福建口岸从英国进境水仙种球上截获南芥菜花叶病毒和水仙潜隐病毒

2011年11月,福建出入境检验检疫局技术中心对一批英国进境水仙种球进行检疫,采用ELISA初筛,RT-PCR及序列测定确认的方法,从中同时检出南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)和水仙潜隐病     

应用巢式RT-PCR检测水仙退化病毒1

水仙退化病毒（Narcissus degeneration virus,NDV）是水仙上发生较为严重的病毒之一。本文根据 NDV 已报道的外壳蛋白基因序列,设计特异性引物,以感病水仙的总 RNA 为模板,建立了快速检测 NDV 的巢式 RT-PCR 方法。结果表明,巢式 RT-PCR 具有良好的特异性和灵敏度,能够从感染 NDV 的水仙样品上扩增出与预期大小相符的特异性目的条带,同时与其他病毒无交叉反应;灵敏度测定结果表示,巢式 RT-PCR 灵敏度较高,是普通 RT-PCR 的104倍,当 RNA 稀释到109倍时仍能被检测到。本文建立的巢式 RT-PCR 为水仙上 NDV 的快速检测提供了技术参考依据。     

进境豇豆种子携带种传病毒的检测与鉴定

 Imported cowpea seeds were detected with growing test, ELISA assay and RT-PCR method. The ELISA results showed that cowpea seedlings with symptoms reacted positively with antibody against Southern bean mosaic virus (SBMV). The 979 bp of fragment could be amplified from two positive ELISA samples using primers specific for Southern cowpea mosaic virus (SCPMV), and the sequence determination results proved that the pathogen existing in imported cowpea seeds was SCPMV. The positive ELISA results with SBMV antibody could be further confirmed by RT-PCR amplification with specific primers designed to amplify the coat protein gene and 3' noncoding region of SCPMV and SBMV. The RT-PCR method presented here was suitable for molecular identification of SBMV and SCPMV in entry-exit plant quarantine laboratories.     

从进境水仙上检测出南芥菜花叶病毒

利用DAS-ELISA对从荷兰进口的6个品种的水仙种球进行检测发现,品种为Recurvus的水仙种球对ArMV的多抗血清呈阳性反应达85%.免疫吸附电镜观察到在感病水仙种球中存在直径约30nm的球状病毒粒子.根据ArMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计引物,RT-PCR能从感病样品中扩增到预期580bp特异条带,序列测定分析表明此条带的序列为ArMV部分CP基因,在系统关系树上与ArMV的其它分离物形成一簇、亲缘关系很近,表明从进境水仙上检测到了ArMV.     

中国水仙上一种球形病毒的研究Ⅱ.病毒提纯及其生化特性

 繁殖于昆诺阿藜(Chenopodium quinoa)、千日红(Gompherena globosa)及番杏(Tetragonia.expansa)上的病毒分离物,经PEG6000沉淀结合差速离心浓缩后,用Sepharose 4B柱层析法进行分离纯化,获得保持侵染活性的病毒纯化物;而且表明,用昆诺阿藜繁殖病毒,效果最优。紫外扫描测定,纯化病毒的最高吸收波长为258nm,最低吸收波长为244nm,A260/A280为1.515。分析超速离心测定,病毒粒体为单一沉降组分,S20.w约73S。SDS-PAGE结果表明,病毒衣壳蛋白亚基由一条分子量为27.88×10³±2.99×10³daltons的多肽组成。根据紫外吸收估计,病毒粒体中核酸含量约12-15%;RNaseA酶解及变性处理病毒核酸后琼脂糖变性电泳结果说明,病毒基因组为一条ssRNA。根据该病毒的生物学特性及生化特性,初步确认为一种新的病毒分离物,并定名为中国水仙条纹病毒(Chinese Narcissus Strip Virus,ChNSV),其密码程式为R/1:*/12-15:S/S:S/*。     

