大白鼠血清IgG的提纯及其抗血清的制备

经硫酸铵及DEAE纤维素柱层析提纯的大白鼠血清IgG免疫家兔制备兔抗鼠IgG高免血清，双向琼指扩散效价为1：64，免疫电泳出现一条特异性沉淀线。其纯度和含量均符合实验要求。     

鸭血清IgG的提纯方法比较

本文对鸭血清分别采用了硫酸钠法、辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法进行了鸭IgG的提取。提取后的鸭IgG样品用纯度和蛋白含量两个指标来衡量。用辛酸-硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.45mg/ml,纯度能达到用于免疫标记技术的要求,而且操作简单、价格低廉,适于从大批量样品中提纯鸭IgG;用硫酸钠法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.14mg/ml,相对较高,但纯度较低;用硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量、浓度都较低。     

猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备

采用辛酸-硫酸铵法和Sephadex G-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS-PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。     

兔抗鸡IgG荧光抗体的制备及应用

本试验通过提取鸡的免疫球蛋白(IgG),与弗氏完全佐剂按照1:1的比例免疫兔子3次,然后提取兔的IgG并经过异硫氰酸荧光素染色。经检测,制备出的兔抗鸡IgG荧光抗体敏感性高、特异性强,是比较理想的检测试剂。     

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用

为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。     

用桑枝皮提取果胶及制备的纳米纤维素晶须在丝素复合膜中的应用

为高效利用蚕桑资源,以桑叶生产中废弃的桑枝皮为原料,提取果胶并制备纳米级纤维素晶须。研究表明,用0.10mol/L盐酸提取桑枝皮中的果胶,得率最高可达30.1%±1.2%,红外光谱图显示其主要成分为糖醛酸,且不同浓度盐酸处理可提取不同酯化度的果胶;经碱煮后的桑枝皮中的半纤维素和木质素被去除,主要成分为纤维素,再经硫酸水解制备获得长约400 nm、直径约20 nm的纤维素晶须。将桑枝皮纳米纤维素晶须与废弃蚕丝的溶液相混合制备丝素蛋白复合膜,因桑枝皮纤维素晶须与丝素蛋白间具有良好的相容性,故复合膜的强度和弹性模量显著提高,其拉伸强度和杨氏模量分别为35.79MPa和2.10 GPa。初步认为,利用桑枝皮提取果胶和制备纳米纤维素晶须,可以作为提高蚕桑资源利用率与增加桑园产值的途径之一。     

抗猪瘟高免血清抗体的制备与应用

通过对健康淘汰母猪采用猪瘟细胞苗与猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗进行基础免疫和多次强化免疫的方法,制备了抗猪瘟高免血清抗体,并在8个不同规模的猪瘟病例猪场进行了临床应用,治疗606头,其中治愈579头,综合治愈率达到了95.5%。     

应用抗保幼激素SM-Ⅰ诱导二眠蚕生产超细纤度茧丝的试验初报

超细纤度茧丝可用于生产高档丝绸产品和特殊用途丝制品。将三眠蚕品种按常规的饲养方法饲养至2龄起蚕或3龄起蚕后添食不同浓度的抗保幼激素SM-Ⅰ,结果将三眠蚕品种的2龄起蚕或3龄起蚕全部诱导成为二眠蚕。二眠蚕的蚕茧可以缫制出平均纤度为0.7～0.9 dtex的极细蚕丝,最细纤度可达到0.4 dtex,蚕丝的横截面直径小于10μm。初步试验表明,用800 mg/L SM-Ⅰ的给药浓度连续添食2 d为最佳诱导二眠蚕的方法,其诱导率可达100%。     

两种纯化兔抗酸性红73免疫球蛋白G方法的比较研究

分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×10⁵;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×10⁵。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。     

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备、纯化及其特性

用大田软海绵酸与人IgG的偶联物OA-IgG作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过常规细胞融合技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0融合,用间接竞争ELISA方法对融合细胞所分泌抗体的特异性进行筛选。经过3次克隆,获得1株可稳定分泌抗OA的杂交瘤细胞株3C5,其染色体数为50±2,所分泌抗体属IgG1亚类,相对分子质量是159390,抗体亲和常数为9.8×108L/mol,滴度达2.56×106。     

Purification of IgG from serum with caprylic acid and ammonium sulphate precipitation is not superior to ammonium sulphate precipitation alone

Immunoglobulin G (IgG) from bovine serum raised against Aeromonas Salmonicida was purified by ammonium sulphate precipitation (ASP) or caprylic acid treatment followed by ammonium sulphate precipitation (CAAS). Purity of IgG samples prepared by both methods were examined by High Performance Gel Permeation Chromatography, electrophoresis and antibody activity assay. Results suggest that IgG prepared by ASP is better than that obtained by CAAS method in terms of the yield of the IgG monomers and the recovery of the antibody activity.     

