密纹片姜茎尖培养脱毒快繁技术研究

CMV和TMV病毒的侵染导致密纹片姜产量降低,品质下降,通过茎尖脱毒培养和筛选获得脱毒苗并建立快繁体系,以提高产量,改善品质。茎尖接种培养基为MS+6-BA1.0~3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,丛生芽快繁培养基为MS+6-BA2.0~4.0 mg/L,生根培养基为1/2MS。经过一年多的研究和培养,获得大量脱毒苗并应用于生产。本方法也适用于黄姜类其它品种的脱毒和快速繁殖。     

“水城小黄姜”芽茎尖组培脱毒与快繁体系的建立

为建立“水城小黄姜”芽茎尖组培脱毒快繁体系，本试验以“水城小黄姜”芽茎尖为外植体，研究不同消毒时间、不同诱导分化培养基、不同增殖培养基及不同生根培养基对茎尖消毒、愈伤组织诱导、不定芽增殖、生根的影响，并对组培苗进行脱毒效果的检测。结果表明：“水城小黄姜”芽茎尖采用75%医用酒精消毒60 s+10%次氯酸钠(NaClO)消毒20 min处理效果最好，污染率7.7%，成活率达87.2%；不同培养基配比对茎尖诱导分化效果有差异，以MS+6-BA 3.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L效果最佳，愈伤诱导率达75.0%；最适增殖培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L，增殖系数大，长势旺盛、茎粗芽壮、叶绿，组培苗生长好，且可与生根协同接续；适宜生根的培养基为MS+NAA 0.10 mg/L，生根数多，平均根长适中。用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定组培苗中烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)，获得了“水城小黄姜”脱毒核心苗，且脱毒率达93.75%。因此，本研究认为通过“水城小黄姜”芽茎尖脱毒组培快繁体系的建立，可为“水城小黄姜”种苗的脱毒快繁及工厂化...     

副猪嗜血杆菌病的防治

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的一种世界范围内流行的重要疾病。由于我国的饲养管理条件较差,该病流行和危害日渐严重,应引起广大养殖户足够的重视。一、流行情况副猪嗜血杆菌只感染猪,主要存在于猪的上呼吸道（鼻腔、扁桃体和气管前段等）内,通过猪群间的接触和空气飞沫以及污染物而传播,带菌猪和慢性感染猪为本病的传染源。     

临床上怎样快速正确诊断副猪嗜血杆菌

副猪嗜血杆菌病,已经成为猪场的常见和多发病,不但可直接造成猪发病或死亡,而且常与猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒、流行性感冒、伪狂犬病等并发或继发,严重危害养猪业的发展。     

副猪嗜血杆菌高免血清的制备与应用

利用华中农业大学蔡旭旺博士分离鉴定的副猪嗜血杆菌作为标准菌株培养灭活后,两次免疫家兔后,耳静脉攻毒,心脏采血,琼扩试验检测抗体效价,抗体在1:8以上颈静脉放血,分离血清,用于琼扩试验检测本室从河南省发病猪场分离鉴定的副猪嗜血杆菌的血清型,所分离的33株菌中有12株4型,9株5型,6株13型,3株14型,2株12型,1株2型,未分出其它血清型。结果表明河南省副猪嗜血杆菌主要以4型、5型和13型为主要流行的血清型。     

甘薯茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究※?

甘薯茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究课题己进行3年,筛选出最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1～0.2mg/L＋3%蔗糖＋琼脂6.0g/L;最适宜培养温度为26～30℃;症状学诊断法、指示植物鉴定法进行病毒检测,平均脱毒率达83.7%。脱毒试管苗切段快速增殖,繁殖系数为5n,繁殖速度以几何级数增长,一定时间内可大量繁殖脱毒苗。脱毒苗移栽大田进行产量比较,平均增产率达37.8％。     

临床上怎样快速正确诊断副猪嗜血杆菌病

<正>副猪嗜血杆菌病,已经成为猪场的常见和多发病,不但可直接造成猪发病或死亡,而且常与猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒、流行性感冒、伪狂犬病等并发或继发,严     

罗汉果微茎尖组织培养与快速繁殖

剥取罗汉果微茎尖进行培养,探讨不同激素配比条件下罗汉果快速繁殖体系的建立.结果表明:罗汉果茎尖最佳诱导培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.05 mg/L+ GA30.1mg/L,增殖培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ IBA 0.1 mg/L+ GA30.1 mg/L,生根培养基为1/2 MS+ IBA 1.0 mg/L +0.1％活性炭,生根率为100％,移栽成活率可达93.33％.     

