开发荒地种植花生应用高效花生根瘤菌剂的试验效果

１９９１－１９９６年，在宜宾市新开垦荒地种植花生，推广应用快生型８５－７花生根瘤菌剂１２０５．７公顷。平均增产２２．８５％；增收茶生６５３．０８号，经济效益１８３．８６万元，培肥土壤，促进了油樟、梨树幼林的生长发育。比较了四个基因工程菌株ＨＮ１１、ＨＮ１２、ＨＮ１４、ＨＮ１５的增产效果。试验表明：ＨＮ１１、ＮＨ１４基因工程菌株对花生产量比原菌株８５－７、１４７－３有所提高。     

快,慢型大豆根瘤菌质粒接合重组的初步研究

通过含有Ｒ６８．４５质粒的大肠杆菌将快生型大豆根瘤ＡＣＣＣ１５０６７菌株的大质粒转到慢生型大豆根瘤菌６１Ａ７６菌株中去，共接合转移出２２个接合子菌株，对其中的１２个菌株进行了与８３－１１９大豆的共生接种试验，其效果是部分接合子菌株超过供体菌和受体菌对接合子ＢＦ２－Ａ１菌株进行了质粒检测。田间应用亦有增产趋势。     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠杆菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的总ＤＮＡ，得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱，称ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱，将所得图谱进行性状编码后，用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析，得出这８个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致，说明ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。     

利用付里叶转换──红外光谱（FT－IR）鉴别大豆根瘤菌初探

利用付里叶转换──红外分光光度计制作了标准大豆根瘤菌菌株２２－１０，２７－５０，ＵＳ－ＤＡ１１０及１５００６的ＦＴ－ＩＲ图谱。结果表明，所得图谱分辨率高、重复性好，并且不同菌株的图谱在指纹区（波数８００～１０００）有明显差别，这说明各菌株的ＦＴ－ＩＲ图谱是高度特异的，这种特异性可用于菌株鉴别．     

安徽省北部大豆根瘤菌的分离,血清学分析及田间自然结瘤调查

对安徽省北部分离的２７株快生大豆根瘤菌和３８株慢生大豆根瘤菌的血清学分析及田间自然结瘤的血清学调查表明：００５血清型系安徽北部夏大豆产区占据优势的血清型，１８组样品和再现频率为１００％；３６株分离物中２６株属００５血清型，占总分离物的７２．５％。２０４８血清型出现频率为８３．３％；在３组样品中占瘤率达４１－５１。６％。２１７血清型占瘤率普遍低于１６％。讨论了自然结瘤调查中采样地点，大豆品种和土壤类     

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗传多？…

根据Ｅ．ｃｏｌｉ基因组ｒＤＮＡ保守序列设计的两对引物,分别用于扩增３０株来源于我国不同地区的快生型大豆根瘤菌菌株。扩增产物经几种较少识别序列的内切酶消化后,得出特征的限制性内切酶酶切图谱。该图谱可用于供试菌株种水平的鉴定及菌株ｒＤＮＡ分子的遗传多样性研究。选用来源于Ｅ．ｃｏｌｉ基因组１６ＳｒＤＮＡ保守序列的一对引物将所有供试菌株都扩增出一条１．５ｋｂ的带,经四种内切酶消化后发现：新疆地区来源的菌株     

江西省土壤硫素状况和硫肥肥效

据全省不同土壤类型和肥力水平的７１０个土样测试结果，平均有效硫含量为２０．７ｍｇ／ｋｇ，低于１０ｍｇ／ｋｇ和１０－１６ｍｇ／ｋｇ的土样分别占１９％和２２．５％。从地区分布看，以赣中，赣南缺硫面积较大。据３７５例水稻施硫试验平均增产１３．３５％，每公斤硫增产稻谷１６－２４ｋｇ，６例油菜施硫平均增产１２．４％，花生施硫肥也有明显效果。一般山区冷浸田、返浆田、红壤以及花岗岩、砂岩发育的稻田含硫量低，施肥     

