淮山RAPD-PCR反应体系的建立

摘要：采用改良CTAB法提取淮山的叶片总DNA。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD-PCR扩增结果的影响,建立了适合于淮山RAPD-PCR反应体系,即20μL体系中包括：模板DNA为50 ng、Taq酶为0.2U、Mg2+浓度为3.0mmol/L、引物浓度为0.2μmol/L、dNTPs浓度为0.2mmol/L。     

梨树组织中的苹果锈果类病毒原位RT-PCR检测

利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒（ASSVd）的特异片段,经由回收、克隆和测序,有10条序列已在GenBank（EU031467-EU031476）登录,利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cDNA探针,建立了斑点杂交检测技术。在此基础上以已知带有苹果锈果类病毒的库尔勒香梨和无类病毒梨树叶片为材料,利用DIG标记,研究了梨树类病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括SuperScriptⅡ浓度、4种碱基混合物（dNTPs）、RNA酶抑制剂（RNasin）及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、LA Taq DNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。研究结果表明：RNasin的用量大于0.2U/μL时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达0.4mmol/L时才能生成一定量的cDNA;SuperScriptⅡ浓度在0.5～1.3U/μL均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随SuperScriptⅡ浓度提高而增多;引物浓度达到0.9μmol/L以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ASSVd的cDNA适合退火温度为62℃。循环30～35次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8～1.2μmol/L时显色较好;LA Taq酶浓度为0.004U/μL以上,均显示较深的蓝色;Mg^2＋浓度为1.5mmol/L就可满足原位PCR所需。     

萝卜基因组DNA RAPD与ISSR-PCR反应体系优化

对影响PCR反应的主要因子———模板DNA、引物、dNTPs和Mg2 浓度进行优化,建立起适合于萝卜基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系。RAPD反应体系(18μl)为随机引物0.4~0.6μmol/L,dNTPs0.15~0.2mmol/L,Mg2 2.0mmol/L,模板DNA10~40ng,TaqDNA聚合酶0.8U;ISSR反应体系(16μl)为引物0.5μmol/L,dNTPs0.16mmol/L,Mg2 2.5mmol/L,模板DNA10~40ng,TaqDNA聚合酶0.64U。对扩增程序中复性温度进行了梯度PCR试验,表明35~42℃(37℃)与52.4~58.3℃(55℃)分别适于萝卜基因组DNA的RAPD-PCR和ISSR-PCR反应;应用优化的RAPD和IS-SR反应体系对17个萝卜品种进行了鉴定分析。研究结果将为萝卜分子育种、品种鉴定与种子纯度检测提供重要的技术基础。     

水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化

本文以水稻单粒干种子为材料进行DNA提取方法和SSR-PCR反应体系的优化研究,结果表明:用CTAB法提取的水稻干种子DNA较为完整,降解量少,可获得理想的扩增效果。在试验设计范围内,确定的最佳反应体系为20μL,其中含模板DNA 45ng,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,Taq酶为1.6 U。     

西番莲科龙珠果ISSR-PCR体系的建立和优化

为了获得适于龙珠果ISSR-PCR的反应体系,本研究以龙珠果叶片为试验材料,提取基因组DNA,采用L16(45)正交设计试验,对影响龙珠果ISSR-PCR扩增结果的Mg²⁺浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和模板DNA量进行优化,并筛选了最适退火温度。试验结果分析表明,各因素影响显著性为dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶用量>Mg²⁺浓度>模板DNA量>引物浓度。在20μL反应体系中,dNTPs浓度0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、Mg²⁺浓度2.0 mmol/L、模板DNA 25 ng、引物浓度0.4μmol/L为最佳用量。实验从100条UBC引物中筛选得到22条多态性较好的引物。本研究为龙珠果ISSR标记开发、种质资源鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。     

仁用杏ISSR分析体系的正交优化

本研究以仁用杏丰仁为试材,采用经改良的CTAB法提取实验材料幼叶基因组DNA.利用正交设计法,从Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq/DNA聚合酶及模板DNA用最5种因素4水平出发,构建和优化仁用杏ISSR-PCR反应体系,并采用直观分析和方差分析相结合的方法分析正交实验结果,最终建立了仁用杏ISSR-PCR最佳反应体系总体积20μL:1.5 U Taw DNA聚合酶、2.0 mmol/L MgCl_2、0.15 mmol/L dNTPs、0.35μmol/L引物、30～60 ng模板DNA.在优化体系的基础上筛选出 13个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定每个引物的最适退火温度.经对最佳反应体系和程序进行了验证,结果显示该体系具有扩增稳定性.     

