根瘤菌质粒的研究进展

快生型根瘤菌中普遍存在1到多个数量不等的内源质粒(indigenous plasmid)。其中,含有根瘤菌结瘤和共生固氮所必需的基因的质粒被称之为共生质粒(pSym);其它的质粒被称为非共生质粒(non-pSym)。根瘤菌的内源质粒一般都非常稳定,能够在不同种属的根瘤菌之间和土壤杆菌中进行转移。根瘤菌质粒在转移、复制过程中可能发生重组等现象。本文综述了根瘤菌共生质粒和非共生质粒的功能,以及根瘤菌质粒的转移、复制等特性。     

利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究

为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性，选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌，在药敏试验的基础上，对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明：30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100.00%，对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60.00%-93.33%，多重耐药率为26.67%-80.00%，质粒图谱比较发现：来源相同的菌株质粒图谱相同或相似；来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明：30株大肠杆菌遗传距离在0.224-0.416处聚成五类，其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次，这30株大肠杆菌在遗传距离为0.864处聚成一大类，说明它们之间有一定程度的遗传相关性。     

高黎贡山温泉嗜热菌的分离及生理特征研究

[目的]研究高黎贡山温泉一株嗜热菌的生态特征及营养需求特征,为高温微生物菌种资源研究提供参考。[方法]采集高黎贡山百花岭高山温泉水样,通过富集培养和平板划线分离纯化,得到一批嗜热菌。[结果]从分离得到的嗜热菌中选择其中菌落较大、生长势良好的GLGS3菌株进行研究。经测定,GLGS3菌株培养温度为45～65℃时,菌体生长情况较好,最适温度是50℃;GLGS3菌株的培养pH值为7.5～8.5时,菌体生长情况较好,最适pH值是8.0。该菌株的吲哚试验阴性,能分解葡萄糖产酸、产气。同时还能利用果糖、乳糖、麦芽糖、淀粉等多种糖作为碳源生长,能利用有机氮、硝态氮等氮源。[结论]对高黎贡山百花岭地区温泉样品中嗜热微生物生长习性的研究,有助于了解该地区温泉特定生境下可培养微生物群落类型。     

嗜热菌的筛选及菌种的初步鉴定

从自然堆肥中分离嗜热细菌 ,通过纯化获得 11株 (编号TH1～TH11)能在 6 0℃条件下生长的高温细菌。将所分离菌株接入浓度为 2 0 % (w v)的新鲜奶牛粪水中 ,检测菌株适应性能力。试验结果显示 ,TH9在粪水中生长良好 ,6 0℃培养 36h活菌数达到 6 .4× 10 8CFU ml。经初步鉴定 ,TH9为微杆菌 (Microbacteriumspp .)     

极端嗜热菌Thermotoga hypogea生长条件的研究

以DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen Germany)提供的原始培养基配方为基础，对来源于中非油田井下的极端嗜热菌Thermotoga hypogea sp．nov．(T．h．)的生长及扩菌条件进行了研究。结果表明，葡萄糖和木糖可作为T．h．菌生长的碳水化合物来源；胰蛋白胨和胰蛋白酶均可被T．h．菌利用作为其生长氮源；在T．h．菌的生长过程中，Na2s2O3可被还原为H2S而作为电子受体刺激T．h．菌生长，因此，培养基中若不含硫代硫酸钠时T．h．菌生长非常缓慢；但培养基内若不含原始配方中的氯化钠和醋酸钠时，T．h．菌仍然生长良好。扩菌培养基的最佳pH值为7．0，最佳厌氧培养温度为70℃。     

Ri质粒介导西洋参高效转化体系的建立

由Ri质粒介导对西洋参叶片进行遗传转化,获得西洋参发根,并且对诱导发根的影响因素进行研究,建立了西洋参高效转化体系,为利用生物技术生产和提高西洋参中所含中药成分的研究奠定基础.     

三种质粒DNA对不同大肠杆菌菌株转化率的比较

将重组ＤＮＡ导入细菌细胞是分子克隆的中心工作之一．转化率的高低直接关系到实验成败．使用３种质粒ｐＢＲ３２２、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ和ｐＵＣ１８，对３种大肠杆菌菌株进行转化，比较转化率，推荐使用１００ｍｍｌ／ＬＣａＣｌ２，ｐＨ６～８和４℃１２ｈ作为转化的优选条件。     

猪β2肾上腺素能受体基因克隆及穿梭表达质粒的构建

【目的】利用重组β₂肾上腺素能受体（β₂AR）检测β₂激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β₂ AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β₂AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β₂AR核苷酸序列（AF000134）,设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选后提取克隆质粒并对其作PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析。然后对所获得的基因及编码的氨基酸序列进行在线BLAST分析、系统进化树构建和疏水性分析。为了提高受体蛋白的表达量及受体配体间的亲和力,对该克隆基因作N端截短186个核苷酸改造;为使表达蛋白C端携带6×His标签,对克隆基因C端进行去除终止子改造。将改造后的克隆基因分别插入pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体,连接产物转入NovaBlue感受态细胞,经Amp抗性筛选,挑取单菌落提取质粒并进行鉴定。【结果】经分光光度计检测及琼脂糖凝胶电泳分析,所提猪肝细胞总RNA的纯度、浓度及完整性可满足后续试验要求。RT-PCR产物电泳结果显示,在1 200 bp 左右出现1条特异性条带,与预期结果一致。克隆质粒pMD-18T-β₂AR经鉴定,证实为阳性重组质粒。测序结果显示,所得猪β₂AR基因cDNA序列全长1 257 bp,编码418个氨基酸。该序列已提交至GenBank,登录号为KF023571.1。Compute pI/Mw在线软件预测该蛋白分子质量为46.73 kD。与已发表的猪β₂AR（AF000134）相比,基因序列一致性为99.68%,4处发生碱基突变,编码的氨基酸序列一致性为99.28%,3处发生突变,且配体与受体结合位点处的氨基酸均得到正确克隆。在线BLAST分析表明,猪与其它物种的β₂AR及氨基酸序列一致性均在80%以上,具有较高的同源性。由系统进化树分析可知,所克隆的猪β₂AR与领西猯Pecan tajacu（JN 633666.1）的亲缘性较近,与大仓鼠Tscherskia triton（AY683091.1）和草原田鼠Microtus ochrogaster（XM 005356183.1）的亲缘性较远。氨基酸疏水性分析表明,该受体蛋白N端以疏水性氨基酸为主,C端以亲水性氨基酸为主。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析证明,成功构建重组穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β₂AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β₂AR63-418。【结论】所获克隆基因与已发表猪β₂AR高度一致,且活性位点处的氨基酸均得到正确克隆。此外,pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体适宜用作大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子,是研究目标基因在不同表达系统表达效果的良好材料。本文所构建的穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β₂AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β₂AR63-418均可用于以上3种表达系统中β₂AR蛋白的表达纯化研究。     

