微生物法检测婴幼儿奶粉中游离生物素方法研究

为了解决微生物法检测婴幼儿配方奶粉中生物素含量常遇到的问题,重点关注了试验过程中的标准曲线、培养基和接种液制备的操作细节。结果表明,采用该方法检测奶粉中的生物素时,标准曲线相关系数(R2)可达0.999 8,有较大的提高;平行测试的RSD为0.75%～2.14%,加标试验回收率在96.08%～98.25%之间,平均回收率为97.54%。通过本方法,优化了菌种活化、菌悬液制备及标准溶液配制过程,提高了检测效率和准确性。     

不同菌种对呕吐毒素脱毒效果的研究

本试验选择短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌为脱毒菌种,研究3种菌种的上清液、菌悬液与细胞悬浮液对呕吐毒素（DON）的脱毒效果。选择脱毒效果较好的处理,单因素设计,研究其在不同温度（35 ℃、45 ℃、55 ℃）、不同pH（5、7、9）下的脱毒效果。结果表明,3种菌种的上清液、菌悬液、细胞悬浮液均对DON有脱毒作用,其中短小芽孢杆菌菌悬液、枯草芽孢杆菌上清液、地衣芽孢杆菌上清液的脱毒率最佳,脱毒率分别为54.74%、63.32%、57.68%,其最适温度分别为55 ℃、45 ℃、45 ℃,脱毒率分别提高到74.35%、75.50%、83.51%,显著高于其他温度的脱毒率（P < 0.05）,其最佳pH分别为7、5、5,脱毒率分别提升到72.89%,70.81%,75.60%,显著高于其他pH的脱毒率（P < 0.05）。     

干酪乳杆菌KLDS1.0381高密度培养条件研究

以麦芽汁培养基为基础培养基,研究干酪乳杆菌生长的碳源、氮源、营养因子及培养条件,通过单因子试验和正交试验确定干酪乳杆菌的最优培养基配方和最佳培养条件,进一步选择菌种的最佳浓缩、富集条件。结果表明,培养基最优配方为麦芽汁培养基中添加1%乳糖、2%胰蛋白胨、20%西红柿汁和0.2%牛肉膏,初始pH 7.0;最适摇瓶装液量为100%。在最适条件下,37℃培养12 h后菌液中活菌数可达到1.37×1010cfu.mL-1。优化浓缩离心富集条件,4℃条件下,4 000 r.min-1离心30 min,离心后菌种存活率为76.27%,浓缩倍数为62.87,干酪乳杆菌高密度培养物中活菌密度可达8.62×1011cfu.g-1。     

黑皮鸡枞液体菌种发酵罐培养条件的优化

[目的]优化黑皮鸡枞液体菌种发酵罐培养条件,为大规模培养黑皮鸡枞液体栽培菌种及提高黑皮鸡枞菌产量和品质提供参考依据.[方法]采用液体发酵罐培养技术,以黑皮鸡枞液体菌种的菌球直径、均匀度、菌丝干重、漆酶、纤维素酶和多酚氧化酶活性为指标,通过单因素试验和均匀试验,优化碳(C)源、氮(N)源、碳氮添加量比(C/N)、接种量、装液量、培养温度和培养时间,筛选出黑皮鸡枞液体菌种发酵罐培养的最佳培养基和发酵工艺,并开展液体菌种栽培试验.[结果]黑皮鸡枞液体菌种发酵罐培养的最佳培养基为20.0 g葡萄糖+4.0 g高粱粉+3.0 g K2HPO4+1.0 g MgSO4+2片维生素B1+1000.0 mL蒸馏水,pH 6.5;发酵工艺:装液量12 L,接种量12%,培养温度25℃,转速90 r/min,培养时间100 h,罐压0.3 MPa,通气量0.9 m3/h.栽培试验结果表明,在最佳培养基和培养工艺条件下获得的液体菌种其栽培黑皮鸡枞菌丝生长速度快,满袋时间为29 d,平均每袋产量约360.0 g,生物学转化率达78.0%.[结论]将液体菌种发酵罐培养技术与工厂化栽培技术有机结合,可实现黑皮鸡枞菌的规模化、标准化、现代化和工厂化生产.     

