核型多角体病毒对斜纹夜蛾酚氧化酶活性及血淋巴黑化的影响

以斜纹夜蛾核型多角体病毒(SlNPV)为免疫刺激因子,观察SlNPV对斜纹夜蛾幼虫酚氧化酶活性及其血淋巴黑化的影响。结果表明:斜纹夜蛾幼虫感毒后,其血淋巴黑化率在感毒1d后开始逐渐下降,随着感毒时间推移和幼虫日龄增大,病毒抑制其黑化作用增强;在感毒后连续5d观察时间内,感毒幼虫血淋巴黑化率始终低于健康幼虫,且在感毒4~5d后达到显著水平;感毒幼虫体内及其血淋巴酚氧化酶活性在感毒后前3d都是逐渐上升而后逐渐下降;感毒幼虫体内酚氧化酶活性在感毒后前3d高于健康幼虫,在感毒4d后开始低于健康幼虫,且在感毒2、3、5d后均达到显著水平;与健康幼虫相比,感毒幼虫血淋巴酚氧化酶活性在感毒2d后开始明显增强,但感毒5d后急剧下降。     

虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸收峰的影响,推测虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用不是与该酶活性中心的铜离子结合,而可能是与酚氧化酶蛋白结合发生作用有关。用28.41μmol·L-1和85.23μmol·L-1亚致死剂量浓度的虫酰肼分别处理甜菜夜蛾5龄幼虫24、48和72h后,测定其头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的活性。结果表明,随着用虫酰肼处理时间延长,两个剂量的虫酰肼对幼虫头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的抑制作用基本呈逐渐增大趋势;处理后相同时间,高剂量的虫酰肼对酚氧化酶活性的抑制率基本上高于低剂量的抑制率;虫酰肼对头部酚氧化酶的抑制率最高,血淋巴次之,表皮最低。【结论】虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶具有明显的抑制作用,幼虫新表皮形成过程受到阻碍可能与虫酰肼抑制酚氧化酶的活性有关。     

副珠蜡蚧阔柄跳小蜂寄生对橡副珠蜡蚧体液免疫及营养代谢的影响

为探索副珠蜡蚧阔柄跳小蜂毒液在抑制橡副珠蜡蚧免疫和调节其营养代谢方面的作用,对比解析了橡副珠蜡蚧被寄生前后体内血淋巴酚氧化酶活性、黑化反应、凝集素活性、血淋巴蛋白与血淋巴还原性糖含量等指标变化。结果表明：副珠蜡蚧阔柄跳小蜂的寄生显著影响了橡副珠蜡蚧的血淋巴酚氧化酶活性、黑化反应以及凝集素活性;与未被寄生的蜡蚧相比,被寄生蜡蚧的血淋巴酚氧化酶活性和黑化反应率显著降低,不同蜡蚧血淋巴凝集素活性在24 h内的变化趋势不同;副珠蜡蚧阔柄跳小蜂的寄生也显著影响橡副珠蜡蚧血淋巴蛋白与还原性糖含量;除寄生后24 h外,被寄生后蜡蚧的血淋巴蛋白含量均显著低于未被寄生的蜡蚧;被寄生蜡蚧的血淋巴还原糖含量显著高于未被寄生的蜡蚧。副珠蜡蚧阔柄跳小蜂毒液可通过调节寄主体内多种生理生化代谢水平来保障其后代的发育。     

