宁夏肉用种鸡J亚群禽白血病的实验室诊断

对宁夏某肉用种鸡场发病的肉种鸡病料进行组织病理学检查，并将其接种于鸡胚成纤维细胞(cEF)，从中分离到J亚群禽白血病病毒(ALV—J)。从患鸡肝组织切片中观察到大量髓细胞样瘤细胞，散在或呈簇状，髓细胞样瘤细胞的细胞质内显现嗜酸性颗粒。在用抗ALV—J囊膜糖蛋白的单克隆抗体进行的间接荧光抗体(IFA)试验中．病料接种cEF后的IFA试验呈现强阳性。用一对ALV—J特异性的引物对病料基因组DNA进行PcR扩增，结果，扩增出了2．2kb的特异性条带。上述观察和试验证实，该肉用种鸡场肉种鸡发生的疫病为J亚群禽白血病。     

泗水县J亚群禽白血病的血清学测定

采用ELISA法对泗水县12个蛋鸡场共360份血清进行J亚群禽白血病的血清学调查,结果表明,2个感染J亚群禽白血病的蛋鸡场抗体阳性率分别为56.7%、43.3%,另外10个蛋鸡场的抗体阳性率分别为0、10%、0、23.3%、16.7%、20.0%、3.3%、0、3.3%、0。血清学调查结果表明,泗水县已存在J亚群禽白血病。发病鸡场鸡新城疫免疫抗体阳性率分别为76.7%、90.0%,抗体效价平均值分别为5.1log2和7.13log2,说明鸡群感染ALV-J对鸡新城疫免疫效果产生较大影响。     

进口白羽肉种鸡J亚群禽白血病病毒的全基因组序列分析

为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包括ALV-J原型病毒株HPRS-103、美国肉鸡ALV-J分离株、国内肉鸡分离株)及蛋鸡分离株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高,为93.5%~95.1%,处于同一分支。8株ALV-J的3'非编码区(3'UTR)在rTM区缺失203bp,DR-1区缺失7bp,E元件位置缺失125bp,仅保留了22个碱基,这一缺失特征与GD14J2一致。8株ALV-J的3'LTRU3区序列与ALV-J肉鸡分离株及蛋鸡分离株的相应基因序列同源性均低于91.5%,而与GD14J2病毒株的同源性较高,为94.3%~96.3%。序列分析发现U3区存在连续11bp缺失和164位碱基突变(C/T),该突变形成2个新的转录调控元件AIBREP1、AIBREP2。综合gp85、3'UTR和U3区序列特征,推测引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2为同一来源。但本次分离到的ALV-J病毒株也有新的变异趋势,这些变异是否与ALV-J致病性相关,还需进一步研究。本研究为ALV-J有效防控和净化提供数据支持。     

上海地区蛋鸡J亚群禽白血病的血清学调查

采用ELISA法对上海地区4个蛋鸡场共72份血清进行J亚群禽白血病的血清学调查,结果表明,2个疑似感染J亚群禽白血病的商品代蛋鸡场抗体阳性率分别为25%和15%,另2个无白血病临床症状蛋鸡场的抗体阳性率分别为0和8.3%.血清学调查结果表明,上海地区已存在J亚群禽白血病.对发病鸡场鸡新城疫免疫抗体检测结果表明,抗体阳性率均为100%,抗体效价平均值分别为9.4 log2和10.65 log2,说明鸡群感染ALV-J对鸡新城疫疫苗免疫效果几乎没有影响.     

IFA和ELISA检测J亚群禽白血病病毒的比较研究

为比较3种禽白血病病毒(ALV)抗原检测ELISA试剂盒的特异性和灵敏度,将J亚群禽白血病病毒(ALV-J)传染性克隆rNX0101株以病毒原液(9×103TCID50)、10倍病毒稀释液(9×102TCID50)、100倍病毒稀释液(90 TCID50)接种培养于6孔板的DF1细胞,每孔均提前放入灭菌的细胞爬片,于接种后第1~6天每天取上清用3种ELISA试剂盒(A、B、C)检测ALV p27抗原,同时在接种后的第3天和第6天取出细胞爬片进行间接免疫荧光法(IFA)检测。结果表明,IFA方法对高、中、低剂量接种3 d后均可检出ALV-J的感染,而ELISA试剂盒中只有A试剂盒在高剂量接种时才能检出,试剂盒B和试剂盒C最早要在第4天才可检出;中、低剂量接种,3种试剂盒在第4~5天才能检出;第6天时,由于病毒的明显复制,无论IFA方法还是3种ELISA试剂盒都可检出ALV-J的感染。本研究结果为正确选择商品化禽白血病抗原检测试剂盒提供了借鉴。     

