PP1γ2对昆明小鼠精子成熟和运动性的调控作用

【目的】PP1γ2是一种特异表达于动物睾丸和精子的蛋白磷酸酶,为精子发生、运动性获得与调控所必需的关键酶,本文对PP1γ2与昆明小鼠精子成熟和运动性调控进行研究。【方法】通过Western-blot技术,分析昆明小鼠不同条件下附睾头和附睾尾精子中磷酸化和非磷酸化PP1γ2的蛋白质表达量,探讨磷酸酶抑制剂okadaic acid (OA)和cyliculin A (CA)对附睾头和附睾尾精子运动度的影响。【结果】附睾尾精子中磷酸化PP1γ2的蛋白水平远远高于附睾头精子的(P0.05);db-cAMP、IBMX和Ca~(2+)不改变磷酸化PP1γ2的蛋白水平;OA和CA能显著提高附睾头和附睾尾磷酸化PP1γ2的表达水平,且能显著提高精子(尤其是附睾头的精子)运动度。【结论】PP1γ2通过磷酸化和去磷酸化作用,其酶活性发生变化,从而对昆明小鼠附睾精子成熟和运动性进行调控,即在附睾头精子中PP1γ2酶活性较高,精子运动度较低;在附睾尾精子中PP1γ2酶活性较低,精子运动度得到显著提高。     

睾丸支持细胞对体外精子活力的影响

通过建立小鼠睾丸支持细胞与精子共培养的方法,达到体外提高精子活力的目的.利用睾丸组织切片技术,观察并分析支持细胞对生精细胞的作用.从6~7日龄小鼠睾丸中分离睾丸支持细胞,体外培养两天后,形成细胞单层作为滋养层.取小鼠附睾尾内精子,转移到以支持细胞为滋养层的培养液中培养,同时设立对照组.通过精子分析仪观察各组精子的活力,结果显示,以支持细胞为滋养层的精子前向运动百分比为56.1±5.81%,显著高于对照组40.7±2.96% (P<0.05).利用激光共聚焦显微镜观察精子结构,结果显示两组精子形态结构差异不显著,表明支持细胞能够提高体外精子的活力,但不改变精子的形态结构.     

二氧化硫对大鼠附睾组织形态的影响

SO_2是大气中常见的污染物。前期的研究发现,SO_2可以影响生殖系统,但是SO_2是否对生殖系统中的附睾组织形态产生影响,是不清楚的。以雄性大鼠为试验模型,通过显微镜观察附睾组织切片来探究SO_2对附睾组织形态的影响。结果表明,SO_2可以引起附睾管内精子的数量减少,使精子运动能力消失;精子的排列方式由正常生理状况下的分散于整个附睾管变成集中于附睾管一端;SO_2还会使附睾管内的主细胞数量减少并使主细胞发生破裂。说明SO_2可以影响附睾的组织形态,影响生殖系统。     

谷胱甘肽过氧化物酶对哺乳动物精子完整性的获取和维护

在哺乳动物中,附睾精子成熟被认为是未成熟配子向具有受精能力的成熟精子转化的关键步骤,活性氧(ROS)在精子成熟过程中起着重要作用,并且其是精子成熟和获能的核心。因此,受精开始之前,精子在附睾内成熟和储存,和其他任何一种细胞一样,精子也面对氧化损伤。精子对脂质过氧化、DNA损伤的进攻极为敏感,并且影响其活力,影响受精。哺乳动物附睾用含有谷胱甘肽过氧化酶(GPx)的非酶和酶净化器面板控制雄性配子附近的过氧化氢的量,各种不同的谷胱甘肽过氧化酶(GPx)活性蛋白在哺乳动物附睾中表达,GPx4和GPx5拥有独特的位置和功能。本文旨在探讨,GPx活性蛋白家族在哺乳动物精子受精潜力中所发挥的重要性。尤其是在哺乳动物生育与不孕、医疗辅助生殖技术相关领域,并且其广泛应用于人类和动物雄性配子保护技术等领域。     