不同茬口土壤和大豆品种对根瘤菌遗传多样性的影响

土壤和大豆品种是影响根瘤菌遗传多样性的主要因素。本研究通过土壤捕捉试验,分别从冬小麦茬口和玉米茬口土壤中种植的4个大豆品种根瘤中分离得到149株快生根瘤菌和49株慢生根瘤菌。对这些菌株进行16S rDNA限制性酶切分析(ARDRA)、16S-23S基因间隔(IGS)以及共生基因(nod C)的限制性片段长度多态性分析(RFLP),考察土壤茬口和大豆品种对大豆根瘤菌遗传多样性的影响。ARDRA分析结果表明,快生根瘤菌全部属于中华根瘤菌属(Sinorhizobium),慢生根瘤菌全部属于慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)。IGS酶切分型将所有菌株分为3种图谱类型,其中型Ⅰ与辽宁慢生根瘤菌(B.liaoningense)的模式菌株酶切图谱类型完全一致,型Ⅱ和型Ⅲ与费氏中华根瘤菌(S.fredii)的模式菌株酶切图谱类型完全一致。综合以上结果,本研究分离到的菌株分属于以上2个种。在两种茬口土壤中快生根瘤菌费氏中华根瘤菌均为优势种群,在冬小麦茬口土壤中的比例(平均95.18%)远高于玉米茬口土壤(平均53.78%)。‘冀豆12’大豆品种的费氏中华根瘤菌在两种茬口土壤中所占比重均高于其他品种。对菌株的IGS基因型与宿主大豆品种的相关性分析表明,大豆品种与根瘤菌IGS基因型之间具有一定相关性。nod C-RFLP酶切分型结果表明,土壤茬口和大豆品种对菌株的共生基因无明显影响。本研究表明根瘤菌、土壤茬口和大豆品种间存在一定的相关性。土壤茬口对根瘤菌的种群结构影响较大,大豆品种对根瘤菌的基因型具有一定的选择性。     

氮锌配施及锌肥不同用量对夏大豆产量品质的影响

在河南省大豆产区进行了氮与锌配合施用及锌肥不同有得的田间试验。结果表明，施用锌肥促进大豆结瘤固氮并提高固氮酶活性，氮肥肥效较高，增产７．２％－１１．１％，同时使籽粒氨基酸含量得到相应提高；单施氮增产４．３％－１３．６％，施氮配合施锌后增产达７．１％－１６．２％；最佳施氮量为４．８ｋｇ／亩，取得的利润比不施锌时增加２．３元／亩；锌肥底施并不是越多越好，以每亩底施１ｋｇ硫酸锌，产量较高，利润最佳。     

平菇品种比较选育试验

以生产上常用高产菌株“杂交１７”和“金凤２－１”为对照，与“川平２号”、“川平３号”、“川平４号”和“川平５号”共４个从野生平菇组织分离菌株均进行品比试验，结果表明，４个野生菌株比“杂交１７”增产，共中增产１０％以上的菌株为“川平２号”和“川平３号”。“川平２号”比“金凤２－１”增产７．９％，“川平３号”与“金凤２－１”的产量相近。在商品性状上，“川平２号”、“川平３号”、“川平４号”的商品性状与     

