片形吸虫“中间型”核糖体大小亚基序列多态位点的解析

为了分析片形吸虫"中间型"核糖体rDNA大小亚基中是否存在多态位点,试验通过经典分子生物学方法对采自青海省、广西壮族自治区和黑龙江省的片形吸虫进行准确鉴定,扩增3个地区片形吸虫rDNA的18S和28S序列,通过比对序列分析可能存在的多态位点,最后对可能存在的多态位点片段进行克隆验证。结果表明:采自青海省、广西壮族自治区和黑龙江省的片形吸虫分别是肝片吸虫、大片吸虫和片形吸虫"中间型",片形吸虫"中间型"18S的第653位和28S的第371,575,1 422,2 981位为多态位点。说明片形吸虫"中间型"rDNA 18S和28S序列存在5个新的多态位点,丰富了片形吸虫分子分类的标记基因。     

RAPD与形态学对片形吸虫种类鉴别的比较研究

通过形态学特征观察与随机扩增多态DNA（RAPD）技术，对国内外8株片形吸虫（Fasciola)作比较鉴别。形态典型的6株肝片形吸虫（F.hepatica)和1株大片形吸虫（F.gigantica)两种方法结果。南京的1株不典型虫种（F.sp)，其形态特征类似日本中间种／印度片形吸虫（F.indica),RAPD检测则与大片形吸虫聚类，差异仅0．255，亲缘于大片形吸虫，是一株形态不典型的大片形吸虫。比较表明，形态学方法能简单易行正确地判定典型片形吸虫，但难以识别中间种或亲缘种；RAPD技术则从分子遗传变异水平上鉴别虫种，有利于对中间种或亲缘种的识别及新种的发现，两者具有相互不可替代的相辅相成作用。     

酶切图谱及序列分析虫体ITS2鉴别中国的片形吸虫

提取我国广西、四川、黑龙江、甘肃等地及法国的片形吸虫的总DNA,用PCR扩增完整的ITS-2.对得到的PCR产物用限制性内切酶Hsp 92Ⅱ,Rca I进行酶切和RFLP技术分析.并对ITS-2 PCR产物进行双向测序.以便确定国内片形吸虫种内及种间ITS-2的特点和序列变异的水平.结果显示:广西、四川、黑龙江、法国等地的样品通过PCR均扩增到约550 bp的ITS-2目标片段.Hsp92Ⅱ,Rcal可区别不同种的片形吸虫.对PCR产物的序列分析结果表明片形吸虫ITS-2全长均为362 bp,同种内ITS-2序列无变异,不同种间ITS-2序列存在5～6个碱基差异,变异率约为2.8%.对各地区片形吸虫ITS-2的PCR RFLP分析与对PCR产物的DNA序列分析一致证明,来自四川的样品和法国样品同属肝片形吸虫F.hepattca;广西样品属大片形吸虫F.gigantica;黑龙江的样品为中间型片形吸虫.本研究首次从分子水平上证实我国除有肝片形吸虫、大片形吸虫外,还存在中间型的片形吸虫.     

片形吸虫Cold-SSCP鉴别方法的建立

以采自我国不同地区的片形吸虫虫体为研究对象，PCR扩增出核糖体DNA (rDNA)的第一内转录间隔区(ITS-1)序列，然后采用非同位素的单链构象多态性(Cold-SSCP)方法分析PCR产物，对不同地区片形吸虫进行分子鉴定。所有样品经Cold-SSCP分析显示2种带型。样品测序及序列分析结果表明，第1种为肝片形吸虫带型，另1种为大片形吸虫带型。本研究建立了区分大片形吸虫和肝片形吸虫的Cold SSCP方法，可用于这2种吸虫的分子流行病学调查，从而为片形吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础。     

酶切图谱及序列分析虫体ITS2鉴别中国的片形吸虫

提取我国广西、四川、黑龙江、甘肃等地及法国的片形吸虫的总DNA，用PCR扩增完整的ITS－2。对得到的PCR产物用限制性内切酶Hsp 92Ⅱ，RcaI进行酶切和RFLP技术分析。并对ITS－2PCR产物进行双向测序。以便确定国内片形吸虫种内及种间ITS－2的特点和序列变异的水平。结果显示：广西、四川、黑龙江、法国等地的样品通过PCR均扩增到约550bp的ITS－2目标片段。Hsp92 Ⅱ,Rcal可区别不同种的片形吸虫。对PCR产物的序列分析结果表明片形吸虫ITS－2全长均为362bp，同种内ITS－2序列无变异，不同种间ITS－2序列存在5－6个碱基差异，变异率约为2.8%。对各地区片形吸虫ITS－2的PCR－RFLP分析与对PCR产物的DNA序列分析一致证明，来自四川的样品和法国样品同属肝片形吸虫F.hepatica；广西样品属大片形吸虫F.gigantica；黑龙江的样品为中间型片形吸虫。本研究首次从分子水平上证实我国除有肝片形吸虫、大片形吸虫外，还存在中间型的片形吸虫。     

