黄瓜花叶病毒山东分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

对侵染烟草的黄瓜花叶病毒(CMV)山东分离物(SD1)的外壳蛋白(CP)基因进行克隆和序列分析。根据已报道的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列合成两条寡聚核苷酸引物,用免疫捕捉PCR的方法对黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因进行了扩增。将所得的PCR产物通过T4DNA连接酶连接到pET-22b(+)载体上,并转化大肠杆菌DH5α。序列分析表明:CMV-SD1的CP基因全长657bp,编码218个氨基酸;其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ的分离物有极高的同源性,达92.7%~94.9%;与亚组Ⅱ的同源性仅为59.3%~59.5%;由此将CMV-SD1分离物归属于CMV亚组Ⅰ。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒山东南瓜分离物外壳蛋白基因序列分析

通过RT-PCR扩增得到了黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber Green Mottle Mosaic Virus,CGMMV）山东泰安南瓜分离物（CGMMV-TANG）的外壳蛋白基因,经过序列分析,该分离物外壳蛋白（CP）基因全长486个核苷酸,由161个氨基酸组成。对CP基因核苷酸序列进行同源性比较和构建系统进化树,并结合寄主来源及地域来源进行分析,结果表明该病毒的不同分离物在分组上与地域有一定的关系。     

松果菊特征特性及栽培技术

松果菊是菊科紫松果菊属植物,具有很强的药用价值和观赏特性。介绍了松果菊的特征特性及栽培技术,以期促进松果菊的推广种植。     

松果菊的栽培管理

松果菊又称紫锥菊、紫锥花、紫松果菊．形似菊花，色彩丰富有光泽，为菊科多年生草本植物。松果菊既可作为切花。也是良好的大型盆花植物，同时其花朵很大。直径可达15厘米，是制作干花的好材料。     

超声波对盐胁迫下紫松果菊种子萌发和幼苗生理特性的影响

以紫松果菊种子为材料,利用不同时长（0、5、25、45 min）的超声波预处理,通过滤纸床发芽和盆栽幼苗生长试验,研究不同含量盐胁迫（0、0.45%、0.90%NaCl）条件下种子的萌发和幼苗生理特性。结果表明,盐胁迫下,紫松果菊种子萌发明显受到抑制,盐含量越高胁迫抑制作用越强。种子通过超声波处理后发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、幼苗地上干质量和根干质量,以及幼苗叶片内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性整体上均得到明显提高。另外,在盐胁迫下,适量超声波处理能通过调节根系脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量来缓解胁迫作用。与0 min(UaS1)相比,低盐（0.45%NaCl）胁迫下,25 min超声波处理组脯氨酸、可溶性糖含量分别降低了27.23%、12.23%,可溶性蛋白含量提高了92.81%;与0 min(UaS2)相比,高盐（0.90%NaCl）胁迫下,25 min超声波处理组脯氨酸、可溶性糖含量分别降低了11.43%、12.75%,可溶性蛋白含量则提高了87.83%。综上,适量超声波处理对紫松果菊种子萌发和幼苗生长起着一定的促进作用,增强了...     

基于外壳蛋白核酸序列的中国黄瓜绿斑驳花叶病毒分离物起源分析

以直接从中国进口源性葫芦种子中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得种子上携带的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(CP)基因(LHP,Liaoning cucurbits seed protein ),将其克隆到pMD18-T载体上进行序列测定.结果表明该CP基因(GenBank登陆号:DQ997778)由483个核苷酸组成,编码161个氨基酸.对包括该分离物在内的19个CP基因核苷酸序列进行同源性比较和系统进化树构建,并结合寄主来源及地域来源进行LHP的起源分析,结果表明黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物的序列分群和进化关系与上述两个因素无明显关系.     

松果菊的栽培

松果菊为菊科多年生草本植物,又称紫松果菊、紫锥菊,原产于欧洲地区,是城乡、道路、工厂绿化的优良品种。松果菊在我国东北地区较适应.     

紫锥菊育苗及栽培技术

紫锥菊又名紫松果菊，为多年生草本，高60～150厘米。茎叶密生硬毛，叶卵状披针形至阔卵形，互生，叶缘具锯齿，头状花序单生或几朵聚生，径达15厘米，舌状花玫瑰红色，管状花深紫色，突出呈球形，花期夏秋。紫锥菊全株均可利用，具有很高的药用价值和观赏价值。     

甘蔗花叶病毒南城分离物外壳蛋白基因序列测定及分析

从江西南城甘蔗病株中获得1个甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)分离物,命名为SCMV-NCH。根据SCMV外壳蛋白(CP)基因N-端和C-端保守序列设计引物,对SCMV-NCH的CP基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,获得924个核苷酸(nt),推断编码308个氨基酸(aa)的近全长CP基因序列。与SCMV亚组SCMV、高粱花叶病毒(SrMV)、玉米矮花叶病毒(MDMV)、约翰逊草花叶病毒(JGMV)、玉米花叶病毒(ZeMV)、白草花叶病毒(PenMV)等6种病毒代表性株系外壳蛋白氨基酸序列同源性比较结果显示,SCMV-NCH与SCMV的同源性最高(86.2%),与其他5种病毒同源性相对较低(56.4%~72.2%)。与SCMV13个分离物外壳蛋白氨基酸序列进行同源性比较并构建关系树,结果显示SCMV-NCH与我国浙江2个分离物(Yuhang和Xiaosh)具有最近的亲缘发生关系。     