核型多角体病毒对烟青虫血淋巴的影响

为研究烟青虫核型多角体病毒(Heas NPV)侵染所引发的免疫机理,本试验以浓度105PIB/μl、106PIB/μl和107PIB/μl Heas NPV侵染5龄幼虫,分别测定了处理后烟青虫幼虫血淋巴中血细胞总量、浆血细胞和颗粒细胞的数量、酚氧化酶(PO)的活性以及血淋巴的体外黑化率,同时还用显微镜观察了Heas NPV侵染血细胞的过程。结果显示:与对照组相比,106PIB/μl和107PIB/μl的Heas NPV溶液处理导致5龄幼虫血淋巴中血细胞总量、浆血细胞和颗粒细胞的数量显著上升(P0.05),并且在感毒后3 d达到峰值。105PIB/μl的Heas NPV溶液处理后,烟青虫5龄幼虫血淋巴中血细胞总量、浆血细胞和颗粒细胞的数量呈缓慢上升趋势。106PIB/μl的Heas NPV溶液处理的5龄幼虫的PO活性先增长后下降。在连续观察的5 d内,对照组幼虫血淋巴体外黑化率始终为100%,而处理组幼虫血淋巴体外黑化率呈下降趋势。以上结果说明,烟青虫幼虫血淋巴中的细胞免疫和体液免疫在Heas NPV侵染防御中发挥了重要作用,幼虫感染病毒后通过血细胞数量的增加和PO活性的升高来清除外来病原物。     

亚致死浓度甲氧虫酰肼对甜菜夜蛾蛋白质和糖类含量的影响

研究了亚致死浓度甲氧虫酰肼对甜菜夜蛾幼虫血淋巴蛋白质和糖类含量的影响,结果表明:甲氧虫酰肼处理甜菜夜蛾幼虫72 h后,能显著提高血淋巴中的蛋白质含量,并且随着处理浓度的增加而升高,LC_(40)处理组蛋白含量最高为6.74 mg/mL。此外亚致死浓度甲氧虫酰肼处理后对甜菜夜蛾还存在一定的后续影响,4龄时,LC_(10)、LC_(20)和LC_(30)处理组的蛋白质浓度显著高于对照组,而LC_(40)处理组的蛋白质浓度在各处理组中最低为7.61 mg/mL。血淋巴SDS-PAGE分析也表明,LC_(10)、LC_(20)和LC_(30)处理组几条主要蛋白条带含量要明显高于对照组。5龄时LC_(10)、LC_(20)处理组的蛋白含量要显著低于LC_(30)、LC_(40)处理组和对照组。SDS-PAGE分析结果表明,5龄血淋巴中最主要蛋白条带(85.1KD)含量在LC_(10)、LC_(20)处理组中要明显低于对照组和其他处理组。对甜菜夜蛾幼虫血淋巴中总糖含量测定结果表明,亚致死浓度的甲氧虫酰肼对甜菜夜蛾幼虫血淋巴中总糖含量的升高具有促进作用。杀虫剂处理72 h后,各处理组的总糖含量要显著高于对照组。甲氧虫酰肼处理结束后,对甜菜夜蛾幼虫后续不同发育阶段的总糖含量也有一定持续影响,如4龄和5龄各处理组的糖含量都明显高于对照组。     

核型多角体病毒对斜纹夜蛾两种酶活性的影响

对感染核型多角体病毒的斜纹夜蛾(Spodoptera lituta)幼虫血淋巴酯酶和酚氧化酶进行了电泳分析,结果表明,两种酶的谱带在感染病毒后12h发生了明显的变化,导致酶带位移和新酶带的产生,在虫体内建立了新的酶系统;酚氧化酶比活性在感染核型多角体病毒后12 h最低,48h达到最高点.     

侧沟茧蜂与核型多角体病毒对寄主甜菜夜蛾幼虫生长的影响

研究了甜菜夜蛾2龄末幼虫被淡足侧沟茧蜂寄生及核型多角体病毒感染后,寄主体长、体宽、头壳宽度及体重的变化.结果表明:各处理组形态学指标均低于对照组,表明甜菜夜蛾在被寄生及感毒后,其生长发育受到了明显抑制.     

