大黄素抑制宫颈癌Hela细胞增殖与诱导凋亡的研究

研究大黄素对宫颈癌Hela细胞的增殖与凋亡的影响。通过MTT法检测Hela细胞的存活率,Annexin V-FITC/PI双染法及流式细胞术检测Hela细胞凋亡,蛋白质免疫印记法检测p-JNK、JNK、Bcl-2、pro-caspase-9、cleaved-caspase-3蛋白的表达。大黄素对Hela细胞的增殖抑制效果呈浓度依赖性。Annexin V-FITC/PI双染和流式细胞术结果表明大黄素能够诱导Hela细胞凋亡。蛋白质免疫印记法表明,随着药物处理时间的增加,p-JNK、cleaved-caspase-3的蛋白质表达量逐渐增加,Bcl-2、procaspase-9的蛋白表达量逐渐减少。在实验条件下,大黄素可以抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

瘤背石磺多糖对人宫颈癌细胞的体外抑制作用

体外试验研究瘤背石磺多糖（Onchidium reevesii polysaccharides, OSP）和硫酸酯化修饰后瘤背石磺多糖（Sulfated Onchidium reevesii polysaccharides, S-OSP）对Hela人宫颈癌细胞生长的影响,并以阳性药物顺铂(0.5 μg/ml、0.75 μg/ml、1.5 μg/ml)作为对照。将不同浓度（50 μg/ml、75 μg/ml、150 μg/ml）的OSP和S-OSP作用于Hela细胞,用CCK-8法分析Hela细胞在12h、24h、48h和72h的增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,并应用qRT-PCR检测相关凋亡基因的表达变化。结果表明OSP和S-OSP均能降低Hela细胞活性并诱导其凋亡,而且S-OSP比OSP更能显著抑制Hela细胞增殖活性（P<0.05）,表明硫酸酯化修饰改变了多糖结构进而影响多糖抗肿瘤活性。作用48h后,三种浓度OSP组Hela细胞生长抑制率分别为60%、67%、71%;S-OSP组Hela细胞生长抑制率分别为74%、77%、84%;顺铂组Hela细胞生长抑制率分别为82%、86%、90%。流式细胞术检测显示OSP和S-OSP作用24h后,细胞早期和晚期凋亡的比率显著（P<0.05-0.01）,G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例不断降低;实时荧光定量表明促凋亡基因Caspase-3的表达量随药物浓度的提高显著增加,抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达量随药物浓度的提高无明显变化,说明OSP和S-OSP可通过调节Caspase信号通路诱导Hela细胞凋亡。     

椿皮提取物对Hela细胞增殖及凋亡相关作用机制

通过检测椿皮提取物对宫颈癌Hela细胞活力的影响,观察药物对细胞凋亡、细胞周期、细胞自噬及相关因子的调控作用,对引起细胞凋亡的分子机制进行初步研究.体外培养Hela细胞,以不同质量浓度的椿皮提取物处理宫颈癌Hela细胞后,MTT法检测药物对Hela细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测椿皮...     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Caski细胞增殖与凋亡作用的影响

[目的]探讨海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Caski细胞株增殖和凋亡的影响。[方法]MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率,PI单染法测定细胞周期;Hoechst33258/PI荧光染色法观测Caski细胞的形态学改变;RT-PCR法测定宫颈癌Caski细胞株内Bcl-2和Bax基因表达。[结果]海洋珍珠生物提取液在一定浓度范围内,以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制宫颈癌Caski细胞的生长（P〈0.05）.以0、6、30和60μg/ml海洋珍珠生物提取液处理细胞24h,Caski细胞早期凋亡率分别为7.6%,7.15%,18.5%和38.9%,晚期凋亡比例为0.45%、2.85%、8.55%和23.2%。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变;RT-PCR显示海洋珍珠生物提取液处理后宫颈癌Caski细胞内的Bcl-2mRNA表达降低,BaxmRNA表达升高。[结论]海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制宫颈癌Caski细胞增殖,并通过降低Bcl-2,升高BaxmRNA来诱导细胞凋亡。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