不同种源引种紫锥菊的过氧化物酶同工酶分析

采用过氧化物同工酶技术首次对我国8个种源引种紫锥菊的遗传多样性进行分析,并通过排序分析其相互之间的亲缘关系。结果表明,不同种源紫锥菊的POD同工酶谱在酶带数、迁移率及酶量等方面存在比较明显的差异,具有较丰富的遗传多样性。临沂引种紫锥菊与其他7个种源的不相似值最大,长沙引种紫锥菊和怀柔引种紫斑茎紫锥菊亲缘关系较近,怀柔引种绿茎紫锥菊和怀柔引种紫茎紫锥菊酶谱特征完全相同。POD同工酶谱可以作为不同种源紫锥菊遗传多样性鉴定的参考依据。     

紫锥菊多糖对 IEC-6细胞增殖的影响

[目的]研究紫锥菊多糖对大鼠小肠上皮细胞株 IEC-6细胞增殖的影响。[方法]以IEC-6细胞为研究对象,采用 MTT方法检测细胞增殖率,观察紫锥菊多糖对该细胞增殖的影响。[结果]紫锥菊不同剂量与不同的培养时间对 IEC-6细胞的生长均有促进作用,但是随着处理时间的延长,不同浓度的促增殖效果也不尽相同,表现为在浓度为50、200μg/ml 时增殖率随着处理时间的延长先增加后逐渐减弱,但在培养24 h后表现显著促增殖作用;浓度100μg/ml 在72 h、浓度500μg/ml 在48 h表现明显促增殖作用;经48 h处理的EPS其增殖率随浓度提高而增强。[结论]紫锥菊多糖具有促进 IEC-6细胞增殖的作用,通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

紫锥菊复方对猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗免疫效果的影响

[目的]探讨紫锥菊复方对仔猪的免疫功能的影响,以期为其今后临床应用提供理论依据。[方法]在仔猪日粮中添加不同剂量的紫锥菊复方,检测仔猪外周血淋巴细胞的转化率以及猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平,研究紫锥菊复方对猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗免疫效果的影响。[结果]一定剂量的紫锥菊复方能显著提高仔猪外周血淋巴细胞转化率(P0.05),极显著提高猪呼吸繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平(P0.01)。[结论]中药紫锥菊复方对仔猪的免疫功能具有一定的促进作用。     

黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%～ 99 4%和95 9%～ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%～ 79 0 %和81 2 %～ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用

根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性.     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响

[目的]探讨紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响.[方法]采用Trizon试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳及图像分析.[结果]当LPS刺激IEC-6细胞时,IL-6mRNA分泌增加.而EPS可以抑制这种作用,并且具有剂量依赖性,50 μg/ml EPS可以部分抑制LPS刺激IEC-6产生的IL-6水平,而100、500μg/mlEPS随着浓度的增加,其抑制IL-6的水平逐渐增加;将IEC-6用50、100、200、500 μg/ml EPS预处理24h,然后用LPS(10 μg/ml)刺激1、4h,采用RT-PCR方法分析得,LPS诱导IL-6mRNA表达被EPS抑制且具有时间依赖性.[结论]证实了LPS作用于小肠上皮细胞后,其分泌的细胞因子IL-6mRNA产生增多,而EPS可以抑制LPS刺激细胞分泌的IL-6mRNA的产生从而起到肠道粘膜的保护作用,并且这种抑制作用具有浓度及时间依赖性.     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化番茄的研究

通过根癌农杆菌介导，采用叶盘转化法，探讨了黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV－CP）基因导入番茄栽培品种‘红宝石’的适宜条件。结果表明：适宜的卡那霉素（Km)浓度，根癌农杆菌浓度，根癌农杆菌感染时间以及共培养时间分别为35mg/L,D600约0.5,10-15min和2－3d；将诱导形成的抗性愈伤组织转接到含有35mg/L Km的分化培养基和生根培养基中使其分化不定芽和生根，获得了抗Km的番茄再生植株。对再生植株进行再欠离体培养抗Km鉴定和PCR分子检测，补CMV-C基因已导入番茄再生植株的基因组中。     

7种番木瓜环斑病毒分离株外壳蛋白基因的克隆与序列比较

采用RT-PCR技术对我国海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的7个番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)进行克隆和鉴定分析。PRSV-CP编码区在864～873核苷酸之间,编码288～291氨基酸。对分离的7个PRSV-CP的核苷酸及氨基酸序列的比较结果表明大部分序列差异都处于N端,而各产区番木瓜PRSV-CP基因的3′端586～864bp区段,即278bpDNA片断的同源率最高,达到98.5%。这一同源序列的获得为利用植物基因工程培育广谱抗病性的番木瓜新品系奠定了基础。     

番茄褪绿病毒郑州分离物外壳蛋白基因的克隆与序列分析

近年来郑州番茄产区发现疑似番茄褪绿病毒(To CV)侵染引起的叶脉间褪绿症状,为了确定病原种类,采集典型症状的叶片,提取RNA,根据已知的To CV基因组序列设计特异性引物To CVCPF/To CVCPR,采用RT-PCR方法对样品进行检测,扩增得到约750 bp大小的目的条带,对获得的特异性片段回收、克隆、测序后进行序列同源性及系统进化分析。结果显示,郑州病样的病毒分离物外壳蛋白基因由774 bp组成,其核苷酸和氨基酸序列与To CV其他分离物同源性均在96%以上;进化分析表明,郑州分离物与河北、天津分离物亲缘关系最近。造成郑州番茄产区褪绿症状的病原为To CV。