五龄期家蚕幼虫血淋巴酚氧化酶活性研究

以家蚕为试验材料,调查了5龄幼虫从起蚕到熟蚕血淋巴酚氧化酶的活性变化情况。结果表明,酚氧化酶活性呈现出先升高后降低的趋势,其中在5龄起蚕和熟蚕时酚氧化酶活性较低,而在盛食期(5龄第5天)活性最高。     

家蚕眠期血淋巴酚氧化酶活性变化及其基因表达分析

[目的]探究酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)及酚氧化酶在家蚕眠期血淋巴中的变化规律,为深入解析家蚕眠期酚氧化酶的功能及其基因表达特征提供新线索.[方法]以家蚕四龄将眠、四龄眠(头壳刚开裂)0h、四龄眠6 h、四龄眠12 h、四龄眠24 h和五龄起蚕为试验材料,采用实时荧光定量PCR检测其血淋巴PPO1和PPO2基因的表达情况,并分析血淋巴酚氧化酶活性的变化规律.[结果]家蚕血淋巴PPO1和PPO2基因在四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期均有一定程度的表达,且两者的变化规律一致,表现为四龄将眠最高、五龄起蚕最低,总体上呈先减后增再减的变化趋势.在家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性整体上也呈先降低后急剧升高再降低的变化趋势,四龄将眠为5.99 U/mg,五龄起蚕为6.02 U/mg,与酚氧化酶原基因表达模式基本一致.[结论]家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性变化规律与酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)的转录表达模式基本一致,说明酚氧化酶在家蚕眠期即发挥免疫防御功能,又参与蚕体新旧表皮的更替过程.     

氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾的亚致死效应研究

为了探讨亚致死浓度氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)生长发育及解毒酶活性的影响,采用饲料混毒生物测定法,确定氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾3龄幼虫的亚致死剂量(LC25和LC50),并研究其对甜菜夜蛾的亚致死效应。结果表明:与对照相比,亚致死浓度的氯虫苯甲酰胺处理后,甜菜夜蛾幼虫历期和蛹期显著延长,幼虫体重和蛹重显著减轻,羽化率、单雌产卵量和下一代卵的孵化率均下降,说明亚致死浓度氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾种群增长有一定的抑制作用。亚致死浓度的氯虫苯甲酰胺处理甜菜夜蛾3龄幼虫后,其体内的酯酶和多功能氧化酶活性均显著低于对照,表明亚致死浓度的氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾的酯酶和多功能氧化酶活性具有一定的抑制作用。这些结果证明,亚致死剂量氯虫苯甲酰胺导致甜菜夜蛾幼虫体内酯酶和多功能氧化酶活性的下降可以在一定程度上说明其种群生命参数的变化。此外,在亚致死剂量下,氯虫苯甲酰胺能够降低甜菜夜蛾种群的发育速率和繁殖力,这对甜菜夜蛾综合防治策略的制定有积极意义。     

转Bt基因棉和寄生蜂双重作用对棉铃虫生理的影响

研究了转Bt基因棉和斑痣悬茧蜂双重作用对棉铃虫生理的影响,分析比较取食转基因棉和常规棉后,寄生蜂后代的生长发育情况。结果表明,无论取食时间长短,寄生蜂幼虫发育时间都显著延长,茧质量没有显著差异;取食2 d,寄生蜂的茧期显著延长。棉铃虫幼虫血淋巴总蛋白含量和黑化反应表明,取食转基因棉后,棉铃虫血淋巴总蛋白浓度低于取食常规棉的,推测寄主血淋巴蛋白含量降低是导致寄生蜂生长缓慢的一个重要原因。取食转基因棉1 d后棉铃虫幼虫血淋巴的黑化时间显著长于取食常规棉的,2、3 d后,无论取食转基因棉还是常规棉,幼虫的血淋巴都没有黑化现象。     

球孢白僵菌对亚洲玉米螟幼虫血淋巴防御反应的影响

试验研究了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)老熟幼虫血淋巴免疫系统的影响。根据光学显微镜观察结果,将亚洲玉米螟老熟幼虫血细胞分为原血细胞、浆血细胞、颗粒血细胞、类绛色细胞、珠血细胞和囊血细胞6类,全血细胞数量变动范围为1.05×107～2.16×107/mL。亚洲玉米螟的老熟幼虫对注射的球孢白僵菌芽生孢子具有强烈的防御能力,表现为血细胞数量的变动和酚氧化酶活性的波动。注射芽生孢子后,亚洲玉米螟幼虫全血细胞数、浆血细胞数、颗粒血细胞数在0.25h有小幅下降,随后数量上升,在0.5～12h保持正常水平以上,之后随着时间的延长血细胞数量逐渐下降;注射后酚氧化酶在球孢白僵菌的激活作用下,分别在注射后1h和10h出现2个活性高峰。     

