应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮

采用基于生物素(Biotin)-链霉亲和素(Strepavidin)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮(ZEN)检测方法.以strepavidin包被板条,加入生物素化的ZEN-BSA,结合在板条上的ZEN-BSA与标准/样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体,用稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠IgG进行示踪,建立了间接竞争的ZEN-TRFIA.该方法的检测灵敏度为0.2 ng/ml,测量范围是0.2～200.0 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.7%和8.3%,平均回收率为91.1%.与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12.3%,与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应,说明该方法的特异性较好.相关试剂在4 ℃放6个月后各检测参数基本无变化,说明该方法稳定.样品同时用ZEN-TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量,两者的相关系数为 0.966 4,说明该方法测量准确.ZEN-TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点,适合于ZEN大量筛查的应用.     

电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用

目的:分析电化学发光法(ECLIA)与时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测AFP的临床应用。方法:釆用ECLIA和TRFIA两种方法同时检测5组血清甲胎蛋白(AFP)含量,其中肝癌120例,胃癌48例,乳腺癌32例,卵巢癌45例;健康人群50例。观察两者的准确率、稳定性、线性范围与相关性回归分析。结果:肝癌组AFP值(ECLIA法:520.36±354.26ng/mL;TRFIA法:558.48±360.27ng/mL),胃癌组(ECLIA法:15.38±2.34ng/mL;TRFIA法:18.63±1.42ng/mL),乳腺癌组(ECLIA法:10.35±3.51ng/mL;TRFIA法:18.63±1.42ng/mL),卵巢癌组(TRFIA法:11.81±4.36ng/mL;ECLIA法:13.53±2.96ng/mL)。正常组(ECLIA法:6.32±5.14ng/mL;TRFIA法:6.51±5.42ng/mL),两种方法检测结果无显著差异(P0.05),其相关系数为0.992,呈正相关。ECLIA法与TRFIA法批内批间变异系数分别低于2.9%和5.7%,前者优于后者。结论:TRFIA法和ECLIA法检测AFP具有较好的准确率、稳定性及相关性,可应用于临床血清AFP的检测。     

沙丁胺醇时间分辨荧光免疫分析检测技术的研究

采用包被二抗间接竞争法,以抗SAL二抗体包被96微孔板作为固相二抗,与游离SAL间接竞争限量的以Eu^3＋标记的SAL-OVA抗原,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测沙丁胺醇（SAL）,以利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立快速、高灵敏度的沙丁胺醇（SAL）全自动检测方法。结果表明该法的灵敏度为0．04ng／mL,批内和批间变异系数分别为2．2％和8．7％,平均回收率为106．5％,与盐酸克伦、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0．93％和0．73％。由此可见,用TRFIA法检测SAL,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。     

时间分辨荧光免疫分析法与放射免疫分析法检测甲胎蛋白的效能比较

目的比较时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）与放射免疫分析（RIA）两种方法检测甲胎蛋白（AFP）的效能。方法对TRFIA与RIA两种方法测定AFP进行线性检测、精密度实验、临床对比实验及相关性分析。结果TRFIA法检测AFP的线性范围为1-1210μg/L,比RIA的1-900μg/L宽;检测精密度：TRFIA分析内CV%为3.8%-4.3%,分析间CV%为4.9%-5.8%;RIA分析内CV%为5.8%-8.6%,分析间CV%为6.4%-9.5%;两种方法呈显著正相关（r=0.986,P＜0.01）。结论TRFIA法优于RIA法。     