烟草青枯雷尔氏菌连续传代减毒效果研究

采用烟草青枯雷尔氏菌(TR)的菌悬液,连续传代培养,并在含有TTC的培养基上观察弱毒力菌落的百分率。测试0、10、20、30代菌株的生物量曲线观察变化情况。测试0、5、15、25、35代的菌株侵染K326(中等抗性)烟苗的情况并观察其与烟苗相互作用的结果。结果表明:青枯雷尔氏菌经传代35次后,在含TTC的培养基上弱毒力菌株检出率接近100%;生物量随着传代次数的增加而呈现下降的趋势;野生型菌株与传代后菌株对烟苗的萎蔫率观测时间呈现波动性。     

香蕉枯萎病致病菌筛选及致病菌浓度对香蕉枯萎病的影响

【目的】通过筛选和鉴定香蕉枯萎病的致病菌株,之后接种不同浓度的病原菌孢子悬液,研究香蕉植株的发病程度,以期为香蕉枯萎病的田间诊断提供科学的理论依据。【方法】采用室内筛选和盆栽试验相结合的方法。【结果】从香蕉枯萎病病株的假茎基部分离筛选纯化获得了一株致病的尖孢镰刀菌菌株。盆栽回接该菌株35d后,有90%香蕉植株发病,香蕉死亡率高达70%,经鉴定确认该菌株为香蕉枯萎病致病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC);本试验条件下,致病菌株的孢子悬液浓度为103CFU/g土时是香蕉枯萎病发病的临界浓度,当致病菌株的孢子悬液浓度不超过105CFU/g土时,香蕉枯萎病的发病指数随着病原菌孢子悬液浓度的加大而增加,当致病菌株的孢子悬液浓度超过105CFU/g土时,香蕉枯萎病的发病指数不再显著变化;香蕉根际土壤和土体土壤中的尖孢镰刀菌数量受致病菌株孢子悬液不同浓度的影响较大,接种病原菌孢子悬液不同浓度处理的根际土壤的尖孢镰刀菌数量是土体土壤尖孢镰刀菌数量的1.15—2.06倍,显著高于土体土壤尖孢镰刀菌数量。【结论】香蕉植株枯萎病是否发生与土壤本身的尖孢镰刀菌数量有关,发病程度高低决定于根际土壤中的尖孢镰刀菌数量,以上结果可为香蕉枯萎病的诊断提供科学的理论依据。     

固氮螺菌157对玉米、向日葵的促生长作用

利用固氮螺菌157(Azosprillum sp.157)菌悬液对玉米(品种哲单37号)、向日葵(品种科阳7号)进行浸种,再结合菌悬液浇灌,研究其对玉米、向日葵的促生长作用。试验结果表明,通过菌悬液处理的植株,预试验株高均有极显著提高(P0.01),正式试验均有显著提高(P0.05);预试验和正式试验的叶绿素含量,玉米分别提高6.36%和108.3%,向日葵分别提高5.64%和0.1%;预试验、正式试验的鲜质量和干质量,玉米分别增加15.78%、3.35%和28.95%、32.18%,向日葵分别增加13.67%、2.95%和13.36%、32.76%,其中又以地下部分增加幅度明显高于地上部分。说明Azosprillum sp.157对玉米、向日葵具有促生长作用,尤其是对植物根际的生长有明显促进作用。     

