反应均为阴性,所有菌株MR试验、吲哚试验均为阳性,9株被检菌株均为大肠杆菌。     

Jo-1蛋白在大肠杆菌中的克隆与表达

构建在E.coli中表达人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)的质粒。用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,将此片段定向克隆到麦芽糖融合蛋白表达载体pMAL-c中,诱导表达获得Jo-1的可溶性融合蛋白,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验表明,表达的融合蛋白能与含有抗Jo-1抗体的病人血清发生特异反应,重组融合蛋白具有Jo-1蛋白的免疫原性和免疫特异性。     

大肠杆菌热敏感肠毒素的检测与制备

为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;采用SephadexG 100纯化热敏感肠毒素LT并采用SDS PAGE电泳检测蛋白纯度,表明该方法可以除去杂蛋白,肠毒素蛋白分子量为12 5KD和25KD