农产品中黄曲霉毒素的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究

【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检测技术进行方法学考核,以花生、稻米、植物油等为例,进行实际样品检测,并与HPLC法进行结果比对。【结果】在花生、稻米、植物油等农产品实际样品检测中,本研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测技术检测黄曲霉毒素B₁得到检测限均为0.3 μg·kg^-1,线性范围分别为0.8-25、0.8-15和0.8-30 μg·kg^-1。上述3种农产品对应的标准曲线的线性方程分别为y=0.238x+0.654（R²=0.992）、y=0.321x+0.811（R²=0.990）和y=0.146x+0.173（R ²=0.993）,标准偏差分别为0.024、0.039和0.021。该方法的批内准确度和精密度添加回收试验结果表明,添加回收率在81.0%-113.0%,变异系数在7.2%-14.2%;批间准确度和精密度试验结果显示,添加回收率在75.8%-114.9%,变异系数在7.7%-15.3%。说明该检测技术批内、批间均具有良好的准确度和精密度。该方法与HPLC法检测结果相比,相对误差小于10%,说明黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析技术与行业标准方法检测结果具有良好的一致性。【结论】时间分辨荧光免疫层析检测技术灵敏度高、线性范围宽,重复性和稳定性好,是一种适合中国国情的实用快速检测技术,具有广阔的应用前景。     

基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定

【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度（IC10）为13 ng•mL-1,抑制中浓度（IC50）为435 ng•mL-1,线性范围在31—5 952 ng•mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。     

己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立

建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后,再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0.125 ng/mL,可定量检测范围为0.25~15.60 ng/mL。该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足实践中一般样品的残留检测。     

氟喹诺酮类药物免疫分析方法研究进展

氟喹诺酮类药物是一种广谱高效的抗菌类药物,现已广泛应用于畜牧业生产中,但由于养殖户对该类药物的长期不合理使用,造成了动物组织中的药物残留问题日益严重。因此,建立高灵敏、低成本和高通量的氟喹诺酮类药物检测方法,对于保障动物性食品安全具有重要意义。文章综述了检测氟喹诺酮类药物的各种免疫分析方法,包括酶联免疫分析法、胶体金免疫层析法、荧光免疫分析法、荧光偏振免疫分析法和时间分辨荧光免疫分析法,同时也比较了各种免疫方法的优缺点,并对氟喹诺酮类药物免疫分析方法的发展方向进行了展望,以期为动物性食品中氟喹诺酮类药物的残留检测提供理论依据。     

氯霉素荧光纳米颗粒免疫层析法的建立

本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。     

氯霉素对毛竹幼苗色素质量分数及叶绿素荧光的影响

为了探讨抗生素对植物生长的影响,以3年生毛竹Phyllostachys edulis实生苗为材料,用Yaxin-1161型非调制式叶绿素荧光仪和JIP-test数据分析方法,研究了采用不同浓度氯霉素（CAP）对其叶片色素质量分数和叶绿素荧光特性的影响。结果表明:氯霉素处理后,毛竹幼苗叶片叶绿素a, 叶绿素b和总叶绿素质量分数显著降低（P＜0.05）;捕获的激子将电子传递到电子传递链中超过初级醌受体（QA）的其他电子受体的效率（ET0 /TR0）。用于电子传递的量子产额（ET0 /ABS）,最大光化学效率（P0）和吸收光能为基础的性能指数（PIABS）均显著下降（P＜0.05）,表明氯霉素具有抑制毛竹幼苗光合性能的作用。图1表3参29     

高效液相色谱法测定复方氯霉素酊中氯霉素含量

目的建立测定复方氯霉素酊中氯霉素含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为phe-nomenex00g-4097-e0C18柱(4.6mm×25mm,5μm),流动相为甲醇水冰醋酸三乙胺(100∶100∶1.5∶1.0),流速1mL/min,柱温为40℃,检测波长为278nm。结果进样量在5~80μg/ml时,与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999(n=5),平均回收率为99.74%,RSD为0.21%(n=5)。结论该方法准确,重现性好,操作简便,可用于复方氯霉素酊的质量控制。     

高效液相色谱——串联质谱法测定鸡肉中的氯霉素

氯霉素(CAP)是一种广谱类抗生素,广泛存在于动物的饲料中。长期食用氯霉素,会对人体的骨髓造血系统和神经系统等造成损害。为保障人体健康,氯霉素含量的检测显得尤其重要,特别是食用肉类中氯霉素残留含量的检测。样品经过乙腈水溶液提取,离心取用上清液再经过PRIME HLB固相萃取柱净化,氮吹,甲醇水溶液定容,过0.22μm水相滤膜,用液相色谱法—串联质谱法检测氯霉素。结果显示,氯霉素线性关系良好,其相关系数为0.999。在0.2、1.0、2.0μg·kg^-13个水平添加回收实验条件下,回收率为80%～100%,相对标准偏差为2.67%～8.81%,可确定的方法检出限为0.05μg·kg^-1。该方法灵敏度高、重现性好,可满足鸡肉中痕量元素的检测。     