猴头菇液体菌种中杂菌的分离鉴定及变化规律

为掌握猴头菇液体制种过程中主要感染杂菌的种类及变化规律,以采取有效的措施降低染菌率,分析猴头菇活化菌种保存时间与种子液染菌率的关系,鉴定种子液中感染杂菌的种类和来源,评价6种抗生素对杂菌的抑制作用。结果表明,猴头菇活化菌种在温度为4℃条件下,于0～5 d时间段内接种于液体培养基时染菌率最低,均在20%左右,随着时间的延长,染菌率呈上升趋势。感染种子液的杂菌有5种(分别命名为WR1、WR2、WR3、WR4、WR5),其中4种为芽孢杆菌和1种为葡萄球菌,主要来源于进行试验场所的空气中,它们对硫酸庆大霉素和乳酸链球菌素较为敏感。综上所述,要解决猴头菇液体制种过程中染菌的问题,首先是严格规范试验操作,其次是减少活化菌种保存时间,最后是保持实验室空气清洁。必要时在种子培养基中可以加入一定量的乳酸链球菌素,以减少染菌率。     

根际芽孢杆菌对水稻根系的促生效应

为研究不同根际芽孢杆菌及其复合菌剂对水稻根系的促生效应,采用盆栽试验筛出促生效果好的促生菌剂,研究其对水稻根系生长的影响。结果表明,经解磷菌(Bacillus pumilus sp.,J)、溶磷菌(Bacillus megateriun sp.,R)、解钾菌(Bacillus subtilis sp.,K)菌悬液处理后,水稻幼苗胚根长分别比未添加菌液处理提高161.2%、157.9%、110.5%;在未灭菌的土壤中,解钾菌(K,LZP06)菌悬液处理对水稻根系生长有较好的促生效应,水稻幼苗根干质量比清水对照提高了65.3%;在灭菌土壤中,解钾菌+解磷菌[(K+J)s]、解钾菌+溶磷菌+解磷菌[(K+R+J)s]菌悬液处理对水稻有较好的促生效应,水稻幼苗根干质量比灭菌水对照分别显著提高57.8%、69.2%。综上,K(LZP06)菌悬液、复合菌悬液(K+J)s和(K+R+J)s对水稻促生效果较好,可作为微生物肥料生产的候选菌剂。     

食品用微生物发酵剂研究进展

发酵剂作为新型生物制品在食品加工中的应用越来越广泛。对微生物发酵剂菌种的分离、菌种增殖培养基、菌悬液的浓缩干燥方法及发酵剂在食品行业的应用等方面进行了全面阐述。     

白地霉和解淀粉芽孢杆菌对黄瓜枯萎病的防治效果

采用生物测定法,初步研究了解淀粉芽孢杆菌SYX-1和白地霉SYX-2对黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌的拮抗作用。结果表明：两种生防菌在菌悬液浓度为106～107cfu/ml时黄瓜种子胚根的伸长拮抗率分别为71.3%和81.2%,而混合菌株菌悬液的胚根伸长拮抗率高达85.3%;盆栽试验表明,SYX-1和SYX-2生防菌菌悬液对黄瓜枯萎病的防效分别为43.3%和46.4%,其混合菌株菌悬液的防效达52.8%,两种生防菌对植株生长均有明显的促进作用。     

1%鸡红细胞悬液4℃保存期限试验

试验旨在观察1%鸡红细胞悬液在4℃环境下最多可保存几天不影响试验结果的确定性。通过血凝(HA)试验,使用在4℃环境下保存1、 2、 3、 4、 5、 6、 7d的1%鸡红细胞悬液,分别测定同一批次鸡新城疫血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H7亚型血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H5亚型(Re-11株)血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H5亚型(Re-12株)血凝抑制试验抗原4种抗原的效价。结果表明,1%鸡红细胞悬液在4℃环境下最长可以保存5d,使用时不影响试验结果准确性。     

桦褐孔菌培养条件的研究

对桦褐孔菌菌丝生长的营养需求及发酵条件进行了初步研究,结果表明,固体培养采用PDA培养基为最佳配方;发酵试验确定最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为玉米浆,合适的碳氮源配比为葡萄糖2%,玉米浆1%。同时对发酵瓶接种方法和接种量进行对比试验,确定菌悬液接种法效果好,适宜接种量为2%。这些结果将为桦褐孔菌进一步研究提供科学依据。     