β防御素104a在不同日龄雄性山羊睾丸与附睾中的定位及表达特性

[目的]为了研究不同发育阶段晋兰绒山羊睾丸及附睾中β防御素104a(goat Beta-Defensins 104a,gBD104a)表达的特性。[方法]采用免疫组化法对绒山羊公羊睾丸和附睾中的gBD104a进行表达定位。[结果]免疫组化染色结果显示:在山羊睾丸的支持细胞、精母细胞、生精细胞、精子细胞中检测到的gBD104a阳性信号非常弱,且在120日龄以前,随着日龄的增加,山羊睾丸的gBD104a表达量逐渐增加,之后则随着日龄的增加而逐渐降低;在山羊附睾的柱状上皮细胞、附睾管腔游离端的纤毛细胞、管腔液中检测到的gBD104a阳性信号较强。对免疫组化结果进行光密度值分析显示不同发育阶段附睾不同片段表达量顺序均是:附睾体附睾头附睾尾,且差异显著(P0.05)。附睾体中gBD104a表达随着月龄的增加而增加,而附睾头中gBD104a表达则是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低;附睾尾gBD104a表达趋势与睾丸表达趋势的相似即:是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低。附睾精子免疫荧光结果显示,gBD104a定位在精子头部顶体、颈部和尾部主段。[结论]山羊睾丸和附睾中gBD104a表达具有时空特异性。附睾体可能是gBD104a与精子发生作用的部位。包裹在精子顶体部位的gBD104a可能与精子获能或顶体反应相关,其gBD104a功能需进一步深入研究。     

控制光照对非繁殖期种公鹅睾丸形态和组织学结构变化的研究

本试验通过遮光控制自然光照,对非繁殖期种公鹅的睾丸形态及组织学结构变化的研究,以求了解光照值与鹅生殖腺发育的关系,目的在于为制定广东鹅的反季节生产措施提供科学依据。试验结果表明:在正常繁殖期初期和繁殖期高潮,控制光照对试验组和对照组的睾丸形态、重量和精细管中精子的呈现度,其差异不显著;在作繁殖期控制光照,试验组和对照组在睾丸的形态、重量和精细管中精子的呈现度等方面均有良好的效应,其差异极为显著。     

高低精子活力的鸡睾丸和附睾转录组系统分析

为探究精子活力与睾丸和附睾组织对种公鸡基因表达的影响,本研究选取精子活力存在显著差异的海兰褐种公鸡8只(高活力4只,低活力4只),屠宰后采集其睾丸和附睾组织进行转录组测序。利用DESeq2的双因素模块筛选不同精子活力组间和不同组织间的差异表达基因,并进行功能富集分析。结果表明：1)2个组织高精子活力和低精子活力组间的差异表达基因有112个;在高精子活力组高表达的基因有32个,低精子活力组高表达的基因有80个。高低精子活力间差异表达基因显著富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生IgA的肠道免疫网络和甘油磷脂代谢3条通路,其中CTRP3、TDRD5、KATNAL2、SOCS3和CSF3等差异表达基因可能是调控鸡精子活力的重要基因。2)睾丸和附睾组织间鉴定出9 212个差异表达基因,在睾丸组织高表达的基因有5 206个,在附睾组织中高表达的基因有4 006个。睾丸特异性高表达基因显著富集在细胞周期、细胞核质转运、减数分裂和甘油磷脂代谢等8条通路,其中YTHDC2、MEIG1、GTSF1、JAM3和SFMBT1等差异表达基因在精子发生过程中发挥着重要作用。在附睾组织高表达的基因参与了MAP...     