Bta对甜菜夜蛾的毒力测定

应用Bta对甜菜夜蛾进行了致死中浓度和致死中时间的测定,结果表明Bta对甜菜夜蛾幼虫具有活性,而且对不同龄期幼虫活性差异很大,如药后第3 d LC50 5日龄比1日龄大54.0倍,药剂浓度相差6.6倍,LT50相差2.8倍。利用Bta制剂防治甜菜夜蛾,关键是掌握在幼虫低龄期进行。     

昆虫激素对家蚕血淋巴和体壁酚氧化酶活性及其基因表达水平的影响

[目的]研究外源昆虫激素对家蚕酚氧化酶活性及其基因表达水平的影响,明确昆虫激素对酚氧化酶的调控作用,为深入解析家蚕酚氧化酶的功能及基因表达调控机制提供参考依据.[方法]对五龄第3d发育良好的家蚕幼虫注射蜕皮激素20E和保幼激素JH,以注射等量0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照,分别在注射3、6、12和24 h后解剖家蚕幼虫采集血淋巴和体壁,检测分析家蚕酚氧化酶活性及其基因表达的变化情况.[结果]注射外源JH和20E均能促进家蚕血淋巴酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达,有效增加酚氧化酶活性.家蚕血淋巴PPO1和PPO2基因对JH和20E的响应时间存在一定差异,其中,经JH处理后2个酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)仅在处理6和12 h时显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调表达;而经20E处理后PPO1和PPO2基因从3 h开始一直持续到12 h均呈上调表达趋势.JH和20E对家蚕体壁PPO1和PPO2基因的影响恰好相反,具体表现为:JH能有效抑制家蚕体壁PPO1和PPO2基因的表达,降低酚氧化酶活性;20E则促进家蚕体壁PPO1基因上调表达,但不影响PPO2基因表达.[结论]家蚕酚氧化酶原基因PPO1和PPO2表达受JH和20E的调控,且激素对酚氧化酶原基因表达水平的影响与其酶活性变化规律一致,提示酚氧化酶不仅参与昆虫激素的代谢,还与激素协同调控家蚕的蜕皮变态.     

酪氨酸羟化酶在黄粉虫血淋巴黑化反应中的作用

分析了黄粉虫血淋巴诱导前后酪氨酸羟化酶(TH)的表达特性,用TH抑制剂3-碘-L-酪氨酸(3IL)抑制血淋巴TH活性,观察TH活性被抑制后血淋巴黑化过程的变化.结果显示,TH在黄粉虫血淋巴免疫诱导后开始表达,抑制TH的活性,血淋巴黑化反应减弱,表明TH在黄粉虫血淋巴黑化反应中起着一定作用.     

黄粉虫不同发育时期酚氧化酶活性及表达差异研究

[目的]研究黄粉虫不同发育时期酚氧化酶（PO）的活性及其酶原（PPO）mRNA表达量差异。[方法]用3种不同的处理方式处理黄粉虫末龄幼虫、蛹和成虫。24 h后测定血淋巴的PO活性,并通过半定量RT-PCR方法检测PPO的表达量。[结果]PO活性表现出随龄期推进活性加强的趋势,即成虫的活性最高,蛹次之,末龄幼虫最低。没有经过处理时,蛹期几乎没有PPO基因的表达。经细菌处理后,PPO表达量增加,但末龄幼虫最低。[结论]黄粉虫不同发育时期的血淋巴PO活性以及表达量存在差异,具有发育时期相关性。     

