犬瘟热病毒的分子生物学研究进展

犬瘟热病毒的分子生物学研究进展耿志贤田克恭（军事医学科学院实验动物中心，北京１００８５０）李钟铎（军事医学科学院微生物学流行病学研究所）犬瘟热病毒（ｃａｎｉｎｅｄｉｓｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＤＶ）是犬瘟热病的病原。自然条件下ＣＤＶ感染食肉目中犬科、...     

鹅细小病毒分子生物学研究进展

本文根据国内外鹅细小病毒的研究结果，对国小病毒在分类学地位，基因组结构，基因组的转录和调节，基因编码蛋白，与番鸭细小病毒的关系等方面进行综述，为鹅细小病毒的进一步研究提供参考。     

猪瘟病毒分子生物学研究进展

猪瘟病毒 (CSFV)是一种具有囊膜的 RNA病毒 ,在病毒分类上属于黄病毒科、瘟病毒属的成员 ,也是世界上危害最严重的猪的病原之一 ,被国际兽医局 (OIE)列为 A类动物传染病 ,因此开展猪瘟病毒分子生物学研究具有重要的经济意义。1　CSFV基因组结构和功能CSFV基因组为单股正链 RNA,长约 1 2 .3 kb,含有一个大的开放阅读框架 ,并由其编码一种约3 898个氨基酸的多聚蛋白 ,该聚蛋白在翻译的同时和翻译后经病毒和宿主细胞的蛋白酶加工成 1 2种成熟的病毒蛋白 ,其在聚蛋白上从 N端到 C端的顺序依次为 :Npro、C、Ems、E1、E2、p7、NS2、N…     

猪源盖塔病毒的分子生物学研究进展

盖塔病毒(GETV)属于披膜病毒科甲病毒属.GETV属于虫媒病毒,可以通过蚊虫感染低等脊椎动物.猪群感染GETV后可发生轻微症状,主要导致怀孕母猪繁殖障碍.目前,GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损失严重.因此,加强对猪源GETV的病原、致病机制和疫苗的研究,对于该病的防控具有更...     

传染性法氏囊病毒分子生物学研究进展

传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　,　ＩＢＤＶ）是鸡的重要传染病病原之一,除了直接引起３周龄～６周龄易感鸡发病死亡外,更为重要的是破坏机体的免疫器官,引起免疫抑制,导致鸡群丧失对其它病原的免疫力,给世界养鸡业造成巨大的经济损失。本文主要从病毒的特性、基因组结构和病毒蛋白及变异几方面对ＩＢＤＶ研究进展进行浅述。１主要特性１.１分类由于ＩＢＤＶ在鸡胚肾细胞上培养出现的细胞病变、对某些理化因素的抵抗力及电镜下形态同呼肠孤病毒（ＲＨ）Ｖ相似,所以一开始被误…     

禽呼肠病毒分子生物学研究进展

禽呼肠病毒属于呼肠病毒科正呼肠病毒属,基因组为线性双股RNA,由分节段的10个基因片段组成,根据核酸电泳迁移率可分成3组,即大基因节段(L),中基因节段(M)和小基因节段(S),它们编码10种结构蛋白,4种非结构蛋白。目前,已完成了L3,M3,S1,S2,S3和S4基因的克隆表达,建立了重组σA蛋白,重组σNS蛋白的单克隆抗体McAb-ELISA以及σB-ELISA等分子诊断方法。文章阐述了禽呼肠病毒基因组的特性及病毒蛋白的结构和功能,旨在为禽呼肠病毒的诊断、预防和疫苗研制提供参考。     

猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)可引起猪传染性胃肠炎,给养猪业造成极大危害。本文介绍TGEV基因组结构、S基因及结构蛋白与功能,通过对TGEV的分子生物学特性的深入研究,对目前开发研制的新型疫苗具有重要意义。     

犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank上发表的犬瘟热病毒融合蛋白F基因序列,设计合成了1对寡聚核苷酸引物,扩增大小为337bp的目的片段,建立犬瘟热病毒F基因的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法具有很强的特异性和很高的敏感性,可作为犬瘟热临床快速诊断的一种方法。     

犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析

从犬瘟热病毒检测阳性的3份(KM1、KM2、KM3)病料中进行F基因的克隆测序,并与其他5株代表性参考毒株的同一基因序列进行比较(国内外流行毒株以及疫苗毒株).结果表明,KM1与KM2有95.7%的核苷酸同源性,其氨基酸序列完全相同;KM3株与KM1有1个氨基酸的差异,与参考的5株犬瘟热病毒的F基因核苷酸和氨基酸分析同源性分别为91.1%～96.5%和96.8%～100%.     

