牛疱疹病毒1型洛精株gD基因的分子克隆及序列分析

根据已发表的牛疱疹病毒1型（BHV－1）P8－2株gD基因的核苷酸序列设计了1对特异性引物，对我国BHV－1洛株gD基因进行PCR扩增，并对其克隆，测序和分析，结果表明，gD基因的核苷酸长度为1251bp，其编码417个氨基酸，BHV－1洛精株gD与国外报道的P8－2株的gD基因的核苷酸的同源性高达99．92％，氨基酸的同源性高达100％，这说明BHV－1的gD糖蛋白高度保守。     

禽成髓性白血病病毒p27和gag基因的克隆

禽成髓性白血病是由禽成髓性白血病病毒引起的一种禽白血病（Avian Leukosis)。禽成髓性白血病病毒的gag基因具有高度保守性，其编码的群特异性抗原p27是禽白血病病毒所共有的主要核心蛋白，可做为禽白血病的诊断抗原。本实验采用AMV感染鸡胚成纤维细胞（CEF），提取感染细胞总RNA，用随机引物反转录成cDNA，根据已经发表的AMV BAI－A株序列设计两对针对p27基因和gag基因的特异性引物，分别进行PCR，成功地扩出p27基因和gag基因，其片段分别为793bp和2．1Kb。以gag基因的PCR产物为模板，采用p27的特异性引物也成功扩出p27片段。分别将p27,gag基因与pGEM－TEasy载体进行连接，转化大肠杆菌，筛选阳性克隆，提取质粒，进行酶切鉴定。对含有p27基因的质粒进行测序，结果证明成功克隆了p27基因，间接证明了2．1Kb的片段是gag基因。p27和gag基因的成功克隆为该病的探针诊断和gag基因的表达提供了基础。     

肌肉生长抑制素基因的研究进展

肌肉生长抑制素（Myostatin）是骨骼肌生长发育的负调节因子，属于TGF－β超家族成员。Myostatin基因的结构与功能的深入研究对畜牧业、医疗医药业具有重要意义和应用前景。本文主要对肌肉生长抑制素基因（Myostatin）的结构、同源性、组织特异性及生物学的功能的研究现状进行了综述，并讨论其应用前景。     

人LPL基因调控序列的结构特点和体内外功能研究

在克隆了人ＬＰＬ基因５＇端、３＇端和基因间调控序列的基础上，构建了多种含ＣＡＴ报告基因的表达重组子。经对人ＬＰＬ不同缺失变异型启动子功能的体内、外分析，发现在５＇端序列中存在着与组织特异性表达和分化有关的ＬＰ－α、ＬＰ－β，以及位于－７０２、－４８６、－６６６和－４３０区的调控结构。转基因小鼠体内的ＰＨＬＰＬ４．０＋ｉｎｔｒｏｎ和ｐＨＬＰＬ４．０＋３＇，不仅呈现了很强的启动活性，而且对－４．０ｋｂ     

新城疫病毒（青岛株）F蛋白基因的克隆和序列分析

参考新城疫病毒（NDV）长春株的F基因序列设计了1以特异性引物，应用RT－PCR对NDV青岛株（野毒）的F基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序，扩出的F基因核苷酸长度为792bp，编码261个氨基酸，包括完整的F2片段和部分F1片段，裂解位点区（112－117aa）氨基酸序列为Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe，与国外发表的强毒株序列相符，正明青岛株为强毒株，根据该基因推导的所基酸序列，与国内外发表的NDVF蛋白氨基酸序列相比，同源性为88．1％－94．3％。     

滩羊体大品系生长激素基因的RFLPs的检测

研究运用了PCR－RFLPs方法，根据羊生长激素基因序列合成的特异性引物，对滩羊两个品系的基因组进行多态性分析。结果表明，其扩增产物的PVU Ⅱ酶切结果分别出现了两种基因型。并对两个品系滩羊生长激素基因检测结果进行了基因型和基因频率的初步分析，结果显示，BB基因型频率，滩羊普通品系显著高于体大品系（P＜0．05）；AB基因型频率，体大品系极显著的高于普通品系（P＜0．01）。而基因频率，两个品系之间无差异（P＞0．05）。     