中国水仙上一种球形病毒的研究Ⅰ.病毒分离及其生物学特性

 从水仙黄条病株上分离到一种球形病毒,直径约21nm,汁液摩擦接种35科(属)55(品)种植物,可侵染其中5科15(品)种,主要局限于豆种(Leguminosae)、藜科(Chenopodiaceae)以及茄科(Solanaceae)、苋科(Amaranthaceae)与番杏科(Aizoaceae)的个别种。在多数寄主上诱导局部坏死,豆科寄主上还伴随叶脉坏死症状产生。其中,昆诺阿藜(Chenopodium quinoa)、苋色藜(C.amaranticolor)、千日红(Gompherena globosa)、番杏(Tetragonia expansa)、大豆(Glycine max)、豇豆(Vigna sinensis)、克利夫兰烟(Nicotiana clevelandii)可作为诊断寄主;千日红、番杏与三叶草(Trifolium sibth)可作为毒源保存寄主。#br#在昆诺阿藜叶片汁液中,该病毒分离物的体外存活期在60天以上(25℃),热钝化点80-85℃(10分钟),稀释限点10^-5-10^-6。回接水仙健株,诱导产生系统褪绿条纹症状,不诱导水仙叶片产生具有特殊结构的内含体。     

生物防治水仙叶大褐斑病拮抗菌株的鉴定

从福建漳州湖乡水仙大田水仙根际分离并筛选到对水仙叶大褐斑病有明显拮抗作用的菌株ＣＳ５、ＣＳ５１、ＣＳ１２１。通过个体形态、培养特征、生理生化特性研究,将它们分别鉴定为拮草芽孢杆菌（ＣＳ５）、蜡质芽孢杆菌（ＣＳ５１）,荧光假单孢菌（ＣＳ１２１）、３朱细胞的ＤＮＡ Ｇ＋Ｃ摩尔百分比分别为４３．７％、３９．１％、和６６．８％。     

进境郁金香种球腐烂病的病原鉴定

在来自荷兰的郁金香种球上发现一种能够在种球储藏期发生、为害的真菌病害.对发病种球进行病原菌分离纯化及形态学和分子生物学鉴定,经过科赫氏法则验证,确定引起该病害的病原菌为尖孢镰刀菌郁金香专化型(Fusarium oxysporum f.sp.tulipae).     

福建口岸首次从日本进境水仙种球上截获4种病毒

<正>2016年3月,福建出入境检验检疫局技术中心采用血清学ELISA、电镜观察及分子生物学RT-PCR方法从一批旅检截获的日本进境水仙种球上检出水仙普通潜隐病毒(Narcissus common latent virus,NCLV)、水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus,NDV)、水仙迟季黄化病毒(Narcissus late season     

江苏省扬州市水仙病毒检测鉴定与序列分析

水仙属于石蒜科水仙属,是重要的观赏花卉之一。2016年-2017年,在江苏省扬州市采集的水仙上发现典型的花叶、条斑等病毒病症状。利用已报道的水仙病毒通用引物对疑似病样进行RT-PCR检测,结果表明,扬州采集到的3份病样上均能扩增到与预期大小相同的DNA片段。经克隆测序和序列分析发现,所得序列包含3种不同的类型,分别与水仙普通潜隐病毒Narcissus common latent virus(NCLV)、水仙退化病毒Narcissus degeneration virus(NDV)和水仙黄条病毒Narcissus yellow stripe virus(NYSV)有93%、98%和99%的相似性,表明江苏水仙受到了NCLV、NDV、NYSV 3种病毒侵染。这是江苏水仙上第一次发现NCLV、NDV、NYSV。在系统树中,NCLV可分为两个组,本研究所得NCLV-YZ与上海分离物位于同一组中;NDV也可分为两个组,本研究所得NDV与其他中国分离物均位于第二组;而NYSV具有很高的多样性,可分为4个组,本研究所得NYSV与其他部分中国分离物和日本分离物位于第一组。NCLV和NDV分组具有清晰的地理差异性,而NYSV受到地理隔离的影响不明显。     

进境百合种球病毒不同检测方法初析

我国大量进口的百合种球易携带多种检疫性病毒及限定性有害生物,进境口岸实验室对百合种球病毒的检测尤为重要.以百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)为对象,分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)及反转录PCR(RT-PCR)方法进行检测,根据过程与结果,初步分析不同检测方法的特点...     