肉牛口蹄疫免疫抗体、3ABC抗体、RT-PCR核酸检测结果分析

[目的]为了掌握肉牛口蹄疫免疫抗体检测结果、口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测结果、口蹄疫O-P液RT-PCR核酸检测结果三者的相关性,[方法]张掖市动物疫病预防控制中心对甘州区28头肉牛开展相关检测。[结果]检测结果表明:O型口蹄疫免疫抗体合格率28份,合格率100%,3ABC抗体阳性27份,阳性率96.4%;对3ABC抗体阳性的27头牛分2次进行实时荧光RT-PCR核酸检测,被检的27头牛均为阴性。     

硝酸浓度对火焰-原子吸收光谱法测定牛奶中钙含量的影响

火焰-原子吸收光谱法是《GB 5009.92—2016食品安全国家标准 食品中钙的测定》的第一法,本文通过试验确定硝酸浓度对火焰-原子吸收光谱法测定钙离子具有负干扰的作用。当硝酸浓度<2%时,该作用随着硝酸浓度增大而增大,当硝酸浓度≥2%时,相同钙离子浓度的空白校正信号强度基本不变,因此牛奶样品经过微波消解的前处理,通过调整待测样品的硝酸浓度≥2%,可以有效地消除硝酸浓度对钙离子测定的影响,提高检测结果的准确性,更科学地评价牛奶中钙的含量。     

添加游离不饱和脂肪酸或植物油对瘤胃微生物体外发酵及微晶纤维素降解的影响

用体外静态培养法研究添加游离不饱和脂肪酸混合物(FFAM)和植物油对瘤胃微生物培养液pH值、总挥发性脂肪酸(TVFA)和微晶纤维素降解的影响。采用4×4的2因子试验设计,4种植物油为豆油、棉籽油、菜籽油和亚麻油,每种植物油设置0、5、10和15mg4种添加水平,另外再设置1个5mgFFAM处理。结果显示,5mgFFAM处理组的pH值显著高于其它处理组(P<0.01),TVFA浓度和微晶纤维素粉的消失率显著低于其它处理组(P<0.01),TVFA中丙酸的比例显著高于其它各组(P<0.05)。植物油种类和添加水平对瘤胃微生物发酵及微晶纤维素降解有显著影响(P<0.01)。亚麻油添加量达到10mg,豆油添加量达到15mg后瘤胃pH值开始显著上升,TVFA浓度和微晶纤维素粉消失率显著下降(P<0.05)。在15mg添加水平,按照微晶纤维素粉消失率从小到大的顺序排列,4种植物油处理的顺序为:亚麻油、豆油、棉籽油和菜籽油,与不饱和度顺序一致。     

缓释氢氧化钙和缓释盐酸对家兔营养物质消化吸收的影响

本试验选用体重为(2.0±0.5)kg的家兔为试验动物,分别采用缓释氢氧化钙和缓释盐酸调节家兔的消化吸收,测定其对营养物质消化吸收的影响。结果表明:缓释氢氧化钙能促进营养物质特别是钙和粗蛋白质的消化吸收,其消化率分别从41.0%和65.2%增加到89.8%和93.8%;缓释盐酸对营养物质特别是钙和粗蛋白质的消化吸收不利,其消化率分别从55.5%和84.9%下降为28.4%和68.7%;此外,缓释氢氧化钙的促进消化吸收效果可维持3~4 d。由此可知,缓释氢氧化钙对钙以及蛋白质的消化吸收具有促进作用,而脂肪的消化吸收无论状态如何都具有良好的效果,因此增加脂肪的摄入容易产生营养过剩。然而,服用缓释盐酸会降低营养物质的消化吸收效果。     

Development and Evaluation of an Indirect ELISA for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus IgA in Pig Serum and Milk Captured by Monoclonal Antibody

For the rapid and accurate evaluation of the IgA antibody level of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) in pig serum and milk,a specific PEDV IgG monoclonal antibody (MAb) 8A3 was screened from four strains of PEDV MAb,which could capture all virus particles (inactivated virus cell culture medium) of PEDV efficiently.In this method,the coating concentration of 6.0 μg/mL showed the optimal performance of MAb 8A3,the cut-off value (D_{450 nm}) was settled as 0.34,it had no cross-reactivity with the positive serums of common porcine viruses.Compared with immune-peroxidase monolayer assay (IPMA),the concordance rates of established ELISA for positive and negative serum detection were 98.7% (152/154) and 98.0% (145/148),respectively.For positive and negative samples of colostrum and milk,the concordance rates of the established ELISA compared with IPMA were 100% (60/60) and 95.8% (23/24),respectively.IgA levels in colostrum and milk samples during lactation detected by established ELISA were highly correlated with trends in neutralizing titers (kappa=0.835).Collectively,the indirect ELISA in this study had high sensitivity and specificity,it was a rapid and objective method suitable for large-scale detection of PEDV IgA in clinical samples.     

检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用

本研究旨在建立检测鸡球虫四价弱毒疫苗(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫)抗体应答的酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步阐明鸡免疫四价弱毒疫苗及攻虫后的抗体应答。将300羽岭南黄鸡分为A(免疫攻虫组)、B(不免疫不攻虫组)、C(不免疫攻虫组)共3个组。A组雏鸡在4日龄时进行首免,11日龄时鸡开始二免,二免完成后(17日龄时)对A组及C组的鸡进行攻虫(28万个4种球虫的混合卵囊/羽),7 d后检查A、C两组鸡的存活率。在鸡二免和三免完成后,分别对A、B组进行采血,通过优化最佳抗原包被浓度、酶结合物工作浓度及最佳血清稀释度,建立了ELISA方法来检测鸡体对球虫四价弱毒疫苗的抗体应答情况。A组鸡血清抗体的平均D值为0.870和0.904,明显高于B组鸡的平均D值0.261和0.270,证明了鸡体免疫疫苗后可以刺激产生相应抗体。免疫鸡攻虫后的存活率和抗体应答的检测结果,都充分说明了此鸡球虫弱毒四价疫苗具有良好的免疫原性,所建立的ELISA方法为今后评价鸡球虫弱毒四价疫苗的免疫效力提供了有效手段。