1株新的新城设病毒毒株生物学特性研究及其HN基因序列测定

从高发病率高死亡率的鸡群中分离到1株病毒，经病毒分离鉴定为NDV。生物学特性研究证实为强毒株，但血凝价偏高。根据保守区设计一对特异性引物，经RT－PCR扩增得到其保护性抗原之一HN基因，包含完整的ORF。序列测定得到HN基因的核苷酸顺序并推断出氨基酸序列。     

利用PCR法鉴定产SLT—Ⅱe大肠杆菌

民贺氏菌毒素Ⅱ型变异性，是仔猪水肿病的主要致病历子。根据ＳＬＴ－Ⅱｅ基因序列，合成一对针对ＳＬＴ－Ⅱｅ操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链反应扩增方法。通过对产ＳＬＴ－Ⅱｅ毒素大肠杆菌菌株ＴＢ１，产ＳＬＴ－Ⅱ毒素大肠杆菌菌株９３３Ｗ和产ＳＬＴ－Ⅰ毒素大肠杆菌菌株Ｈ３０的试验，结果表明用所设计的引物建立的ＰＣＲ方法可特异性鉴定产ＳＬＴ－Ⅱｅ大肠杆菌。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）CH—1a株N基因的分子克隆,？…

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上，经电泳分析，酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定，序列分析表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅     

细胞凋亡的常用调控基因研究近况

细胞凋亡主要受基因的控制，现已发现许多基因对细胞凋亡均有直接或间接的调控作用。通常将这些基因分为两大类，即细胞生存基因和细胞死亡基因。一般认为与细胞生存有关的基因包括C－myc,C-abl,Ras,V-src,Bcl-2,EIB,LMW5-HL,C-kit和Bcl-x等；与细胞死亡有关的基因包含P^35,P^53,RB,DCC,WT-1,CpGv,Bcr-abl,V-erb-A,tats20,DAD1,ADO/Fas,TGF-β，TRP－2，RP－8，TRPM－2，SGP－2，TIA，Bax,ICE,C-rel,irrecrst等。本文对目前使用较多研究较深入的几种凋亡调控基因，即C－myc基因，Bcl-2基因，P^53基因，ICE基因，Fas基因及FasL和Cdc2基因的来源，作用和相互间关系的研究近况，予以综述，做一简介。     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

禽流感病毒核蛋白基因探针制备

中国农业大学动物医学院吴清民、高齐瑜等将禽流感病毒Ｈ９Ｎ２亚型毒株核蛋白（ＮＰ）基因３’端较为保守的，约３５０ ｂｐ的编编序列通过限制性内切酶ＨａｅⅢ切割、分离后，用随机引物法制备 Ｄｌｇｏｘｉｇｅｎｉｎ　－１１－ｄｕＴＰ标记探针。测定该探针的浓度为１００μｇ／ｍＬ。特异性试验发现该探针只能与实验室构建的、含有ＮＰ基因的重组载体ＰＧＥＭ－ＴＥ－ＮＰ和ｐＢａｃＰＡｋ－ＮＰ以及Ａ到流感病毒Ｈ９Ｎ９型、Ｎ３Ｎ２亚型以及Ｈ９Ｎ３亚型毒株基因组ＲＮＡ结合出现特异性的颜色反应，而与实验室常用的载休ｐＧＥＭ－Ｔ…     

鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1的表达诱发转基因小鼠鼻咽不典型增生

为建立鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1（N－LMP1）转基因小鼠模型，从整体的角度研究N－LMP1的功能，进一步阐明EB病毒在鼻咽癌变过程中的作用，应用DNA重组技术将角质细胞特异性启动子EDL2与N－LMP1连接，构建转基因EDL2－N－LMP1；并用显微注射技术，将转基因EDL2－N－LMP1注射入小鼠受精卵前核，再将注射后的受精卵植入假孕母鼠，获得转基因鼠，然后观察目的的基因在鼻咽部的表达和病理变化。本实验共获得53只转基因鼠，PCR法证明其中6只小鼠有N－LMP1基因扩增带，Suothern杂交显示PCR阳性小鼠有特异的杂交信号，整合率为11．3％，1只4月龄的转基因鼠出现了鼻咽部不典型增生，说明N－LMP1单独就能诱发小鼠鼻咽部发生癌前病变，为EB病毒可能是鼻咽癌的主要病因提供了有力的证据。     

一次试验中出现的问题及对特异性PCR反应条件的探讨(简报)