进境美国小麦中黑麦草腥黑穗病菌的检测和鉴定

从进境美国小麦洗涤液中发现一种类似小麦印度腥黑穗病菌的冬孢子,冬孢子大小为25.0~33.8(29.5±2.3)μm,球形至近球形,淡黄褐色至暗红褐色,半透明至不透明,外胞壁具深褐色疣状突起,突起表面观为锥形至平截状,有时呈不完全脑纹状,外被淡色透明胶质鞘。冬孢子处理后经通用引物Til1/Til4和U2/U10扩增,其扩增产物用黑麦草腥黑穗病菌Tilletiawalkeri的特异性引物W1/W4再次扩增可以得到760bp的产物,产物测序得到的序列和GenBank中黑麦草腥黑穗病菌菌株YRG-001(AF218063)的序列相似性为99%(717/719),和GenBank中小麦印度腥黑穗病菌菌株Bpop(AF218060)的序列相似性为96%(694/719)。实时荧光检测的结果表明黑麦草腥黑穗病菌的探针TWAL能得到阳性扩增曲线。根据冬孢子形态特征、PCR分析、实时荧光检测和序列分析的结果,将这种腥黑穗病菌冬孢子鉴定为黑麦草腥黑穗病菌(T.walkeri)。     

几种进口花卉种子寄藏真菌的检测与鉴定

采用分离培养检验法分别对8种进口花卉种子共计14个批次的种子样品进行了种子奇藏真菌的检测、纯化和鉴定。研究结果表明，每种样品均带菌，共检测出进口花卉种子寄藏真菌13属24种，链格孢菌、枝孢菌、镰孢菌、毛壳菌是这些进口花卉种子寄藏真菌的优势菌群。     

进境新西兰猕猴桃中猕猴桃果腐病菌的检测与鉴定

对来自新西兰的猕猴桃进行了病原菌的分离培养,结果在果实中分离到2株疑似猕猴桃果腐病菌的菌株Na-3419和Na-4756。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Na-3419和Na-4756在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,菌株Na-3419与Gen Bank中登录号EU482221.1和EU482220.1的菌株序列同源性达到100%,菌株Na-4756与Gen Bank中登录号AY359230.1、AY359226.1和KR859079.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种猕猴桃3 d后开始发病。根据上述试验结果,将分离获得的菌株Na-3419和Na-4756鉴定为猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)。这是上海口岸首次在进境的猕猴桃果实上截获该有害生物。     

我国梅树上病毒及类病毒的检测和鉴定

目前, 我国梅树上的病毒种类及发生情况仍不完全清楚。本研究从北京、武汉、南京和无锡的梅园中采集了64份疑似感染病毒的叶片样品, 通过RT-PCR和斑点杂交, 对7种病毒和2种类病毒进行了检测。共检测到6种病毒和1种类病毒。其中, 李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus, PNRSV)和桃潜隐花叶类病毒(peach latent mosaic viroid, PLMVd)为我国梅树上的首次检出。PNRSV、亚洲李属病毒2号(Asian prunus virus 2, APV2)、桃叶痘伴随病毒(peach leaf pitting-associated virus, PLPaV)的检出率高于30%。综合考虑病毒的分布及检出率, PLPaV、APV2、PNRSV和李树皮坏死茎痘伴随病毒(plum bark necrosis stem pitting-associated virus, PBNSPaV)是武汉、南京和无锡梅树上的主要病毒。此外, 通过克隆和测序, 获得了PLMVd和梅树病毒A(mume virus A, MuVA)的基因组, PLPaV的RNA1组分和PNRSV外壳蛋白(CP)基因序列。序列比较分析显示, 我国PLMVd梅分离物和PNRSV梅分离物与我国桃分离物亲缘关系最近, 表明PLMVd和PNRSV可能在梅和桃树间交互侵染;我国MuVA梅分离物序列与日本梅分离物序列的相似性高达98.56%;PLPaV梅分离物与我国桃分离物之间序列变异较大。上述结果不仅进一步明确了我国梅树上的病毒及类病毒种类和分布情况, 而且有助于深入了解它们的流行与传播。     

同步检测为害百合种球3种检疫性病毒的多重RT-PCR方法

 The multiplex RT-PCR approach was developed for simultaneous detections of Arabis mosaic virus(ArMV),Strawberry latent ringspot virus(SLRSV)and Lily symptomless virus(LSV)from the imported lily bulbs.The results indicated that good specificity and sensitivity for simultaneous detection were obtained.The ultimate of RNA detection with three viruses mixture was 305 pg.The ultimate of RNA detection with ArMV,SLRSV and LSV were 156.0,13.4 pg and 1.12 ng respectively.This approach has potential to be used in quarantine of imports and exports.     

海南岛西瓜病毒病种类鉴定及发生分布

正病毒病是西瓜生产上的重要病害,目前侵染我国西瓜的病毒主要有西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV) 、甜瓜黄斑病毒(melon yellow spot virus,MYSV)、小西葫芦黄花叶病毒