11种农药对芦笋地甜菜夜蛾的室内杀虫活性

为筛选适合芦笋地甜菜夜蛾防控使用的低毒、高效杀虫剂,开展11种杀虫剂对甜菜夜蛾3～4龄幼虫的室内杀虫活性测定。结果表明,虫螨腈、乙基多杀菌素和氯虫苯甲酰胺稀释1 000倍液对甜菜夜蛾具有良好的杀虫活性,且速效性好。虱螨脲1 000倍、茚虫威2 000倍杀虫活性次之,药后5 d 死亡率也在95%以上。甜菜夜蛾核型多角体病毒1 000倍和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐4 000倍均速效性不强,药后5 d 对幼虫的致死率分别为85%和775%。苦参碱600倍、多杀霉素1 000倍、氟啶脲600倍、印楝素500倍对甜菜夜蛾的杀虫活性不高。     

毒死蜱和溴虫腈与SINPV混用对斜纹夜蛾体内3种酶活性的影响

在(28±1)℃下,以斜纹夜蛾(Spodptera litura F.)为靶标昆虫,分别测定亚致死剂量的毒死蜱、溴虫腈与斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodptera litura nucleopolyhedrovirus,SINPV)单独及混用后对幼虫多酚氧化酶(PO)、羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响.结果表明:用毒死蜱、溴虫腈、病毒、毒死蜱和病毒的混合悬液、溴虫腈和病毒的混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内PO活性变化幅度较小;毒死蜱和病毒混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内CarE活性远低于清水和病毒处理组;溴虫腈和病毒两者混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内AchE活性在12 h、24 h、36 h、72 h时高于清水和溴虫腈处理组.由此可见,农药与病毒混合后,能影响虫体内CarE和AchE活性的变化,但对PO影响较小.     

毒死蜱和溴虫腈与SlNPV混用对斜纹夜蛾体内3种酶活性的影响

在(28±1)℃下,以斜纹夜蛾(Spodoptera litura F.)为靶标昆虫,分别测定亚致死剂量的毒死蜱、溴虫腈与斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera lituranucleopolyhedrovirus,SlNPV)单独及混用后对幼虫多酚氧化酶(PO)、羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。结果表明:用毒死蜱、溴虫腈、病毒、毒死蜱和病毒的混合悬液、溴虫腈和病毒的混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内PO活性变化幅度较小;毒死蜱和病毒混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内CarE活性远低于清水和病毒处理组;溴虫腈和病毒两者混合悬液处理后,斜纹夜蛾体内AchE活性在12 h、24 h、36 h7、2 h时高于清水和溴虫腈处理组。由此可见,农药与病毒混合后,能影响虫体内CarE和AchE活性的变化,但对PO影响较小。     

烟夜蛾幼虫血淋巴凝集素的理化特性研究

为了明确烟夜蛾Helicoverpa assulta幼虫血淋巴凝集素的理化性质,采用糖抑制试验和血凝法检测,分别测定了凝集素与不同糖类的结合特性和不同因素对其凝集活性的影响.糖抑制试验结果表明,在选用13种糖类中,不同糖类对凝集素凝集活性的抑制作用不同,其中乳糖、D-半乳糖和L-鼠李糖具有完全抑制作用,说明烟夜蛾幼虫血淋巴凝集素与这3种糖类有专一结合特性.血凝法检测结果表明,不同因素对凝集活性的影响不同,其中烟夜蛾血淋巴凝集素凝集活性依赖于Ca2+,属C型凝集素;反复冻融对凝集素的活性没有影响;但随处理温度的升高或持续时间的延长,其凝集活性下降,在60℃处理15 min后凝集活性完全丧失;凝集素在p H 7.17时活性最高;凝集素对经胰蛋白酶修饰后的鸭血红细胞的凝集活性明显增强;血淋巴中酚氧化酶引起的黑化未对其凝集活性产生影响,说明同为体液免疫因子的凝集素与酶氧化酶在昆虫免疫防御中的协同性.