苏云金杆菌以色列变种在不同培养基上的产毒能力

苏云金杆菌以色列变种Bacillus thuringiensis Var. israelensis(下称B.t.i.)是近年来发现的一株对蚊幼虫有高度毒效的微生物杀虫剂,也是苏云金杆菌类群中唯一对杀灭蚊虫具有实用意义的菌株。B.t.i对蚊幼虫的杀虫活性,主要在于蛋白质晶体,而营养条件对晶体的合成有着重要的影响。苏云金杆菌(下称B.t)不同血清型对培养基     

苏云金芽孢杆菌培养条件及晶体蛋白提纯方法初探

在苏云金芽孢杆菌常用培养基的基础上,设计了３种改进苏云金芽孢杆菌产生伴孢晶体的培养基,从中筛选出一种比１／２ＬＢ、Ｇ Ｔ培养基培养周期短（约需３８ｈ）的ＺＭ培养基。同时,改进了晶体蛋白的提纯方法—碱裂解法。改进后的方法与不连续蔗糖密度梯度离心法相比,简便易行,提取量大,在Ｂｔ的生化和生物活性研究上具有一定参考价值。     

苏云金杆菌(72l6)的诱变选育

通过诱变手段可能选育高毒效苏云金杆菌(Eacillus thuringiensis)菌株。用紫外线处理B.thuringiensis(7216)。对于提高对昆虫的致病作用,已有报道。Norris用紫外线照射后产生的突变株,对大菜粉蝶的致病力提高了7倍,这个突变株在处理前就有每个细菌不只产生一个晶体的倾向,处理后则能正常产生多晶体。本文报道,采用紫外线处理(7216),对诱变菌株的产品能力及其对昆虫的致病力,并从中分离到对斜纹夜蛾毒力较强的菌株。材料和方法 (一)、出发菌株:苏云金杆菌(7216),本所分离并保存。生测对照菌株:HD-1,引自湖南省微生物研究所。     

苏云金芽胞杆菌一新菌株的鉴定及其杀虫活性

为分离并鉴定对亚洲玉米螟具有高毒力的苏云金芽胞杆菌菌种,通过棋盘式采集法从吉林省农业科学院试验田土壤中分离获得野生菌株,进行了形态、生化特性、伴孢晶体观察及基因型鉴定,并测定了其对3种鳞翅目害虫的室内生物活性。结果显示:该菌株在LB培养基上为圆形、暗白色菌落,边缘不整齐,革兰氏染色阳性,产生的伴孢晶体形状多为不规则形。16S r DNA序列与苏云金芽胞杆菌属的NBRC 13865同源性达99%;该菌株为cry2+cry9复合基因型,编码氨基酸序列与Cry2Ab和Cry9Ea蛋白同源性分别为94%和99%,鉴定为苏云金芽胞杆菌,命名为JN001。该菌株对亚洲玉米螟具有较高毒性,以1.0×109个/m L菌体浓度接种3龄幼虫72 h后,其校正死亡率为95.06%,致死中浓度(LC50)为4.12×103个/m L菌体,而对斜纹夜蛾和粘虫毒性较弱,接种72 h后校正死亡率分别为12.88%和7.34%。表明该菌株是1株对亚洲玉米螟具有较强毒力的苏云金芽胞杆菌新菌株,具有较好的开发利用潜力。     

苏云金芽孢杆菌晶体毒素感染敏感昆虫离体与活体细胞的病理学比较研究

用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体细胞和活体细胞在感染苏云金芽孢杆菌晶体毒素后,细胞的病变过程相同。     

高产苏云金素培养基和培养条件的优选

用正交试验的方法筛选了苏云金杆菌高产苏云金素的培养基配方和培养条件。在第一次正交试验筛选出的6种培养基配方的基础上,对培养基成分和用量作调整后进行第二次正交试验,筛选出五种培养基配方。将这11种培养基用3个菌株继续评选,尽管不同菌株在同一培养基中产苏云金素的量不同,但3个菌株产苏云金素量最高,且稳定的培养基匀为M_3培养基。正交试验的最后培养条件:温度32℃、pH6.5、通气量最大,转速200rpm、接种菌龄16小时、接种量3％、培养24小时。同时,还对苏云金菌杆CT—43菌株在培养基M_3中不同发酵时间的细胞数、pH、还原糖、氨态氮和可溶性磷以及苏云金素的杀虫活性进行了检测。     