降解纤维素嗜热菌的分离及纤维素酶性质分析

从福州永泰温泉分离到1株降解纤维素嗜热菌,通过形态特征和16S rDNA序列鉴定,将其命名为地芽孢杆菌(Geobacillussp.)TC-S8.采用3,5-二硝基水杨酸显色法(DNS法)对菌株TC-S8产胞外纤维素酶的发酵条件及酶性质进行研究.在培养基的初始pH为6.5,温度为60℃,装液量20%,接种量2%,摇床转速为120 r.min-1的条件下培养36 h,菌株TC-S8产酶量达到最大(229 mU.mL-1).其分泌的纤维素酶最适作用温度为60-70℃,最适pH为7.0.纤维素酶降解产物主要为葡萄糖,并有少量纤维二糖.     

三叶草转基因技术研究进展

三叶草作为优良的牧草,具有营养丰富、品质优良、适口性好等特点。随着现代生物技术的发展,转基因技术在三叶草上的应用越来越广泛。主要对国内外三叶草遗传转化体系的建立、品质改良、抗逆性进行综述,以此找出我国在三叶草转基因技术应用方面存在的不足及今后的研究方向。     

玉米褪绿斑驳病毒及传播介体研究进展

玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)是中国重要检疫性病毒之一,该病毒与马铃薯Y病毒属成员复合侵染会造成玉米致死性坏死（CLN）,造成严重的经济损失。由于玉米上马铃薯Y病毒属病毒有广泛适生范围,一旦扩散开来,将对玉米生产构成严重威胁。因此,了解MCMV研究的现状和传播介体具有重要意义。综述了近几年MCMV研究进展和传播介体概况,并结合自身研究,评述了西花蓟马作为MCMV传播介体在CLN中的作用,以期为西花蓟马传播MCMV的基础研究和防控提供理论依据。     

石斛属植物组织培养及遗传转化研究进展

石斛作为一种集药用和观赏于一体的珍稀植物,近年来其组培快繁和基因工程研究取得了比较大的进展.综述了石斛属植物组织培养外植体、培养基、增殖与分化、遗传转化方法、靶材料、选择标记基因和报告基因等方面的研究进展,为石斛的开发和利用提供科学依据.     

蓝猪耳研究进展

由于特殊的花器官结构和开花习性,蓝猪耳成为一种理想的适于进行科学研究的观赏花卉。介绍了蓝猪耳组织培养和遗传转化国内外研究的概况,并详细论述了利用蓝猪耳为材料进行授粉受精机理和花色代谢研究的一些最新成果。     

农杆菌介导的植物遗传转化影响因素研究进展

农杆菌介导的高效遗传转化体系建立的关键是优化T-DNA导入的各因素,优化外植体、菌株、侵染及共培养条件等因素。文中详细阐述了农杆菌介导植物遗传转化的主要影响因素,为实践操作提供了理论依据。     

桃胚培养及遗传转化的研究进展

综述了国内外桃胚培养研究进展;概述了桃遗传转化的现状,提出了目前桃胚培养过程中存在的问题及解决途径,并对今后的工作重点提出了几点建议。     

洋桔梗基因工程研究进展

对近10年来国内外洋桔梗遗传工程方面的研究进展进行了综述,提出了洋桔梗转基因过程中存在的问题,并就其应用前景进行了展望。     

根癌农杆菌介导马铃薯遗传转化的研究进展

植物基因工程是马铃薯遗传改良的重要技术之一。根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化法是目前广泛采用的转基因方法,具有操作简便、低拷贝等优点。该研究综述了根癌农杆菌介导马铃薯遗传转化的分子机制及过程、再生体系、影响因素等,并对进一步的研究做出了展望。     

根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化研究进展

目前,利用根癌农杆菌介导方法获得了许多转基因植株,由于甘薯本身的特性致使部分甘薯的遗传转化受到限制,但在研究过程中可根据不同甘薯品种选择不同的受体、条件,用根癌农杆菌介导的方法也获得了成功。综述了根癌农杆菌介导法的转化机理及影响根癌农杆菌转化甘薯效率的诸多因素,如:植物基因型、转化受体、菌液浓度、选择标记等,以及采用遗传工程技术改良甘薯品种的进展。     

马铃薯离体再生与遗传转化研究进展

探讨了以马铃薯茎段、叶片及块茎为起始外植体不同离体再生体系的建立和相关影响因素,分析了基因型、受体外植体类型、菌液浓度、侵染时间、共培养和预培养等对遗传转化效率的影响,为建立马铃薯高效离体再生体系和遗传转化体系提供理论参考。