一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析

从发病鸽的体内分离到一株新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）PB9601，经病毒蚀斑克隆纯化后动物回归试验可产生典型的NDV病变，其MDT、ICPI、IVPI分别为50.5、1.65和2.36，表明为NDV强毒。对其F和HN蛋白分别进行基因克隆测序，发现F蛋白多肽裂解位点的序列为111 KRQKRF 117，符合鸽源NDV强毒氨基酸基序。F基因分型及同源性比较显示：PB9601与YN-03、TW-98等鸽源毒株属于VI型，其F基因与基因Ⅱ型疫苗株LaSota氨基酸同源性为88.6%，与基因Ⅰ型疫苗株V4的氨基酸同源性为91.0%，与基因Ⅸ型传统强毒F48E9等的氨基酸同源性为90.6%；与国内鸽分离株GX-05、YN-03、TW-98的氨基酸同源性分别为92.1%、95.5、98.6%、与国外鸽分离株Capital3-97、Tigre6-99、1166-00、IT-227-82、2736-00的同源性分别为93.3%、91.9%、94.6%、95.1%、93.6%。HN基因氨基酸同源比较显示：PB9601与LaSota、F48E9、V4等的氨基酸同源性分别为87.2%、89.2%、87.6%；与国外鸽分离株1166-00、IT-227-82、2736-00的同源性为93.7%、95.5%、92.3%。由此看出PB9601与国内外分离株、LaSota、F48E9、V4等相比，具有明显的地域性和种属性。     

阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因（waaL,waaG）缺失突变株的构建及分析

脂多糖（LPS）在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产生的LPS的差异。根据同源重组技术原理,利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101△waaL和pKNG101△waaG,转化E.coli SM10菌株,并与B29菌株进行双亲杂交,再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL和waaG基因缺失突变株;利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA测序结果均证实突变株B29△waaL和B29△waaG构建成功;最后,对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29菌株的脂多糖为光滑型结构,突变株的LPS结构明显缺失O抗原,B29△waaG突变株同时还缺失了外部核心部分;用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示,突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降;B29△waaL突变株的生长速率与野生型相当,而B29△waaG突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株,为下一步利用突变株研究B29菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。     

不同梯度氮沉降对亚热带甜槠林凋落物及养分的影响

[目的]分析不同梯度氮沉降作用下亚热带常绿阔叶甜槠(Castanopsis eyrei)林凋落物量及养分变化规律,从而为亚热带地区氮沉降研究提供数据参考与理论依据。[方法]对安徽省仙寓山地区设置不同梯度施氮对照试验,长期实地监测甜槠林凋落物量及其养分的响应状况。[结果]凋落物量大小顺序为:高氮加磷(HN+P)低氮(LN)高氮(HN)对照CK,不同处理间的差异未达到显著水平;但是落叶量LN与CK之间差异显著(p=0.023)。各处理凋落物量的月变化模式均呈双峰型,分别在4和11月达到峰值;凋落物中各组分所占比例从大到小均为:叶果枝碎屑花皮;施肥处理不同程度上改变了落果量的比重:HN+P(27%)HN(25%)CK=LN(23%)。甜槠林C,N,P,K,Ca,Mg这6种大量元素的养分年归还量共计:HN+P 4.62t/(hm2·a)CK 4.44t/(hm2·a)HN 4.17t/(hm2·a)LN 3.96t/(hm2·a);不同处理各养分(K除外)归还量均表现为上述关系,且HN+P与CK之间的N,P的养分归还量差异显著(p=0.047;0.023)。对于各组分而言,落叶的养分归还量占年养分归还量的52%~58%。[结论]模拟不同梯度的氮沉降处理在一定程度上改变了甜槠林凋落物总量的大小及其组成比例,且影响到其他养分的吸收及归还量。     