元宝枫SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

本研究采用改良的CTAB法提取元宝枫基因组DNA,并使用L_(16)(4~5)正交试验设计。通过5因素4水平实验,筛选Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物浓度、Mg~(2+)、模板DNA浓度及其用量,建立并优化元宝枫(Acer truncatum)的最佳SSR-PCR反应体系,即总体积20μL,Taq DNA聚合酶、dNTPs、引物、Mg~(2+)和模板DNA浓度分别为1 U/20μL、0.2 mmol/L、0.6 mmol/L、1.25 mmol/L和75 ng/20μL。扩增实验结果表明,该反应体系稳定性较好,可重复性高,具有较好的分辨率。可从59对引物中筛选出14对适用于元宝枫并具有较明显的多态性的SSR引物,为进一步研究元宝枫的分子标记辅助育种、SSR遗传多样性分析和遗传图谱构建提供了良好的基础。     

亚洲百合DNA的提取及RAPD-PCR反应体系的优化

为了促进亚洲百合分子水平的研究,以亚洲百合幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法提取亚洲百合基因组DNA,得到的DNA质量较高,适合于RAPD -PCR分析。通过单因素优化得到在25μl反应体系中,亚洲百合RAPD 分析的最佳反应体系：160μmol/ L dNTPs,0.3μmol/L随机引物,Taq DNA聚合酶1.5U,Mg2＋浓度2.0mmol/L。     

药用植物刺山柑ISSR-PCR遗传体系的建立和优化

对药用植物刺山柑遗传多样性研究分析,建立了刺山柑ISSR-PCR稳定的反应体系,利用植物基因组试剂盒提取刺山柑药材DNA;根据此引物采用正交实验设计考察影响PCR扩增的4个主要因素,筛选出最佳反应条件:25μL ISSR-PCR的最佳浓度为10×buffer 2.5μL、引物0.2μmol/L、模板40 ng/μL、dNTPs 0.4 mmol/L、Taq/DNA聚合酶0.5 U,利用梯度筛选获得U 808引物最佳退火温度。为利用这一分子标记对药用植物刺山柑进行遗传多样性分析奠定了基础。     

橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

为探索适合橡胶草基因组DNA的提取方法和RAPD反应体系。采用改良CTAB法提取橡胶草叶片总DNA,得到的DNA能满足RAPD分析需要。通过单因子实验法分析DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶以及Mg2+浓度对RAPD扩增结果的影响,建立了适合于橡胶草RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μL体系中包括：模板DNA30 ng、Taq DNA聚合酶1.75 U、dNTPs浓度0.25 mmol/L、Mg2+浓度2.0 mmol/L、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL。RAPD扩增反应程序为：94℃预变性5 min,94℃ 30 s,37℃ 30 s,72℃ 70 s,45个循环,最后72℃延伸10 min。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。     

食品微生物测试片标准法和国标法比较研究

分析了食品微生物检测快速测试片法与国标法的差异性。制备适宜的标准菌悬液,使用快速测试片标准法和国标法分别检测微生物,比较分析2种方法的差异性。所得试验数据通过统计学比较,t值均小于t_(0.05(2)),认为测试片标准法和国标法无显著性差异。     