苏云金杆菌高毒力菌株4．0718的快速选育

从湖南省不同生态区域的旱作地，果园和稻园采集的858份土样中，分离筛选出苏云金杆菌30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株701^2c为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫菌株4．0718。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％、97％和100％。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续10代培养能稳定遗传。     

连续使用苏云金杆菌时蚊虫的敏感性测定

苏云金杆菌以色列变种(血清型H—14)(以下称苏云金杆菌H—14)对蚊幼虫有高度毒效,国内外已做了很多不同规模的现场试验,国外已有几种剂型的商品,具有较好的应用前景。由于苏云金杆菌H—14的毒性机制主要是蚊幼虫吞食本菌的伴孢晶体,这与感染性因子有所不同,而有些类似于化学杀虫剂。为了预测在连续使用的情况下,     

味精废水驯化后苏云金杆菌菌株晶体和芽孢的组分及特性

对苏云金杆菌出发菌株H3a经长期味精废水驯化获得的8种变异菌株进行了茄子瓶装味精废水培养基培养,并应用液体双相法分离了晶体和芽孢。通过SDS-PAGE电泳确定了晶体蛋白组分的分子量为120、104、67—68、43—45kD,芽孢蛋白组分的分子量为148、120、67—68、55、46、24、16kD,二者共同的蛋白分子量为120、68及43—46kD;选取经分离后的G．1菌株晶体并通过DEAE—离子交换纤维素柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析分离,得到了两个主峰,分子量为120、68kD。生物测定120、68kD肽段对小菜蛾的毒性,结果其半致死浓度分别为0．609、＞25μg/ml,而全培养液为6．03mg/ml。     

杀线虫苏云金芽胞杆菌菌株YC-10的分离鉴定及活性测定

自烟草中分离获得对南方根结线虫Meloidogyneincognita具有较高杀线活性的拮抗细菌菌株YC-10。研究发现该菌株有伴胞晶体产生,菌体、芽胞形态及生理生化特性与苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种B．thuringiensissubsp．kurstaki相似,16srDNA序列分析表明其与苏云金芽胞杆菌相似性最高,初步确定该菌株为苏云金芽胞杆菌。菌株发酵液及伴胞晶体蛋白对南方根结线虫J2有很强的杀线活性,发酵液处理南方根结线虫,24h线虫死亡率为100％;伴胞晶体蛋白处理南方根结线虫,24h的LC50为5．86μg．mL^-1。研究结果显示该菌株在线虫生物防治上有较大的应用潜力。     

三株产晶体芽孢杆菌的分离及对蚊幼虫的致病性

苏云金杆菌Bacillus thuringiensis早已作为一种微生物杀虫剂广泛地应用。我们从广州地区蚊幼虫孳生地的土壤中分离到三株产晶体的芽孢杆菌,属苏云金杆菌,代号分别为009、18—1、42—2。我们对其对蚊幼虫的致病性作了测定,并对这三个菌株的生理生化及鞭毛抗原特性作了分析,现将结果报道如下。材料与方法 (一)菌种来源 42—2,009,18—1从市郊蚊幼虫孳生地土壤中分离得到,参考菌株来源见表一。     

苏云金素高产菌株的选育

用硫酸二乙酯(DES)处理苏云金杆菌CT-43菌株,得到了菌落形态、菌形和产生褐色素三种类型的突变株。光滑型(S-型)菌落自发突变的比例依亚种的不同而不同,CT-43菌株高达13.0％,苏云金亚种为10.6％,以色列亚种为3.9％,库斯塔克亚种不产生S-型菌落,S-型菌落依DES处理CT-43菌株芽孢时间的延长而增加,处理90分钟达49.0％。除个别S-型菌落外,均不产生苏云金素。诱变产褐色素菌落的频率为1.4％,它们都不产苏云金素。菌形变异株有仅芽孢,仅伴孢晶体,芽孢和伴孢晶体,营养体和芽孢,营养体和伴孢晶体,营养体、芽孢和伴孢晶体发生变异六种类型,它们产生苏云金素的水平各不相同。还获得了苏云金素产量比出发菌株明显提高的二个菌株。     

苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究

利用 1 0L全自动发酵罐对苏云金杆菌小试生产的发酵条件进行了研究。结果显示 ,不同的温度、pH值、培养基成分及接种方式对发酵产量和发酵周期均有影响 ;在培养基配方中存在葡萄糖时 ,葡萄糖单独灭菌对提高苏云金杆菌发酵产量是重要的。初步生物测定显示 ,发酵上清中存在一些杀虫增效因子 ,建议配制苏云金杆菌制剂时尽可能加以利用。     

我国苏云金杆菌液体深层发酵研究十年进展(1990-2000)

综述了我国苏云金杆菌液体深层发酵研究中菌株优选、培养基筛选以及发酵过程调控技术等领域的进展。     

井冈霉素对3种生防芽孢杆菌的生长抑制活性

管碟法测定了井冈霉素对12株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、6株苏云金芽孢杆菌（B．thuringiensis）及3株蜡质芽孢杆菌（Bacillus cereus）的离体抑制活性。结果表明,不同种以及同种不同菌株的芽孢杆菌对井冈霉素的敏感性存在差异,但从总体上看,井冈霉素A对大多数枯草芽孢杆菌的抑制作用较强．而对大多数蜡质芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的抑制活性较低,在1．00×10^5mg／L浓度下仅有轻微的抑制作用。     

苏云金杆菌Tm13—14菌株的生物学和对昆虫的毒性

本文报道从黄粉虫死亡幼虫体中分离到一株苏云金杆菌Tm13-14菌株。经鉴定为BtH_1血清型,晶体型为含有thu(H_1)、K-1(H_3ab)和tol(H_9)晶体抗原的复合型。该菌制剂的毒力测定表明,对鳞翅目、双翅目和鞘翅目的某些昆虫具有毒性。     

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用,结果表明,常用浓度下,2.5%溴氰菊酯乳油、48%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂;4.5%高效氯氰菊酯乳油、2.5%高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威和40%辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响,可与苏云金杆菌制剂现混现用;80%敌敌畏乳油(500倍稀释)对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用,不宜与苏云金杆菌制剂混合使用。     

河北省不同生态区的苏云金杆菌资源调查

在河北省６个生态区共采集土样４６３７个，从中分离获得２４１株苏云金杆菌，平均分出率为５．２％。从苏云金杆菌在河北省６个生态区的分布上分析，南太行山东麓暖温半干旱区苏云金杆菌分出率最高，达９．８％；冀中凉温半干旱区苏云金杆菌种类最多，有５种Ｈ血清型分布。对分离菌株鞭毛血清型鉴定结果表明，河北省有Ｈ１、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ１０及Ｈ１１型的苏云金杆菌分布，其中Ｈ１１型为我国首次分离。通过对２４１株苏云金杆菌的生物测定，筛选出１０余株对玉米螟、棉铃虫和粘虫的高毒力菌株，为我国生产高效的苏云金杆菌杀虫剂提供了重要的菌种资源     

快速筛选苏云金杆菌高毒力菌株的有效方法

对7株苏云金芽孢杆菌菌株进行了cry 1基因检测、晶体形态观察、晶体蛋白SDSPAGE以及杀虫活性检测。结果表明，综合菌株的PCR结果、晶体形态和晶体蛋白图谱结果可以预测其杀虫特性。根据菌株预测的杀虫特性进行有目的的生物测定，可以快速、准确地筛选到对特异害虫具高毒力的菌株。     

苏云金杆菌芽孢与晶体不同配比对亚洲玉米螟的毒效

苏云金杆菌3个变种的芽孢与晶体按重量百分比混合,以亚洲玉米螟1龄和2龄幼虫测定毒力。对1龄幼虫主要致病因素是晶体。对2龄幼虫,“HD—1”以晶体为主;SB—14菌株当芽孢与晶体1:1时,杀虫效果最好;E743—4菌株以芽孢为主。