弃去精清可使狐狸受胎率产仔数降低

在狐狸的人工授精中,有些输精员采精时只收集后半段浓精液,而将先射出的精清部分或全部丢弃;然后,再用精液稀释液稀释、输精,这种做法不科学。动物繁殖学研究表明,精子在睾丸中的曲精细管内不断产生,形成的精子随着精细管液流出,并经直精细管、睾丸网、输出管进入到附睾,在附睾中成熟并贮存在附睾内。睾丸输出管和附睾管上皮具有分泌作     

GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位

【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶-5（glutathione peroxidase type-5, GPX5）在成年绵羊附睾的表达特征以及GPX5蛋白在附睾中的定位,为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于-80 ℃冰箱,采用实时荧光定量PCR和Western blotting的方法,对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的GPX5 表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于4%多聚甲醛溶液中24h,按照石蜡切片的方法制做组织切片。用GPX5特异性抗体孵育组织切片,利用DAB显色试剂盒对阳性信号进行标记。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成年绵羊附睾头GPX5基因的表达量极显著高于附睾体和附睾尾（P＜0.01）,而在输精管和睾丸几乎不表达。Western blotting的结果显示,GPX5蛋白在成年绵羊附睾头高表达,在附睾体和附睾尾有微量蛋白存在,睾丸和输精管中未发现GPX5蛋白。这表明GPX5主要在成年绵羊附睾头表达;经过免疫组化染色分析,GPX5蛋白主要位于附睾头上皮细胞质以及静纤毛,附睾体和附睾尾中的GPX5蛋白主要集中在静纤毛。在附睾头、附睾体和附睾尾中的精子上以及附睾腔都可以观察到GPX5蛋白,表明GPX5蛋白从附睾上皮分泌到附睾腔中,随着精子在附睾中的运输与精子结合。【结论】在成年绵羊附睾中,GPX5主要由附睾头上皮细胞合成和分泌,在附睾管腔中与精子结合,为精子功能的正常发挥提供保护。     

环境因子对鲍和牡蛎精子运动能力及受精率的影响

研究了环境因子如K^ 、Na^ 、Ca^2 、Mg^2 、Cl^-、SO4^2-以及蔗糖、pH、氨海水对皱纹盘鲍（Haliotis discus Hannai）和太平洋牡蛎（Creastrea gigas）精子运动及受精率的影响。精子在0.4-0.5mol/L的NaCl、KCl溶液中运动能力为1005，但受精能力较差或完全不受精。在替代海水中无Ca^2 的情况下，牡蛎不受精，但鲍有较低的受精能力。Mg^2 作用不明显。在0.5-0.6mol/L蔗糖溶液中鲍精子能运动，且有较低的受精能力，但牡蛎精子完全不能运动和受精。氨海水对精子运动有一定的刺激作用。在pH为6.0-8.0时精子运动能力较强，但受精的pH适宜范围为7.0-8.0，同时鲍和牡蛎在精子运动和受精方面有明显差异。     

DBP暴露对雄性大鼠睾丸结构与功能的影响

目的利用成熟雄性大鼠为动物模型研究邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对哺乳动物生长发育及生殖的毒性作用.方法将40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为500,250,50 mg/（kg.d-1）3个染毒组和1个对照组,灌胃量为5 mL/kg体质量,灌胃法连续给药6周.对体质量、脏器系数等指标进行称量;对附睾中精子密度、精子畸形率等进行检测;对睾丸的组织学形态进行观察.结果与对照组比较,中、高剂量组体质量、睾丸、附睾及睾丸脏器系数指标有统计学意义（P〈0.05）;体质量、右侧睾丸和右侧附睾与染毒剂量呈负性相关（r=-0.771 03,P〈0.001;r=-0.638 9,P〈0.001;r=-0.618 5,P〈0.05）.高、中剂量组精子密度、精子活率分别与对照组和低剂量组比较均降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）;高、中剂量组总畸形率分别与对照组和低剂量组比较均增高,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论一定剂量的邻苯二甲酸二丁酯对大鼠的生长发育及睾丸功能具有毒性作用.     