肉种鸡群中J亚群禽白血病的危害和净化

1.病原及临床症状 J亚群禽白血病(subgroup J Avian Leukosis)是由J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J)引起的一类禽类传染性肿瘤疾病,病原属于反转录病毒,与过去已经发现的ALV亚群A、B、C、D、E中的任何一种都不相同,ALV-J核衣壳的蛋白质由gag基因编码,包括主要的群特异性抗原;包膜由env基因编码;逆转录酶由pol基因编     

从一病例谈对肉仔鸡J—亚群白血病的认识

2000年11月，济宁市郊区的三个饲养户在饲养三群肉仔鸡(每户1 000只)时发现，鸡群从20日龄左右开始出现死亡，有一户日死亡鸡高达10只左右，因曾喂过一段时间结块怀疑发霉的饲料，故怀疑是霉饲料中毒，28日龄时来校化验，发现：病鸡的个体差异较大，有的鸡出现瘫痪，在进行病理组织检查时发现，有两只鸡的肝脏出现了淡黄色大小各异的斑块，使肝脏呈花斑状，未发现其他病变，故将心、肝、脾、皮肤、关节等用福尔马林固定，制作了病理切片，病理组织学观察发现：肝、心、脾、肾等器官组织有嗜酸性颗粒的髓细胞局灶性浸润，故怀疑为J－亚群白…     

A、J亚群禽白血病病毒感染肉用种鸡的诊断

通过流行病学调查、剖检病变和组织病理学观察,结合PCR技术检测病原核酸,确诊肉用种鸡群发生了由ALV—A和ALV—J感染而导致的淋巴细胞性白血病和骨髓细胞瘤型白血病。在检测的6只病鸡中,6只病鸡均感染了ALV—J,2只病鸡感染了ALV-A.     

J亚群禽白血病研究进展

J亚群禽白血病病毒是上世纪90年代初从商品代肉鸡中分离鉴定出来的新的ALV亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病(myloid leucosis,ML)。2009年,J亚群禽白血病在我国呈高发态势。我国于1999年首先在肉用型鸡群分离鉴定出ALV-J的中国株,随后相关研究依次展开。论文就ALV-J的流行病学、检测方法、病毒变异、免疫抑制及与其他免疫抑制疾病共感染等几个方面进行了简要介绍。     

J亚群禽白血病研究进展

禽白血病中分离自鸡的有6个亚群,即A、B、C、D、E和J亚群。J亚群禽白血病（Subgroup J Avian Leukosis）由J亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J）引起的一类禽类传染性肿瘤疾病,是Pay L N及其同事于1989年首次从肉种鸡群中分离出来的。根据病毒在不同遗传型鸡胚成纤维细胞上的宿主范围、与相同或不同亚群成员的干扰谱、病毒诱导的中和抗体,将其定名为禽白血病J亚群。该病于1988年首次发现于英国,随后许多国家和地区均有该病的报道,给世界养禽业带来了严重的危害。我国也于1999年首次分离到了ALV-J,而1999年～2002年是我国J亚群白血病的发病高峰期,     

J亚群白血病的研究进展

J亚群白血病是最近从肉用型鸡分离到的一种新的白血病病毒，该亚群具有宿主范围广泛，感染率高，传播速度快，致死率高等特点，给世界养鸡业造成了严重的危害，本文就国内外对该病的最新研究进展，从病毒的来源和分子生物学，该病的发病情况，病理变化，诊断与检测及防制方面进行了综述。     

进口白羽肉种鸡禽白血病疫情鉴定

2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针对禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)的特异性PCR检测结果显示,55份病料样品中ALV阳性样品12份(21.8%),MDV阳性样品1份(1.82%),REV均为阴性。将12份ALV阳性病料样品经处理后接种DF-1细胞进行病毒分离,ELISA检测结果显示有8份ALV群特异性抗原阳性。ALV多重PCR检测结果表明,8个分离株均为J亚群ALV(ALV-J),测序结果显示,8个分离株之间核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与A、B、C、D、E亚群ALV的同源性仅为56.5%~58.8%,与ALV-J的同源性为90.7%~96.6%,进一步表明所有分离株均为ALV-J。上述结果表明,引起该次进口白羽父母代肉种鸡发生禽白血病的病原主要以ALV-J为主,该研究结果为疫情的溯源和有效防控奠定了基础。     

从一病例谈对J—亚群白血病的认识

禽白血病是由病毒引起流行较广的肿瘤性疾病 ,感染率很高 ,临诊上表现形式多样 ,如淋巴细胞性白血病、成红细胞性的病等。鸡的经典白血病主要是由外源性的Ａ和Ｂ亚群引起 ,少数由Ｃ和Ｄ亚群引起 ,Ｅ亚群为内源性病毒 ,由于内源性白血病病毒基因早在家鸡的祖代已整合到鸡的染色体上 ,并能随种系繁衍 ,因此内源性白血病病毒很弱或无致瘤特性。所以 ,根除白血病 ,通常是指清除外源性白血病病毒感染。多年以来 ,利用剔除ＡＬＶ感染种鸡以切断垂直传播的方法 ,到了 80年代中期 ,在世界发达国家的种鸡群中已基本消灭了这类经典的外源性ＡＬＶ的感…     