不同氮、腐殖酸肥施用量下芽孢杆菌ZJM-P5对红小豆幼苗根际土壤酶活性的影响

通过盆栽试验研究2种肥料(氮肥和腐殖酸肥)不同施用量与芽孢杆菌ZJM-P5菌悬液组合处理对红小豆幼苗根际土壤酶活性的影响,为红小豆经济合理施肥和微生物肥料菌种选育提供理论依据。结果发现,(1)同一施肥水平下,2种栽培环境下的土壤脲酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性均随菌悬液浓度的增大呈先升高后降低的趋势,其中脲酶活性均在10~7 CFU/mL浓度下达最大值,蔗糖酶活性除0、50 mg/kg施氮处理外其他施肥水平均在10~7 CFU/mL浓度下达最大值,而过氧化氢酶活性均在10~8 CFU/mL时最大。(2)相同菌悬液浓度下,与不施肥处理相比,施氮、腐殖酸肥处理的脲酶活性均随施肥量的增加呈升高趋势;施氮处理的蔗糖酶活性在0、10~6 CFU/mL浓度下随施氮量的增加而增大,在10~8 CFU/mL和10~9 CFU/mL下不同施氮处理的酶活性接近,10~7 CFU/mL浓度下在100 mg/kg施氮处理时酶活性显著高于其他处理,而过氧化氢酶活性随施氮量的增加先增大后减小,在100 mg/kg时酶活性最大;腐殖酸肥处理的蔗糖酶活性随施肥量的增加呈先升后降的趋势,在0.67 g/kg处理下酶活性最大,而过氧化氢酶活性随施肥量的增加逐渐增大。(3)相同菌悬液浓度下2种栽培环境间土壤酶活性结果比较得出,施用腐殖酸效果优于化学氮肥。研究结果表明,对于种植红小豆来说,芽孢杆菌ZJM-P5菌悬液浓度为10~7～10~8 CFU/mL为最佳菌浓度,纯氮量为100 mg/kg、腐殖酸量0.67 g/kg为最佳施肥量,合理浓度的菌悬液和肥料组合处理可以更大作用地发挥土壤酶的生物学活性。     

泰妙菌素生产菌种原生质体制备条件优化

[目的]探讨泰妙菌素生产菌种原生质体的最优制备方法。[方法]通过对原生质体制备条件进行优化,建立泰妙生产菌种原生质体制备体系。[结果]优化后制备条件:以培养3 d的菌丝体为材料,将其置于含质量浓度0.10%溶壁酶、0.60 mol/L MgSO_4的酶液中,25℃酶解3.0~3.5 h,将酶解液用G2砂芯漏斗过滤,滤液即为原生质体悬液。采用该方法,泰妙生产菌种原生质体制备率达1.5×10~6个/m L。[结论]试验结果为提高泰妙菌素生产菌种的产量提供了理论依据。     

季也蒙毕赤酵母对采后草莓病害控制及冷藏品质的影响

采用季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)作为拮抗菌处理采后草莓(Fragaria ananassa Duchesne.'Toyonoga'),测定不同浓度酵母菌悬液对采后草莓果实灰霉病害的抑制效果,以及菌悬液对草莓果实冷藏(2 ℃、RH 90%～95%)品质的影响.结果表明:季也蒙毕赤酵母能显著抑制草莓灰霉病病斑的扩展,且菌悬液浓度越高,抑制效果越好.菌悬液浓度为5×109 CFU·mL-1时,病斑直径比对照小34.0%.拮抗菌悬液处理对果实呼吸强度影响很小,但可以保持果实的光泽和可溶性固形物含量,并显著减小失重率,维持果实硬度,延长果实的贮藏寿命.季也蒙毕赤酵母菌悬液处理显著提高了草莓的冷藏品质.     