持续减量施氮对冬小麦土壤硝态氮含量和氮肥利用效率的影响

连续两个生长季（2008/2009和2009/2010）对小麦（济麦22）进行不施氮T1、减量施氮T2（180kg·hm-2纯氮）和按农民习惯施氮T3（315kg·hm-2纯氮）3种施肥处理,2008/2009年度各处理分别为T11、T21、T31,2009/2010年度为T12、T22、T32。观测小麦旗叶光合速率、产量、土壤硝态氮含量,分析连续处理两个生长季后各处理氮肥利用率RE N、氮肥农学效率AE N、氮肥生理效率PE N和氮肥偏生产力PFP N的差异。结果表明,（1）第一生长季T21与T31处理相比,第二生长季T22与T32处理相比,小麦旗叶光合能力和产量均未显著下降,但均显著高于不施氮处理（P〈0.05）。（2）持续2a减量施氮处理（T22）后,小麦成熟期0-200cm土层硝态氮含量分别比T32和T21显著下降32.2%和26.7%（P〈0.05）。（3）持续2a减量施氮处理T22的RE N、AE N、PE N和PFP N均显著高于T32,与第1年减量施氮处理T21相比,T22的RE N、AE N和PE N显著升高（P〈0.05）,但PFP N变化不显著。研究表明连续减氮处理未显著降低小麦开花后旗叶的光合能力和产量,但降低了地下水污染的风险,同时提高了各项氮肥利用效率指标,因而180kg·hm-2纯氮的施氮量可作为小麦持续高产条件下的推荐施肥量。研究结果可为氮肥高效利用和冬小麦栽培的可持续发展提供理论基础。     

Chronic Nitrogen Fertilization Modulates Competitive Interactions Among Microbial Ammonia Oxidizers in a Loess Soil

Nitrogen(N) application may lead to niche segregation of soil ammonia-oxidizing archaea(AOA) and bacteria(AOB), thereby reducing the competitive interactions between AOA and AOB due to higher ammonium substrate availability. However, the adaptive mechanisms of AOA and AOB under N enrichment remain poorly understood. Stable isotope probing(SIP) microcosm incubation was employed to reveal community changes of active AOA and AOB in a loess soil from a field experiment growing potatoes that received no N(control, CK), low N(LN, 75 kg N ha~(-1)), and high N(HN, 375 kg N ha~(-1)). The results showed that the soil potential nitrification rate(PNR) was measured by culturing of the soil samples from the field experiment. Soil PNR was significantly increased in HN by87.5% and 67.5% compared with CK and LN, respectively. Compared with CK, the~(13)C-amoA genes of soil AOA and AOB in HN had 2.58 × 10~4 and 1.55 × 10~6 copies, representing 1.6-and 16.2-fold increase respectively. It was indicated that AOB dominated soil ammonia oxidation. A phylogenetic analysis of the~(13)C-amoA gene showed that N application significantly increased the proportion of54 d9-like AOA up to 90% in HN, while the Nitrososphaera gargensis-like and Nitrososphaera viennensis-like AOA were inhibited and completely disappeared. Nitrogen application also resulted in the community shift of active AOB-dominant group from Nitrosospira briensis-like to Nitrosospira sp. TCH711-like. Our study provides compelling evidence for the emergence and maintenance of active nitrifying communities under the intensified N input to an agricultural ecosystem.     

盐碱地小麦根际联合固氮菌数量分布研究

结合气相色谱仪和乙炔还原(ARA),采用最可能计数法(MPN)和荧光抗体(FA)染色法对盐碱地小麦根际联合固氮菌及优良固氮菌株Pseudomonassp.ChW1和Zoogloeasp.ChW6数量分布进行了测定。结果表明:小麦根际各部位均存在联合固氮菌类群,但数量相对较小、差异较大(102～106个g-1干土或根),分布趋势呈RP>RS>NRS>HP;菌株Pseudomonassp.ChW1是一种相对广谱的联合固氮菌株,在小麦根际不同部位均有分布,数量除在根系表面(RP)较多(105个g-1干根)外,其它部位较少(102～103个g-1干土或根);Zoogloeasp.ChW6菌株是一种分布谱相对较窄的联合固氮菌株,只分布于根表土壤(RS)和根系表面(RP),数量102～104个g-1干土或根。自然状况下,小麦根际固氮菌数量较少,有必要通过使用联合固氮菌接种剂提高小麦根际固氮菌种群数量,增强种群竞争力,增加根际微生物固氮总量。     