茶氨酸溴香酰胺对人肝癌细胞体内外生长的抑制作用

以L-茶氨酸作对照,评估本实验室合成的新颖的茶氨酸衍生物-茶氨酸溴香酰胺（TBrC）对人肝癌HepG2细胞系体内外生长的抑制作用,并初步探究其作用的分子机制。采用MTT法检测不同浓度的TBrC对HepG2细胞体外生长的影响,应用蛋白质印迹法检测解析HepG2细胞中与癌细胞凋亡和生长密切相关蛋白的表达和药物可能作用的分子靶点。此外,建立动物肿瘤模型,与对照组茶氨酸和临床常用抗癌药物五氟尿嘧啶组相比较,评价TBrC对荷瘤裸鼠人肝癌HepG2肿瘤生长的抑制效果。实验结果显示,TBrC抑制人肝癌细胞体内外生长的活性超过其母体化合物茶氨酸分别为3倍和4倍以上,对小鼠生长无明显毒性。TBrC比茶氨酸更显著地抑制肝癌细胞生长因子受体c-Met和抗凋亡的Bcl-2等蛋白的表达;此外,TBrC大大上调促进凋亡的Bax蛋白的表达。TBrC抑制c-Met信号传导通路,下调Bcl-2/Bax蛋白比率可能是其作用的分子机制之一。这些结果提示,TBrC具有广泛应用于临床治疗和（或）辅助治疗人肝癌和其他癌症的潜力。     

角果木内生真菌活性分子对HeLa细胞增殖凋亡的影响

为了解红树林植物角果木(Ceriops tagal)内生壳囊孢属真菌Cytospora sp.提取物WP-1［(22E, 24R)-5, 8-epidioxy-5α, 8α-ergosta-6, 9(11), 22E-trien-3β-ol］抑制人宫颈癌HeLa细胞的效果,笔者采用MTT比色法、克隆形成实验、Hoechst 33258染色和蛋白免疫印迹法来研究WP-1对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,随着WP-1浓度增加,HeLa细胞的存活率显著降低,而且该提取物能明显抑制HeLa细胞的克隆形成,当其浓度达到10 μmol·L?1时,HeLa细胞出现染色质浓缩以及核小体碎裂的凋亡现象。蛋白免疫印迹法结果显示,随着WP-1剂量的增加,与凋亡相关的蛋白Caspase-3及Caspase-9的表达下调,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9的表达明显上调。本实验结果显示,WP-1可以抑制HeLa细胞的增殖,并促进HeLa细胞发生凋亡。     

口虾蛄乙酸乙酯提取物体对人肺癌A549细胞的抑制作用

目的观察口虾蛄乙酸乙酯提取物（EOS）对人肺癌A549细胞的抑制作用。方法观察不同浓度EOS对肺癌A549细胞生长曲线和集落形成能力的影响,荧光双染法检测细胞凋亡情况。结果 EOS明显抑制肺癌A549细胞的生长和集落形成,呈剂量-时间依赖性;EOS作用48 h后肺癌A549细胞生长延缓并萎缩,胞核固缩;荧光双染实验可见细胞凋亡增多。结论 EOS可明显抑制人肺癌A549细胞的生长和增殖,并具有诱导凋亡作用。     

CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

根据CyclinE（细胞周期蛋白E）基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向（＋797～＋819）位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.     

脐带间充质干细胞及其外泌体对宫颈癌HeLa细胞的作用初探

人脐带间充质干细胞是一种多能干细胞,可用于多种疾病的临床治疗。利用从人类脐带分离的间充质干细胞,以及从该间充质干细胞的培养液中分离提取的外泌体,通过与宫颈癌HeLa细胞共培养,研究间充质干细胞及其外泌体对HeLa细胞生物学表型的影响。结果表明:脐带间充质干细胞共培养均极显著抑制HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭等表型,并极显著促进HeLa细胞凋亡。脐带间充质干细胞来源的外泌体处理HeLa细胞后,细胞增殖、迁移及侵袭也同样受到极显著抑制,并极显著促进细胞凋亡。这一研究提示脐带间充质干细胞及其外泌体并未在体外培养条件下促进HeLa细胞的生长、迁移,相反对HeLa细胞的表型具有一定的抑制作用。     