抗金银花白粉病菌贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株培养基及发酵条件优化

【目的】优化抗金银花白粉病菌贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株的发酵培养基及发酵条件,为其快速大量生产及进行大田生物防治提供理论依据。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株为材料,采用单因素试验和正交试验,分别优化其发酵培养基及发酵条件;结合分生孢子萌发和平板对峙试验,分析优化方案下HC-8菌株对白粉病菌分生孢子萌发的抑制效果及对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的拮抗活性。【结果】HC-8菌株最适基础培养基为酵母蛋白胨培养基（YSP）;最佳培养基配方为蛋白胨5.0 g/L、酵母膏25.0 g/L、麦芽糖10.0 g/L;最佳发酵条件为温度37℃、初始pH 6.0、转速180 r/min、接种量0.100%、装液量20 mL/300 mL、培养时间48 h。优化方案下,HC-8菌株对白粉病菌分生孢子萌发的抑制率为83.15%,显著高于优化前的74.65%（P<0.05,下同）;对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的抑菌率分别为60.66%、59.03%和65.32%,显著高于优化前的54.31%、55.24%和59.17%。【结论】优化后的方案可提高HC-8菌株的发酵产量,并增强对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的拮抗效果及对白粉病菌分生孢子萌发的抑制效果。建立的方案可用于快速、大批量发酵HC-8菌悬液。     

球形红细菌减少小麦和油菜幼苗中铜积累的效应

采用水培试验,研究了光合细菌球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides)菌悬液对铜胁迫下小麦(Triticum aestivum)和油菜(Brassicacampestris)幼苗生长及富集铜的效应。结果表明:过量Cu2+对小麦、油菜幼苗的生长有抑制作用;油菜幼苗比小麦幼苗更易积累环境中的Cu2+;施用球形红细菌菌液后,小麦、油菜生长受到Cu2+的抑制都有不同程度的缓解;其各部分铜的积累都有不同程度的降低,而且70 mg/L菌悬液比35 mg/L菌悬液缓解作用更为明显。     

菌种污染的解决办法

取待分离的“五四○六”抗生菌菌种管一支,加入5毫升左右的无菌水,用接种环把孢子刮下并研成孢子悬液,取一环悬液放在含有约0.5毫升的灭菌水的培养皿中,混匀后取出一环移人另一盛无菌水的培养皿中,依此法多稀释几个培养皿,然后在各皿中注入融化并冷却到50℃左右的马铃薯琼脂培养基约15毫升,摇匀、凝固后,翻转培养皿,使皿盖在下置于温箱中培养,待菌落长出后,根据菌种特征,观查有否杂菌污染。从单个菌落分布疏散,菌落之间不相连的培养皿上,选取菌落为圆形较大,呈粉白色略带橙红,色鲜且有多量露珠分泌的,活力较强的“五四○六”抗生菌菌落做为纯种,接入斜面培养基上。如果发现是噬菌体污染,在一般条件下,应把菌种斜面彻底灭菌消毁,房屋、用具彻底消毒灭菌。有条件的也可以进行筛选抗噬菌体的“五四○六”抗生菌菌株,其方法与前面介绍的相同。     

利用啤酒废水制备微生物絮凝剂研究

[目的]优化絮凝剂产生菌培养条件,以期获得价廉、高效的絮凝剂。[方法]从某污水处理厂的活性污泥中筛选得到了一株稳定高效的微生物絮凝剂产生菌127号菌种,采用啤酒废水作为廉价培养基,对絮凝剂产生菌127号菌种进行培养,优化其培养条件,考察外加碳源、氮源、培养基pH值、培养时间等因素对菌株絮凝效果的影响。[结果]将啤酒废水稀释10倍后,BOD5为7880 mg/L,无需另外添加碳源,添加尿素1.0 g/L,总氮约为540 mg/L,最佳培养基的初始pH值为5.0,最佳培养时间为48 h,絮凝效果最好,达96.8%。[结论]啤酒废水中含有丰富的营养物质,直接利用啤酒废水作为培养基絮凝剂产生菌127号菌种进行培养,其高岭土悬液絮凝率也达到88.2%,可以大大降低培养成本。