金线莲外植体的筛选及不定芽诱导的研究

以金线莲(Anoectochilus roxburghii)试管苗的叶、茎段和茎片(厚约2mm)为外植体,对金线莲组织培养快繁技术进行研究.结果表明,茎片是其快繁的最佳外植体,诱导其产生愈伤组织的适宜培养基是:MS(大量元素减半,微量元素加倍)+6-BA4.0mg/L+ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L+0.7%琼脂+3%蔗糖;适合不定芽分化的培养基是:MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.3 mg/L+0.7%Agar+3%蔗糖.     

应用灰色关联对不同品种烟叶内在质量的分析

灰色关联分析是灰色理论中的一种分析方法，这种方法的基本思想是根据所研究的因子间变化的相似程度来判断关联程度。应用关联分析的这一原理，通过各种内在质量对综合评分的关联系数(k)及关联度r，研究影响综合评分的主要内在质量的影响程度，分析了烟草内在质量与综合评分之间的关联度，结果表明烟草主要内在质量与综合评分之间的关联度依次为糖碱比>糖差>总糖>还原糖>氮碱比>K2O% >总氮>蛋白质>烟碱，为云南优质烤烟质量标准体系建立提供一种简捷、科学的理论分析方法。     

基于重组外膜蛋白P2的副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA方法的建立

旨在建立一种基于重组副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白(Omp) P2的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法.将重组表达的Omp P2纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组P2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化.确定ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/mL,被检血清1∶8...     

副猪嗜血杆菌中毒素蛋白基因hipA的生物信息学分析

为预测毒素蛋白HipA的二级结构和B细胞抗原表位,首先从GenBank中查找副猪嗜血杆菌毒素蛋白基因hipA的序列,应用生物信息学方法,对副猪嗜血杆菌毒素蛋白HipA的理化性质、二级结构和B细胞抗原表位进行预测。结果显示,HipA蛋白的理论等电点为7.23,前50个氨基酸为信号肽,二级结构的预测结果显示该酶主要以α螺旋、无规则卷曲和延伸链为主,只有少数的β转角;推测该蛋白有17个B细胞优势抗原表位区域。该研究为进一步研究分析副猪嗜血杆菌毒素蛋白HipA的功能奠定理论基础。     

副猪嗜血杆菌分离株的耐药性及耐药基因分析

为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示：对磺胺类耐药的分离株比例高达86．30％,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65．75％,60．27％,50．68％,50．68％,46．58％,对大环内酯类耐药仅为28．77％。 PCR分析显示：97．26％的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84．93％。其中喹诺酮类耐药基因Aac（6′）-1b的检出率为76．71％,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为65．75％,磺胺类耐药基因Sul1和Sul2的检出率为45．2％和10．96％,氯霉素类耐药基因Flor、CmLA、Cat1的检出率为15．07％,8．22％,58．9％,四环素类耐药基因 TetA和 TetB 的检出率为4．11％和49.32％,β-内酰胺类耐药基因Tem-11的检出率为35．62％,大环内酯类耐药基因ErmB的检出率为1．37％。耐药基因型和表型符合率为：磺胺类62．07％,β-内酰胺类74．29％,氯霉素类81．48％,四环素类75.00％,大环内酯类0,喹诺酮类75．68％,氨基糖苷类72．09％。因此,HPS在浙江规模化猪场对临床药物已产生了耐药性,通过耐药基因检测结果确定耐药菌株具有一定的参考价值。     