大鼠骨髓干细胞的分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的研究

目的探讨大鼠骨髓干细胞的体外分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的的可行性,并检测其表型和功能。方法取大鼠长骨骨髓细胞,第3代细胞传代后加用终质量浓度10μg/L的血管内皮生长因子（VEGF）的细胞因子,培养3 d后行内皮细胞特异性成分鉴定。结果（1）免疫组化染色鉴定：P3代CD133呈中度阳性表现,CD34呈弱阳性表现;经VEGF诱导后表达明显增强。（2）流式细胞仪细胞计数鉴定：P3代CD133、CD34阳性细胞率分别为97.3%、55.5%;经VEGF诱导后CD133、CD34阳性细胞率分别为91.4%、78.6%。（3）P3代VEGF诱导后乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）、荆豆凝集素（UEA）双染鉴定：经VEGF诱导的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（70.2±5.1）%,未经VEGF诱导后的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（20.4±3.8）%。（4）RealTime-PCR检测第3代VEGF cell和三代cell的内皮细胞特异性成分表达：P3 VEGF cell血管内皮生长因子受体2（VEGF-R2）浓度是P3cell的2.22倍。结论用贴壁筛选法和VEGF细胞因子培养大鼠骨髓干细胞可以获得较高纯度的内皮祖细胞（EPCs）,该细胞具有内皮祖细胞的特性,可用于进一步向内皮细胞分化的研究与应用。     

人乳腺癌细胞、结肠癌细胞和宫颈癌细胞生长曲线测定

为检测比较人乳腺细胞(MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100)、人结肠癌细胞(HCT-8)和人宫颈癌细胞(HeLa)生长曲线的差异性.本实验首先常规培养MDA-MB-231、MCF-7、HBL-100、HCT-8和HeLa细胞,然后应用MTT方法测定这几种细胞的生长曲线.在本实验条件下,这几种细胞生长速度从高...     

原花青素对Aβ25—35诱导PC12细胞氧化应激反应的保护作用

目的探讨原花青素对β-淀粉样肽25－35（Aβ25-35）诱导PCI2细胞凋亡及氧化应激反应的影响。方法3×10^8／LPCI2细胞培养24h,分别加入培养液（对照组）、10μmol／LAβ25-35（诱导组）、30mg/L原花青素＋10μmol／LAβ25－35（保护组）。24h后收集细胞,以Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,比色分析测定MDA、H2O2含量和CAT活性。结果诱导组细胞可见凋亡特异性核固缩、核碎裂;MDA和H2O2含量与对照组比较明显增加（P〈0．01）,CAT活性明显降低（P〈0．05）。保护组与诱导组比较,凋亡特异性核固缩、核碎裂减少;MDA和H2O2含量明显降低（P〈0．01）,而CAT活性显著增强（P〈0．01）。结论原花青素可抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,可能与其抑制Aβ25-35引起的氧化应激反应有关。     

不同氧气浓度对绵羊体外受精胚胎凋亡相关基因表达的影响

[目的]研究绵羊胚胎体外发育过程中细胞凋亡的机制,以进一步提高胚胎体外发育能力。[方法]利用Real-time PCR技术,分别检测凋亡相关基因Mcl-1、Bad、Bak、Bik和Caspase-3在低氧环境(5%O2)和高氧环境(20%O2)培养的绵羊体外受精(IVF)胚胎中的表达水平。[结果]不论是高氧环境还是低氧环境,从2-细胞阶段到囊胚期均可检测到Mcl-1、Bad、Bak、Bik和Caspase-3的表达,Caspase-3基因表达水平随着胚胎的发育有逐渐增高的趋势,且高氧和低氧间差异不显著(P0.05);从8-16细胞期开始,Mcl-1、Bad、Bak和Bik表达水平都显著增加,且低氧环境中的表达水平均明显低于高氧环境中的表达水平(P0.05)。[结论]氧气浓度在一定程度上影响了绵羊胚胎中凋亡相关基因的表达,绵羊胚胎细胞凋亡可能是凋亡相关基因Mcl-1、Bad、Bak、Bik和Caspase-3相互协同的结果。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Fit-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组（不加寡核苷酸）;Ⅲ组（SCON）,20μmol／L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20μmol／L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达情况的变化。[结果]VEGF和Fh-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24h,VEGFmRNAⅠ组相对表达量为0．0769,Ⅱ组为0．0768,Ⅲ组为0．0769,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组VEGFmRNA相对表达量下降为0．0242,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．059,0．051,0．0514,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0242,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．061,0．0552,0．0521,3组之间无显著性差异（P〈0．05）,第Ⅳ组为0．0115,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养24h,Fit—lmRNA Ⅰ组相对表达量为0．0786;Ⅱ组为0．0782,Ⅲ组为0．0781,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组Flt-1 mR—NA相对表达量下降为0．0256,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．0781,0．0784,0．0782,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0228,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．0691,0．0780,0．0693,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0215,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。可见,VEGF受体Flt-1 mRNA的表达与VEGF相似。二者均在Ⅰ组、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在Ⅲ组表达轻微下降,但与Ⅰ组和Ⅱ组无显著性差异（P〉0．05）;Ⅳ组的表达量显著下降（P〈0．05）,并且随着时间的延长至逐渐下降。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt—1的mRNA表达有下调作用。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