本试验根据Ｌａｍｂ等［１］报道的鸡生长激素基因序列，设计合成２对特异性引物ＰＭ３和ＰＭＰＳ１，它们的碱基序列分别是ＰＭ３ＦＯＲ５′－ａｔｃｃｃｃａｇｇｃａａａｃａｔｃｃｔｃ－３′ＲＥＶ５′－ｃｃｔｃｇａｃａｔｃｃａｇｃｔｃａｃａｔ－３′ＰＭＰＳ１ＦＯＲ５′－ｃｔａａａｇｇａｃｃｔｇｇａａｇａａｇｇｇ－３′ＲＥＶ５′－ａａｃｔｔｇｔｃｇｔａｇｇｔｇｇｇｔｃｔｇ－３′。通过ＰＣＲ反应从鸡基因组中扩增出含有ＧＨ基因内含子１和４的片段，再用ＭＳＰ１内切酶对产物做ＲＦＬＰｓ分析。由于特异性ＰＣＲ的条件要…     

猪β2-肾上腺素能受体基因的克隆与鉴定

β2－肾上腺素能受体（β2－adrenergic receptor,β2-AR)是β－AR的一种亚型。本研究根据猪的β2－AR cDNA序列设计了1对引物，以肝脏基因组DNA为模板，经PCR获取了一约1．3kb目的基因片段。将该片段克隆入pMD18-T载体，构建猪β2－AR基因重组质粒pMDAR。经PCR反应、酶切鉴定和序列分析证实β2－AR基因已成功克隆。为进一步研究β2－AR的功能、调控β2－AR和研制β2－AR型基因工程疫苗奠定了基础。     

猪水泡病病毒VP1重组蛋白的表达及抗原性检测

本研究利用猪水泡病病毒外壳蛋白VP1基因和pGEX-4T－1质粒成功构建重组质粒pGEX-4T－1－VP1，并转入BL21（DE3）表达菌中，经IPTG诱导后通过SDS-PAGE凝胶电泳实验和考马斯亮蓝染色，结果显示在57KDu处出现特异性表达条带。经免疫印迹试验证实本研究所表达的重组蛋白VP1具有抗原性，可为利用重组蛋白VP1建立间接ELISA方法检测猪水泡病奠定基础。     

竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病抗体的研究

用已研制的BTV－11型VP7单克隆抗体建立了竞争酶联免疫吸附试验（C－ELISA）检测蓝舌病抗体的方法，并与琼脂免疫扩散试验（AGID）进行了检测比较，C－ELISA特异性强，不与相关环状病毒发生交叉反应，敏感性比AGID高。用研究制备的C－ELISA诊断试剂盒和美国、澳大利亚制备的诊断试剂盒对1377份临床样品的检测，以及对实验动物人工感染后抗体动脉检测。三种诊断试剂盒检测结果一致，且重复性好。本研究建立的蓝舌病C－ELISA是一种特异性强、敏感性高的蓝舌病抗体检测方法。     

RT-PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的研究

根据猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪呼吸道冠状病毒（PRCV）的基因组核苷酸序列，在S基因（纤突蛋白基因）5′端保守区设计了一对引物P3／P4，该对引物在TGEV扩增跨幅约为2.4kb；而PRCV由于在此区域存在一约0.6kb碱基缺失，扩增跨幅约为1.8kb。用引物P3／P4对TGEV Miller株、Purdue株和PRCV AR310株分别进行RT－PCR，根据RT－PCR扩增片段大小可以直接区分TGEV和PRCV。用引物P3／P4与引物P1／P2作Nested-PCR,提高了该RT－PCR的特异性和敏感性，建立的RT－PCR可为临床上诊断TGEV及调查我国是否存在PRCV感染提供可靠的鉴别手段。     

禽新城疫快速鉴别诊断方法的建立

依据新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）基因裂解位点的核苷酸序列与其毒力的相关规律，分别设计合成了四条寡核苷酸引物，建立了一个可迅速检测不同禽源新城疫毒株并可鉴定强、弱毒株的逆转录酶－－聚合酶链式反应（RT－PCR）技术，对强毒株可扩增出362bp的通用片段和254bp的强毒株特异性片段；弱毒株则可扩增出362bp的通用片段和123bp的弱毒株特异性片段。本方法只需一个RT－PCR反应，整个过程在8小时内完成，既可检测感染鸡胚尿囊液，也可从病料直接检测，应用该方法对源于各种禽类的36份ND可疑病粒样品进行检测试验，结果阳性检出率为73.5%，与常规方法检测的结果相一致。