间接免疫荧光方法检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达

采用间接免疫荧光方法对小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达进行检测.结果表明,小鼠睾丸组织Hsp70呈极强的表达(+++),并且在各级生精细胞及支持细胞都呈极强表达;小鼠附睾头、附睾体、附睾尾的Hsp70呈现极强表达(+++),主要在附睾上皮细胞,而管腔内精子偶见阳性染色.说明间接免疫荧光方法能够特异性、原位地检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达,而且操作简单,适用于研究Hsp70在精子发生和成熟过程的作用.     

P450芳香化酶活性调控对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生的影响

［目的］探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。［方法］将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天检测小鼠睾丸和附睾的发育及精子的发生情况。［结果］①各试验组与对照组比较,体重增长率无显著差异;②0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,在灌服后的第15天睾丸系数显著减少（P〈0.05）,其他各试验组与对照组比较无显著差异;③各试验组与对照组比较,附睾系数无显著差异;④在第15和30天,0.006-0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,精子密度显著减少（P〈0.05）,其他各组与对照组无显著差异。［结论］该研究使用的来曲唑浓度,对小鼠体重增长率及睾丸和附睾的发育率无显著影响或影响很小,但是超过0.006 mg/kg浓度时抑制精子的发生,说明一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够直接影响精子的发生能力。     

精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性

【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。     

GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达

为研究GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达模式,对初情期、体成熟期、老龄期3个生殖生理阶段绒山羊附睾及睾丸中的GPx5从mRNA和蛋白水平进行了检测。结果显示各生殖生理阶段绒山羊睾丸中均未见GPx5表达,附睾中均有GPx5表达。各生殖生理阶段附睾表达区域及表达量存在差异:初情期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部;体成熟期,附睾各区域GPx5 mRNA和蛋白的表达量极显著高于其他阶段,附睾起始部和附睾头部为主要表达区;老龄期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部,但较体成熟期明显减少。免疫组化定位显示GPx5蛋白主要分布于附睾上皮细胞,而且各年龄阶段绒山羊附睾腔内精子上都有明显的GPx5阳性信号。研究表明绒山羊附睾GPx5的表达区域及表达量变化与动物生殖生理阶段直接相关。     

乌贼墨多糖对环磷酰胺介导小鼠睾丸氧化应激损伤的干预效应

[目的]探讨乌贼墨多糖对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化应激损伤的保护作用.[方法]随机将70只成年雄性昆明小鼠分成7组：正常组、模型组、治疗组1、治疗组2、治疗组3、治疗组4和治疗组5,通过对小鼠腹腔注射环磷酰胺进行造模,灌胃乌贼墨多糖作为化疗保护剂,检测小鼠的体重、睾丸和附睾重量、睾丸指数和附睾指数、精子畸形率、睾丸中抗氧化指标,同时观察睾丸组织结构.[结果]乌贼墨多糖能提高小鼠体重和睾丸重量,降低精子畸形率,提高睾丸组织中抗氧化酶SOD和CAT活性,降低MDA含量,修复睾丸病理学损伤.乌贼墨多糖明显缓解环磷酰胺对睾丸的氧化损伤,其最佳灌胃剂量为80 mg/kg.[结论]乌贼墨多糖有可能作为临床上的化疗辅助药物.     