鹅细小病毒vp1基因片段的原核表达及抗血清的制备

利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Goose parvovirus , GPV)HG5/82株vp1基因5'端长662 bp的基因片段，将其克隆到pMD18-T Simple载体后，转化入大肠杆菌(Escherichia coli) DH5α细胞。筛选阳性质粒，并通过BamHⅠ和Hind Ⅲ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb，所得的阳性重组质粒经序列测定，证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置。将转入外源基因的工程菌经0.6 mmol/L IPTG诱导，SDS-PAGE电泳表明， 外源基因表达，融合蛋白分子量约为32 kD。通过薄层扫描分析显示，融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%。经诱导后的工程菌用6 mol/L盐酸胍裂解，再经超声处理后离心，用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。纯化所得的融合蛋白免疫白兔，制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清。Western blot结果表明，抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性。     

印度芥菜BjJ10-2基因原核表达载体构建及抗盐功能的鉴定

利用RT-PCR技术克隆了印度芥菜核糖体相关膜蛋白RAMP4家族成员BjJ10-2基因的开放读码框,成功构建了pET32a-BjJ10-2原核表达栽体,通过热激法将其转化到原核表达菌株BL21(DE3)plysS中,得到重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2).SDS-PAGE凝胶电泳检测到在IPTG诱导下...     

Survival of various ERIC-genotypes of Shiga toxin-producing Escherichia coli in well water

Recently, there has been a surge of interest in understanding the survival of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) in aquatic environments. Fifteen strains of STEC were monitored, individually, in untreated well water samples incubated at 10 and 22^{^}C for 56 days. The strains were selected from three serogroups (O26, Ol11 and O157) and represented five distinct ERIC (enterobacterial repetitive intergenic concensus)-genotypes. The microcosms were prepared in triplicate and inoculated at an initial cell density of about 7.0 log CFU/ml well water. At 10^{^}C, the cell density of five STEC strains fell below the detection limit of 0.8 log CFU/ml by day 56. Of the ten persisting strains, four showed superior survival with cell densities decreasing to an average of about 5 log CFU/ml while the remaining six strains showed moderate levels of survival, decreasing to an average cell density of about 3 log CFU/ml. At 22^{^}C, strain H32 (genotype I) and H15 (genotype B) persisted at 1.1 log CFU/ml and 2.2 log CFU/ml in 56 days, respectively. The other 13 STEC strains dropped below the detection limit between weeks 3 to 8. The 15 strains demonstrated highly variable levels of survival with no correlation between ERIC-genotypes or serogroups and the strains' ability to persist in the well water samples. Although strain H32 (O157:H7) persisted significantly longer than strain H22 (O157:H7) in natural well water at both 10 and 22^{^}C, both strains survived equally well in sterile well water, indicating that individual STEC strains vary in their ability to compete with background microbial populations.     

DNA colony hybridization method using synthetic oligonucleotides to detect enterotoxigenic Escherichia coli: collaborative study

The genes that encode several of the enterotoxins produced by Escherichia coli have been cloned by recombinant DNA techniques. When the nucleotide sequence of these genes is determined, defined sequence oligonucleotides that include a part of these genes may be synthesized. A 22-base DNA hybridization probe was produced for each of 2 heat-stable E. coli enterotoxin (ST) genes: STH, from strains originally isolated from humans; and STP, from strains first found in pigs. For this study, 32P end-labeled DNA probes, sonicated calf thymus DNA, and 3 known and 20 unknown (10 ST-positive and 10 ST-negative) strains were sent to each of 23 collaborators. Cultures were spotted onto an agar-based medium and grown into colonies, which were transferred by blotting to cellulose filters, lysed by alkali and steam, and used for DNA colony hybridization with the ST DNA probes. Strains containing an ST gene were recognized as dark spots on an autoradiogram. Of the 460 samples analyzed, 440 (95.7%) were correctly classified by the collaborators. The method has been adopted official first action.