应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因

为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与噬菌体重组蛋白、糖基转移酶/荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC型硝酸盐/磺酸盐/碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性;2个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中的分布进行了检测,结果表明,7个片段存在于多数的有毒力菌株(血清4,5,12,14,15型)中,而在无毒力菌株(血清3,11型)中均未检测到。利用SSH技术成功构建了HPS有毒力菌株SW124和无毒力菌株H465的差异表达基因差减文库,筛选获得了7个差异基因片段,且上述片段在HPS不同血清型有毒力菌株中分布广泛。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白 P5的分段表达及免疫学性质分析

为获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的分段表达产物,并对各片段的免疫学性质进行鉴定。采用生物信息学软件分析Omp P5全长基因,设计3对分段引物,PCR分别从HPS汕头分离株（H0801）Omp P5中扩增出P5F1、P5F2和P5F3基因片段,构建于pET-32a（＋）原核表达载体上,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析蛋白表达情况。将蛋白纯化后,利用ELISA及Western Blot分别鉴定其免疫原性及抗原性。结果表明,扩增得到的Omp P5的3个基因片段与预期大小相符合,基因测序结果与GenBank 公布的序列一致,经SDS-PAGE分析,3个蛋白表达相对分子质量大小都与预期相符。 ELISA和Western Blot分析显示,表达的3个蛋白表现出良好的抗原性和免疫原性。 HPS Omp P5的分段表达为进一步研究HPS保护性表位及疫苗鉴定奠定了新的基础。     

鸭病毒性肝炎间接血凝诊断抗原的制备

【研究目的】建立一种便于检测鸭病毒性肝炎抗体的方法。【研究方法】将纯化的鸭病毒性肝炎I型病毒(DHV-I)致敏双醛化红细胞,制备检测DHV抗体的间接血凝诊断抗原。【研究结果】使用该抗原对9种常见的禽传染病阳性血清、15只随机抽样的非免疫鸭血清进行检测,抗体均为阴性;检测被鸭病毒性肝炎I型病毒阻断后的阳性血清,抗体为阴性;用不同批次的诊断抗原检测同一血清样品结果显示一致;敏感性是琼脂扩散试验的32～64倍;对15只随机抽样的免疫鸭进行检测,阳性率达93%。【结论】该方法敏感性较高、特异性强、重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及鸭病毒性肝炎的流行病学调查。     

6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S rRNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。     

猪源支气管败血波氏杆菌间接血凝诊断方法的建立

用引起猪传染性萎缩性鼻炎的支气管败血波氏杆菌全菌抗原致敏经戊二醛处理的绵羊红细胞,制备成间接血凝试验抗原,通过IHA来检测由支气管败血杆菌引起的猪传染性萎缩性鼻炎血清抗体。致敏绵羊红细胞的最佳抗原浓度为100μg/mL,血清效价≥1∶8即为阳性,效价≤1∶4者判为阴性,该方法具有很好的敏感性、特异性和可重复性,而且操作简单,适合大范围推广应用。     

冬小麦子粒品质性状多目标间接选择数学模型初探

利用56个冬小麦品种(系),采用双重逐步回归的方法,建立了冬小麦子粒品质性状多目标间接选择数学模型.结果表明.适当增加株高和单株穗数,可同时提高单株子粒蛋白质产量与含量及干面筋含量;而增加单株子粒产量可以提高单株子粒蛋白质产量,但降低子粒蛋白质含量和干面筋含量;千粒重每增加1.0g,沉淀值减少0.07791ml;湿面筋含量随株高增加而增高,随结实小穗数增加而降低.     

大豆蛋白质间接选择方法的初步研究

以五个蛋白质含量不同的大豆品种为试材，对其种子发育期间的蛋白质含量、水分含量和干鲜重之比第8个性状指标之间的相互关系进行研究，期望探索出与蛋白质含量有协同变化规律的指标。结果表明，各品种种子的蛋白质含量（%鲜基）与干鲜重之比呈极显著的负相关，而与含水量则呈极显著的正相关，二个相关系数的绝对值几乎相等，