环境雌激素双酚A对小鼠睾丸功能的影响

为探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雄性小鼠睾丸功能的影响及可能机制,用低剂量(50μmol/kg)、中剂量(250μmol/kg)、高剂量(500μmol/kg)的BPA连续5 d对雄性小鼠腹腔注射给药0.1 ml,以注射E2为阳性对照,阴性对照组腹腔注射等体积大豆油溶剂,首次给药15 d后对小鼠睾丸及附睾的脏器系数、精子数、活动精子百分率、精子畸形率进行统计分析,并对睾丸进行组织病理学研究。结果表明:BPA处理后,小鼠睾丸重量、附睾重量变化不显著;睾丸和附睾脏器系数变化不显著;精子数下降,其中BPA中剂量组下降显著(P<0.05),BPA高剂量组下降极显著(P<0.01);活动精子率下降,其中BPA高剂量组显著下降(P<0.05);精子畸形率BPA各剂量组均升高非常明显(P<0.05);BPA各处理组睾丸精细小管排列出现了松散现象,睾丸间质出现不同程度的水肿,睾丸间质细胞分布稀疏,精细小管管腔内生殖细胞排列层次发生不同程度的紊乱,生殖细胞周围的Sertoli细胞数目稀少,Sertoli细胞脱落到管腔,管腔内的精子细胞数目稀少,损伤程度随BPA浓度增加而愈加严重。认为BPA对雄性小鼠的睾丸功能有损伤作用,并可能对子一代的发育有不良影响。     

卵巢移植对雄性受体鼠精子及生殖能力的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年受体雄鼠肾囊下,分别于移植后21d(A组)和28d(B组),回收卵巢移植体和卵母细胞,采集附睾尾精子,并对睾丸及精子进行形态学检测,计算畸形精子数.移植受体雄鼠的繁殖能力将依据与雌鼠合笼交配后的窝产活仔记录进行评价.结果表明,卵巢移植体生长并有卵泡发育,A、B组回收卵母细胞数组间无显著差异(P0.05);移植组不同时期卵巢移植体对雄鼠睾丸及精子形态无明显影响,其畸形率与对照组(正常雄鼠)相比差异不显著(P0.05);移植受体雄鼠与母鼠配种的窝产活仔数与对照组无显著差异(P0.05).初步证实在卵巢异性移植构建雌、雄性腺同体的生理环境中,卵巢移植体对受体雄鼠精子及生殖能力无明显影响.     

水貂取皮期与配种期睾丸形态参数测定及组织学观察

为探明水貂睾丸的季节性变化规律,试验测定了取皮期和配种期雄性水貂睾丸的基础形态参数,通过石蜡切片、苏木精-伊红染色方法对取皮期和配种期水貂的睾丸及附睾进行了组织学结构特征比较。结果表明,水貂取皮期睾丸呈长卵圆形,平均长径、短径和厚径分别为16.88mm±1.52mm、10.90mm±0.85mm和10.28mm±1.03mm,体积为1.05cm3±0.23cm3,平均重量达到1.032 3g±0.263 3g;水貂配种期睾丸呈短卵圆形,各项形态生理参数、体积及重量极显著高于取皮期(P0.01)。在光镜下,与取皮期相比,配种期水貂睾丸生精小管内细胞层数和种类较多,包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞,生精小管与附睾管管腔中存在大量精子。而取皮期生精小管内细胞疏松,仅见少量精原细胞,并且配种期生精小管直径极显著高于取皮期(P0.01)。     

许氏平鲉精子超微结构及超低温冷冻对其形态的影响

为进一步探索卵胎生许氏平鲉Sebastes schlegelii繁殖生物学特性,探究超低温冷冻技术对精子形态结构的影响,对许氏平鲉(体质量500～750 g)鲜精和超低温冷冻后精子的超微结构进行了研究。结果表明:经扫描、透射电镜观察,发现精子在变态过程中细胞核纵向增长,细胞质浓缩,成熟精子头部呈叶片状,无顶体;线粒体多向尾部基部集中,为精子运动供能,鞭毛由线粒体及轴丝组成且具侧鳍结构;精子经冷冻保存后,虽有少部分形态正常,但多数出现尾部断裂、部分线粒体丢失及线粒体内膜嵴和细胞膜受损等现象。研究表明,卵胎生许氏平鲉精子的头部形状和线粒体数与其他卵生鱼类有较为显著的差别,超低温冷冻后,精子形态结构受到较大损伤,推测多数精子受精活力减弱或失去受精能力。