蛋鸡J亚群禽白血病的病理学诊断

2004年8月，山东某蛋种鸡场，饲养蛋种鸡5000余只，于开产前发病，死亡率约20％，送我化验室5只进行剖检，我们发现该鸡群流行一种以肝、脾肿大为主要特征的疫病，经病理学诊断为J亚群禽白血病。现报告如下。     

蛋种鸡J亚群-禽白血病组织病理学与超微病理学研究

本研究旨在探讨蛋种鸡J亚群-禽白血病的发病机理。针对山东济宁某蛋种鸡场200日龄产蛋鸡的组织病料,分别进行组织病理学与超微病理学研究,检测禽白血病病毒(ALV-J)抗原与抗体,分离病毒,并对其进行单克隆抗体间接免疫荧光试验检测。患病鸡群出现渐进消瘦、瘫痪和最后死亡现象,全群死亡率达10%左右。病鸡的肝、脾等内脏器官明显肿大,表面可见大小不一的灰白色结节;其肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织中有一定比例的胞质含红色嗜酸性颗粒的骨髓样细胞瘤细胞增生,也发现间质中淋巴细胞和成淋巴细胞浸润增生。同时在脾脏和法氏囊组织中均看到病毒颗粒,有囊膜,直径约100nm。病料中p27抗原和血清中抗体均呈阳性,并分离到ALV-J。以上结果提示该蛋种鸡群发生的肿瘤病是由ALV-J引起的。随着越来越多的禽白血病病例在蛋鸡中确诊,预示着我国蛋鸡业面临新的威胁,值得引起重视。     

黄羽肉鸡J亚群禽白血病病毒分离鉴定与全基因组序列分析

为了解J亚群禽白血病在黄羽肉鸡中的流行状况,采用病料研磨液接种DF-1细胞、ELISA p27抗原检测、PCR扩增等方法,从广东某鸡场送检疑似禽白血病的黄羽肉鸡病料中分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,命名为GDLZ0715。为进一步了解该病毒分子学特性,对其进行全基因组测序,并与其他ALV-J毒株进行比较。结果表明,GDLZ0715分离株整个基因组中gag、pol、env基因和LTR相对保守,与各参考ALV-J毒株序列同源性分别达93.5%~95.9%、96.8%~97.3%、89.6%~94.6%和90.8%~95.1%;3′UTR变异较大,与各ALV-J参考毒株序列同源性仅为80.5%~93.4%,其中rTM和E元件大量碱基缺失;进一步分析表明3′UTR中rTM区和E元件大量碱基缺失正成为我国肉鸡ALV-J毒株的变异趋势。     

J亚群禽白血病病毒TCID_(50)不同测定方法的比较

为比较不同方法在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)组织细胞半数感染量(TCID50)上的差异,将ALV-J传染性克隆r NX0101株同一病毒保存液以10倍梯度稀释后按照常规方法分别接种已长满DF-1细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,维持7 d后取所有细胞培养上清以ALV-p27抗原检测试剂盒检测p27抗原,细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体JE9进行间接免疫荧光(IFA)检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算两种方法在两种细胞上的TCID50。结果显示,ELISA法测定该病毒在DF-1细胞和CEF细胞上的TCID50分别为10-5.4TCID50/0.1 m L和10-4.666TCID50/0.1 m L,而IFA法测定该病毒在DF-1和CEF细胞上的TCID50分别为10-6.333TCID50/0.1 m L和10-5.2TCID50/0.1 m L。结果表明,IFA比ELISA具有更高的灵敏度,并且ALV-J在DF-1细胞上复制能力比CEF更强,在DF-1细胞上测定ALV-J的TCID50更为科学。     

J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果

应用特异性抗J亚群禽白血病病毒（ALV－J）的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV－J抗原和抗体的方法。结果表明，在ALV－JADOL－Hcl感染鸡胚成纤维细胞（CFF）24小时后，可以用1FA检测出阳性细胞，感染72小时后，可以检测出最小病毒感染量≥1．25TCID50／孔。对人工感染ALV－J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明，免疫荧光法可以检测出组织中的ALV－J抗原，表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817－env感染的Sf9细胞作抗原，可以检测出鸡血清中抗ALV－J的特异性抗体。该方法在ALV－J的控制中必将产生重要作用。     

家禽业面临J亚群白血病的挑战

由于J亚群白血病具有病毒遗传不稳定性、可水平和垂直传播等特性，给诊断和预防工作带来了困难。对该病的研究尚需足够的技术支持和资金投入，而生产者则应做到科学饲养。