犬冠状病毒分子生物学研究进展

犬冠状病毒 ( CCV )基因组为一 2 8～3 2 kb大小的单股正链 RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先导引物转录机制进行转录 ,不同的病毒基因组和亚基因组翻译产生除病毒依赖 RNA的 RNA聚合酶以外 ,还产生其它病毒的结构蛋白和非结构蛋白 ,其中有相对比较保守、参与病毒核衣壳形成、介导宿主细胞免疫的核衣壳蛋白 ( N ) ;在病毒出芽、组装和成熟中起重要作用的膜蛋白 ( M) ;能刺激机体产生中和抗体 ,且易变异的纤突蛋白 ( S) ,另外 S蛋白还决定着病毒血清型、感染力 ,同时通过识别 ,并与病毒宿主细胞受体相互作用决定病毒感染的宿主范围 ;参与病毒组装的小膜蛋白 ( E)和其它病毒蛋白。 CCV还可识别猫氨肽酶 N( f APN)并与之相互作用     

间接ELISA检测犬瘟热血清抗体方法的建立

以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性较好,可用于犬瘟热血清抗体的定量和定性检测。     

不同宿主来源犬瘟热病毒的分离及致病相关基因序列分析

利用Vero-DST细胞从死亡犬、狐狸肺、脾内分离到4株犬瘟热病毒-CDV-TM-CC、CDV-Dog-SCh、CDV-Fox-SY、CDV-Fox-WF,在Vero-DST细胞上传5代没有细胞病变,5代细胞培养物经电镜、间接免疫荧光及PCR鉴定为阳性。与本实验室保存的CDV-Monkey-BJ进行基因测序,并对与致病相关的F蛋白、V蛋白进行分析,F蛋白分析5株毒具有6个潜在N-末端糖基化位点,与强毒株同源性在92%～99.7%,与疫苗株不高于93.3%,在F1亚基内有7个特有氨基酸位点,这可能与其对灵长类致病有关。V蛋白分析表明,其与强毒株同源性在94%～99.7%之间,而与疫苗株不高于93.3%,CDV-Monkey-BJ C272R突变使其Zn结合能力丧失。试验结果显示,所有分离株均为强毒株,不同宿主毒株序列存在差异,值得进一步研究。     

犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达

根据已发表的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的序列设计两对引物,以犬瘟热病毒云南株感染的Vero细胞收获病毒提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增出H基因的939 bp(H基因前段,H1)和920 bp(H基因后段,H2)片段,分别将其定向克隆于PET-28a( )中,将重组质粒转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在35℃1、.0 mmol/L IPTG诱导下获得良好表达,经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白为34 ku,与预期大小一致。免疫印迹试验显示,该重组蛋白可被CDV Onderstepoort株多克隆抗体识别,表明该重组蛋白具有抗原性。     

水貂阿留申病病毒分子生物学研究进展

水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体.该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2).VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用.该病毒的分子生物学诊断技术主要有核酸杂交技术、PCR和基因芯片检测技术.     

Cerebellum progesterone concentration decreased in canine distemper virus infection

Progesterone has neuroprotective effects including augmentation of myelination in the central and peripheral nervous system. This study was designed to determine if demyelinating lesions in the cerebellum resulting from canine distemper virus (CDV) infection are associated with progesterone levels. Progesterone was measured using radioimmunoassay in samples of the cerebellum, corpus callosum, medulla oblongata, parietal, frontal, temporal, and occipital cortices as well as cerebrospinal fluid (CSF) and plasma collected from ten CDV infected and six non-infected dogs. The cerebellum progesterone level was significantly different between CDV infected (0.66+/-0.09 ng/g) and control dogs (1.14+/-0.09 ng/g) (p<0.001); however, no difference was observed for the other CNS regions, plasma and CSF (p>0.05). The cerebellum progesterone level was also significantly different between acute (0.71+/-0.0 5 ng/g) and chronic cases (0.61+/-0.09 ng/g) (p<0.05). The CDV infected cerebella were also categorized histopathologically according to the severity of demyelinating lesions as mild (n=5), moderate (n=2), or severe (n=3) among which the cerebellum progesterone level was significantly different (p<0.05). Progesterone concentration was 0.71+/-0.05 ng/g in mild, 0.65+/-0.10 ng/g in moderate, and 0.56+/-0.07 ng/g in severe cases. In conclusion, progesterone concentration decreases in the cerebellum in CDV infection and the severity of demyelinating lesions is the greatest in cerebella with the lowest progesterone concentrations. The results suggest that local impairment of progesterone metabolism may be associated with the initiation and progression of cerebellar lesions in CDV infection.     

Evaluation of ELISA based on the conserved and functional middle region of nucleocapsid protein to detect distemper infection in dogs

A 287 bp fragment from the middle region of the nucleocapsid protein of canine distemper virus (CDV) was amplified from the conjunctival samples of distemper-infected dogs and was cloned into pRSET B vector. The recombinant protein was expressed as a 16-kDa-fusion protein with histidine tag in E. coli. Sera of distemper-infected and vaccinated dogs contained IgG antibodies against the purified recombinant protein as observed by enzyme linked immunosorbent assays (ELISA) and showed a strong correlation (r = 0.882, p < 0.0001 at 95% CI) and good agreement (kappa = 0.718) with the conventional tissue culture viral antigen based ELISA. Further, the results of recombinant protein based ELISA and Western blotting with the sera from the infected and vaccinated dogs correlated well (kappa = 0.8226). These findings recommend the use of the recombinant protein in the serodiagnosis of canine distemper virus infection in dogs.