吸虫线粒体基因组及其应用研究进展

吸虫病(Trematodiasis)如血吸虫病、肝片形吸虫病等是一类重要的人兽共患寄生虫病,在我国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对吸虫线粒体基因组全序列分析的研究进展、应用和今后的发展方向作一综述。目前,已完成包括复殖亚纲10个种和单殖亚纲4个种总计14种吸虫线粒体基因组全序列测定。吸虫线粒体基因组碱基组成、基因结构与排列、基因变异等分析结果为线粒体功能基因组学研究、比较基因组学研究、分子分类学研究、物种起源、分子系统发育与进化分析及其疾病诊断等提供了重要依据和指导作用。线粒体基因组序列分析有助于解决一些新近发现的种如三平并殖吸虫、中华血吸虫等独立种的分类地位;而怡乐村并殖吸虫和佐渡并殖吸虫是大平并殖吸虫的同物异名吸虫。日本片形吸虫与大片形吸虫的cox1基因序列完全一致,这些日本片形吸虫应为大片形吸虫;大片形吸虫不同株虽然在cox1基因序列上无差异,但nad1基因却有8.3%变异性,这表明大片形吸虫不同株中可能存在隐蔽种。总之,线粒体基因组序列可为吸虫虫种与虫株的分类学地位的确定提供重要依据。同时,人们可根据线粒体基因组序列,通过PCR方法有效地对临床上易混淆的吸虫的种、株或群等作出确切的鉴别与诊断,从...     

片形吸虫与片形吸虫病（三）

4片形吸虫感染的免疫反应针对片形吸虫感染的免疫,是机体抵御和清除片形吸虫及其有害产物的一种生理过程,片形吸虫对畜体来说是外源性物质,具有抗原性,感染后可诱导宿主产生免疫应答,发生一系列细胞及分子改变。4．1动物免疫     

片形吸虫种类鉴定的分子生物学研究进展

片形吸虫是反刍动物的重要病原，主要有肝片吸虫和大片吸虫，两者形态极相似，故对其鉴定一直是研究的热点。近年来应用分子生物学技术，由蛋白质、染色体、特定基因组DNA等不同分子水平鉴定片形吸虫种类的研究报道较多，揭示了片形吸虫的种内差异，种间差异和亲缘关系，从而为片形吸虫（尤其是中间种和亲缘种）种类鉴定提供了新途径，就此进展作一概述。     

黄牛源Fh/Fg杂合型片形吸虫的鉴定

为弄清黄牛感染的片形吸虫种类,首先对来自河南济源市一肉牛屠宰场黄牛肝脏上的片形吸虫进行形态学观察,然后基于核糖体ITS1、ITS2区域和线粒体nad1、cox1基因序列进行分子鉴定。ITS1和ITS2序列分析结果显示,济源黄牛源片形吸虫分离株JY003和JY004为Fh/Fg杂合型片形吸虫。基于nad1和cox1基因序列,JY003和JY004与大片形吸虫的相似性高于肝片形吸虫,其中nad1序列与大片形吸虫中国云南、日本和韩国分离株的相似性高达100%。在基于nad1和cox1基因的进化树上,分离株均与大片形吸虫参考株处于同一分支。结果表明,首次从河南黄牛体内鉴定出Fh/Fg杂合型片形吸虫,为动物和人的片形吸虫病防控提供重要的基础数据。     

片形吸虫DNA随机扩增多态性分析

为区别从南京市江宁县采集的片形吸虫非典型形态虫体，应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术，对6株片形吸虫总DNA进行了扩增。结果，10条引物中有8条能产生扩增图谱，电泳图谱经聚类分析，与传统的分类结果一致，并表明来自江宁的片形吸虫既有形态典型的肝片形吸虫，也有形态不典型的大片形吸虫。