一种高质量的数字高程模型（DEM）建立方法 ——ANUDEM法

建立高质量的数字高程模型（DEM）是正确计算坡度、坡向、提取流域地形特征、进行水文分析的前提，因而在研究土壤侵蚀、植被建设和土地利用规划与评价中都具有重要意义。ANUDEM采用迭代有限微分内插技术和地形强化算法，自动去除伪下陷点和生成输入数据错误文件，便于查错改善DEM质量，并减少了去除伪下陷点的编辑或DEM的后处理过程。本文以黄土高原丘陵沟壑区典型小流域为例，利用大比例尺（1:10000）数字化地形图，利用ANUDEM建立DEM，从DEM光照模拟图、回放等高线、提取水系、坡度等方面对建立的DEM的质量进行了评价。研究表明，ANUDEM建立的DEM表面光滑；回放等高线与原等高线符合度高，能更准确地表现地形起伏；由其提取的坡度准确；水系连续完整与地形图上河流一致，适宜水文分析，是一种建立高质量DEM的优良方法。     

黄瓜子叶法筛选蔬菜灰霉病杀菌剂的研究

研究了以“黄瓜子叶法”为特征的蔬菜灰霉病杀菌剂的筛选模式.采用本方法标准药剂速克灵、扑海因获得很好的重复性;接种最适宜的分生孢子浓度为1×10~5/ml;菌丝菌龄对实验结果有明显的影响;采用浸渍法或喷雾法进行药剂处理对实验结果影响不大,但前者操作似更简单.供试乳化剂、溶剂中,除农乳700号及二甲基甲酰胺之外,对蔬菜灰霉病菌均无明显的影响.     

一种快速测定烟草种子活力的方法——紫外吸收分光光度法

为探索准确、迅速地测定烟草种子活力的方法,以不同年份的烟草种子为研究对象,在测定种子发芽率的同时,用紫外吸收分光光度法测定了不同浸泡时间的种子浸出液的吸光值,并对两者之间的关系进行了比较研究.结果表明,在25℃条件下,将烟草种子浸泡4 h时,所测定出的种子浸出液的吸光值,与种子的发芽率有极高的相关性,能够较为准确地反映烟草种子的活力高低.本方法为烟草种子活力的快速测定提供了参考.     

Color Image Compression Method Based on Incomplete Scanning Method

In view of color image characteristic, the paper improves the zero algorithm in the application of concrete algorithm, draws a new algorithm-incomplete scanning method, which is applied to color image compression. The authorsconvert color image from the RGB space into luminance-chrominance YUV space, then compress the converted image to encode/decode. Theoretical analysis and simulation experiment indicate that the compression ratio and encoding/decoding speed are increased, at the sase time the quality of restored image is guaranteed.     

石房蛤毒素酶联免疫吸附测定方法的研究

建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法(idc-ELISA)测定石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)。采用碳化二亚胺法,将半抗原STX分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联,得到免疫抗原STX-OVA和包被抗原STX-BSA。用STX-OVA免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。确定的最佳包被抗原质量浓度为2μg/mL,多抗的工作浓度为1∶800,羊抗鼠二抗工作浓度为1∶1 000。回归方程Y=0.136 6X-0.015 1,R2=0.990 1。该方法的灵敏度达到5.8μg/mL,检出范围在0.2～926μg/mL。     

Control Method of Single-phase APF

As one-cycle controlled single-phase active power filter(APF) only can compensate harmonics and reactive currents simultaneously,this paper detects circuit based on instantaneous reactive theory and current traces control circuit based on one-cycle control with harmonic current.The control equations and circuit are set up.The results of simulation verify that this scheme is effective and APFs can compensate harmonic and reactive current according to requirement with the distorted source voltages.     

种子贮藏新技术

1 种子贮藏的环境条件 1.1贮藏库地址选择标准 要求选择地势高，地下水位低、排水良好，通风透气好，气候干燥、冬暖夏晾，严防库址积水，地面渗水的场所；在结构上应具有保温绝热、防潮、防鼠的墙壁和天花板，天窗和立窗都要安装铁丝纱网，内壁要平滑洁白，便于观察虫迹和害虫的情况，地面、墙及天棚等都要利……     

青梅贮存方法

青梅是食药同源之果,原产于我国.青梅果实具有较高的营养价值与药用功能,属生理性碱性天然保健食品.随着人们生活水平的不断提高,青梅制品在我国、日本、朝鲜及东南亚地区都有稳定的消费群体,具有较大的市场销售潜力.