超高效液相色谱法-串联质谱法测定牛奶中的氯霉素残留

应用超高效液相色谱-串联质谱法建立了牛奶中的氯霉素的检测方法。样品经乙酸乙酯提取后,用正已烷除脂,经C18固相萃取小柱富集纯化后,以C18反相柱为分析柱,乙腈-0.5mmol/L乙酸铵溶液为流动相,采用电喷雾负电离源(ESI-),多反应监测模式(SRM),用内标法定量检测。该方法提高了检测灵敏性和分析结果的可靠性,能够适应大规模样品的分析要求。     

酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

[目的]探索水产品中氯霉素残留量的快速检测方法。[方法]采用酶联免疫法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中氯霉素的残留量。[结果]检测的20个水产品中有1个阳性样品,其他样品均为阴性。ELISA方法的检出限为0.01μg/kg,平均回收率为76.1%~90.7%,相对标准偏差(RSD)≤3.21%,在0.025~1.600 ng/ml范围内有良好的线性关系,相关系数为0.997 5。[结论]该检测方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于大批量水产品中氯霉素残留的快速检测。     

ELISA检测蜂王浆氯霉素残留的快速前处理方法

为获得一种能快速检测蜂王浆中氯霉素残留的前处理方法,采用改良的0.1mol/L Tris-TBE(pH=8.0)溶液处理蜂王浆,结合乙酸乙酯提取氯霉素(CAP),处理时间约25min。ELISA检测样品的OD450值明显低于试剂盒法,通过添加标准CAP溶液对改良法进行验证。结果表明,改良法提取的样品对不同CAP质量浓度表现出明显的OD450值变化,与添加前比较差异显著(P<0.05),排除处理过程存在干扰显色的因素。改良法检测相同样品的平均相对标准偏差为1.29%,完全符合目前国际上氯霉素残留检测的要求。     

氯霉素细胞毒性研究

[目的]了解氯霉素的细胞毒性机理。[方法]用浓度为0.5、1、5、10 mg/L的氯霉素稀释液处理蚕豆根尖,进行氯霉素细胞毒性检测试验,光学显微镜下观察细胞的分裂情况,统计微核数。[结果]氯霉素稀释液处理的蚕豆根尖细胞依然能够进行分裂和增殖。氯霉素培养液中的蚕豆根尖细胞经固定、酸解和染色处理后,在光学显微镜下能观察到微核。氯霉素浓度为0.5、1、5 mg/L时,微核率分别为1.25‰、4.50‰和7.00‰,表现出剂量效应;氯霉素浓度为10 mg/L时,微核率为9.75‰,与蒸馏水对照存在极显著差异(P<0.01)。[结论]氯霉素可能是作为DNA的断裂剂,在细胞有丝分裂时产生作用,微核在细胞间期或有丝分裂中后期形成。     

重氮化法合成全抗原的研究

[目的]制备氯霉素全抗原,探索氯霉素合成的方法,为动物免疫试验作准备。[方法]采用重氮化法合成氯霉素卵清蛋白全抗原,通过紫外法和红外光谱法测定合成的偶联效果。[结果]重氮化法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,用于免疫动物制备抗体。[结论]该研究为合成高效价的抗体奠定了基础。     

氯霉素对大型溞的急性和慢性毒性效应

[目的]评价氯霉素对水生生物的生态风险。[方法]以大型溞为研究对象,探讨不同浓度氯霉素对大型溞急性和慢性毒性。[结果]急性毒性试验结果表明,氯霉素对大型溞的48 h-EC50值为175.846 mg/L,属于低等毒性。21 d慢性毒性试验中各浓度处理对大型溞生长繁殖相关指标有不同程度的影响,且子代出现了不同程度的畸形现象。[结论]该研究结果为氯霉素水生生态毒性评价提供理论依据。     

氯霉素人工免疫原的合成与鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,CAP-HS与BSA合成成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAP pAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。