［目的］ 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响。［方法］ 试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组;Ⅲ组（SCON）,20 μmol/L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20 μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化。［结果］VEGF mRNA在Ⅰ、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在Ⅲ组VEGF mRNA 表达略有降低,但与Ⅰ和Ⅱ组间无显著性差异（P＞0.05）;Ⅳ组（反义寡核苷酸组）的VEGF mRNA表达量显著下降（P＜0.05）,并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1 mRNA的表达与VEGF相似。［结论］反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。     

纳米二氧化硅对体外培养HaCaT细胞凋亡的影响

[目的]比较不同粒径(15、30、100 nm)纳米二氧化硅(nano-SiO2)和常规二氧化硅(Micro-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)生长的抑制作用及凋亡的影响。[方法]采用不同浓度(2.5、5、10μg/ml)不同粒径(15、30、100 nm)的nano-SiO2和10μg/ml的Micro-SiO2(1～5μm)染毒体外培养的HaCaT细胞24 h,同时设溶剂对照组(nano-SiO2和Micro-SiO2的分散液染毒组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HaCaT细胞暴露于不同浓度、不同粒径的nano-SiO2后的细胞活力,用Annexinⅴ-PI双染法和Hoechest33342染色法测定细胞凋亡情况;使用2’,7’-二乙酰二氯荧光素荧光探针检测细胞内活性活性氧(ROS)水平。[结果]不同粒径的nano-SiO2纳米对HaCaT细胞的半数抑制浓度分别为(19.4±1.3)、(27.7±1.5)、(35.9±1.6)μg/ml。当染毒浓度固定时,随着nano-SiO2粒径的减小,凋亡率逐渐增加。当粒径固定时,胞内ROS的水平也随着nano-SiO2浓度的增大而增高。相关分析表明,细胞存活率和凋亡率与胞内活性氧的水平的相关性分别为-0.952和0.898(P<0.01)。[结论]nano-SiO2能抑制HaCaT细胞生长并可诱导其凋亡,这种现象的发生可能与胞内产生的活性氧水平有关。     

复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

[目的]探讨复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）按不同剂量、3种比例（1：1、1：2和2：1）复合,用MTT法研究复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。[结果]PSP与GBE按3种比例复合使用组对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用均明显好于相对应剂量的单一成分组,且同一配比组的抑瘤率与剂量呈正相关。PSP与GBE联合使用能对抑制人宫颈癌HeLa细胞产生协同增效作用。其中PSP与GBE按2：1比例复合的作用最突出,在高、中和低剂量时抑瘤率分别为67．92％、58．93％和34．86％（P〈0．01）。[结论]该研究为人宫颈癌的治疗奠定了基础。     

Survivin—siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用

目的应用RNA干扰技术（RNAi）,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒,转染72h后,两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组,而G2期和S期细胞比例减少,细胞出现凋亡,与脂质体组比较,两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％）,（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒,两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础．     

血管内皮生长因子对水牛卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）对水牛卵母细胞体外受精的影响,为优化水牛卵母细胞体外培养体系及提高水牛体外胚胎生产效率奠定基础.[方法]以带有3层以上卵丘细胞的卵丘—卵母细胞复合体（COCs）为材料,分别在水牛卵母细胞体外成熟液和受精液中添加重组人VEGF165,研究VEGF对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎发育的影响.[结果]在成熟液中添加10ng/mLVEGF,水牛卵母细胞的第一极体排出率由57.3％提高到72.3％,差异显著（P＜0.05,下同）;体外受精后的受精卵分裂率由41.0％显著提高到53.3％.在受精液中添加10 ng/mL VEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率由41.9％提高到63.0％,差异极显著（P＜0.01,下同）,囊胚形成率由17.0％显著提高到32.6％.在成熟液和受精液中同时添加10ng/mLVEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率和囊胚形成率由43.4％和19.0％极显著提高到64.3％和27.2％,囊胚细胞数由89.5显著提高到106.8.[结论]VEGF能促进水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎的发育,因此可将VEGF用于水牛卵母细胞体外受精体系的优化,提高水牛体外胚胎生产效率.