猪圆环病毒2型感染的PCR检测

对山东省日照市某规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征（PMWS）典型症状的病猪,采用针对猪圆环病毒2型（PCV2）开放阅读框2（ORF2）设计的特异性引物进行PCR检测,从病猪的组织样品中检测PCV2。从10头发病猪的组织样品中检测PCV2,结果有7头呈阳性结果。     

猪圆环病毒2型感染的PCR检测

对山东省日照市某规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)典型症状的病猪,采用针对猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框2(ORF2)设计的特异性引物进行PCR检测,从病猪的组织样品中检测PCV2。从10头发病猪的组织样品中检测PCV2,结果有7头呈阳性结果。     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用

根据GenBark中登录的猪圆环病毒2型基因序列,应用PrimerPremier5.0设计筛选一对扩增ORF2基因引物,建立从猪病料中直接检测PCV2感染的PCR方法。扩增PCV2阳性样品出现一条447bp的特异性DNA条带,扩增产物测序结果证实为PCV2ORF2基因序列。应用本方法扩增猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等常见猪病原均未出现特异性条带,表明方法特异;敏感性试验结果表明,样品DNA模板检测浓度可达到9.8×10-4ng/μL;重复性和稳定性试验结果表明,用本试验建立的PCR方法进行PCV2检测,结果稳定可靠。经病猪临床检测应用,在66份病猪样本中,PCV2感染阳性率为27.27%,且多与PRRSV、PRV、HCV、PPV等一种或多种病毒混合感染,混合感染比例达72.22%。     

PCR技术在猪圆环病毒2型检测中的应用

根据猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2基因序列,设计并合成了一对引物,以本室分离鉴定的PCV-2为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PCV-2的PCR方法。应用该方法对PCV-2进行基因扩增,获得长度为559bp的特异性目的DNA片段,而对PRRSV、CSFV、PPV等病毒进行同条件检测,结果均为阴性,无交叉反应;敏感性试验表明,该体系可检测到10．8pg的PCV-2基因组DNA。对2004年-2005年期间送检的81份临床样品进行检测,阳性率为22．2％。表明所建立的PCR技术可用于PCV感染的诊断和流行病学调查。     

猪圆环病毒2型的PCR检测

为了了解猪养殖场猪圆环病毒2型感染的情况,应用建立的猪圆环病毒2型PCR方法,对采自广东省的7个养猪场的样品进行了检测,结果为7个养猪场阳性检出率为100％,其中腹股沟淋巴结、全血、血清的阳性检出率分别为85．71％、72．86％、37．14％。结果表明,7个猪养殖场都存在猪圆环病毒2型的感染,其中腹股沟淋巴结的阳性检出率最高,其次为全血。     

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立

猪圆环病毒3型(PCV3)是一种新的猪圆环病毒,与猪皮炎和肾病综合征、母猪繁殖障碍及心脏和多系统炎症相关。为了建立一种同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3的双重PCR方法,根据GenBank收录的PCV2和PCV3基因序列,分别在PCV2 Cap基因和PCV3 Rep基因高度同源保守区设计并筛选2对特异性引物,经过双重PCR反应条件的优化,建立了同时检测PCV2/3的双重PCR检测方法。本方法可同时扩增出PCV2、PCV3的486,270bp特异性片段,而扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)等病原核酸结果均为阴性;PCV2/3最低检出量分别为139,21.7拷贝/μL。经临床应用表明,本试验建立的双重PCR方法简便、快速,敏感度高,特异性强,为PCV2/3的鉴别诊断和联合检测提供了依据。     

一例猪圆环病毒2型感染的PCR检测

对山东省日照市某规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)典型症状的病猪,采用针对猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框2(ORF2)设计的特异性引物进行PCR检测,从病猪的组织样品中检测PCV2。从10头发病猪的组织样品中检测PCV2,结果有9头呈阳性结果。     

猪圆环病毒2型感染的PCR检测及防治

对规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)典型症状的病猪，采用针对猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框2(ORF2)设计的特异性引物进行PCR检测。从20头发病猪的组织样品中检测PCV2，结果有18头呈阳性结果，检测结果在四川省首次证实了猪圆环病毒2型(PCV2)感染，并提出了相应的综合防治措施。     

PCR快速检测猪圆环病毒2型的方法建立及应用

根据GenBank公布的猪圆环病毒2型保守序列设计了一对引物,建立了检测猪圆环病毒2型的PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究.该PCR方法对猪圆环病毒2型扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对猪圆环病毒2型检测的灵敏性为1pg总DNA量.结果表明,该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪圆环病毒2型的早期确诊和病毒鉴定.     

猪圆环病毒2型和3型双重荧光PCR检测方法建立及应用

猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属,目前基因型分为PCV1、PCV2、PCV3和PCV4.但在临床上,PCV2和PCV3流行较多,且鉴于PCV2和PCV3高度相似的临床特征,因此,建立一种快速、可靠的可同时检测PCV2和PCV3的方法,对PCV的临床诊断和流行病学调查意义深远.本研究利用生物信息学软件,设计2对引物和2...     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其应用

参照国内外已发表的猪圆环病毒2型（PCV-2）的ORF1的基因序列及其相关的PCR检测方法设计一对引物,扩增目的片段为493bp。通过对PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了一种PCV-2的PCR检测方法。应用此方法对临床样品进行了检测,阳性检出率达51.18%。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于PCV-2的检测和流行病学调查等。     

FRRSV和PCV-2双重PCR检测方法的建立及应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(ATCCVR-2332)的ORF7保守序列和猪圆环病毒2型(PCV-2)(AF381175)的ORF2基因保守序列,设计合成了两对特异性引物。用这两对引物,通过优化的PCR条件,对PRRSV阳性毒株反转录后的cDNA模板和PCV-2毒株的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到两条与试验设计相符的432bp(PRRSV)和630bp(PCV-2)特异性条带,建立了同时检测PRRSV和PCV-2的双重PCR方法。并用此方法对在安徽省不同地区所采集的72头份病猪的淋巴结、肺、肝、脾、肾等组织进行检测,证明建立的PCR方法可用于临床诊断。     

用PCR方法检测猪圆环病毒Ⅱ型

建立了一种能特异性地扩增猪圆环病毒 型 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )核酸片段的 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的感染病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的 PCV- 2 DNA片段 ,用限制性内切酶 Eco R 酶切鉴定了 PCR产物的特异性。 PCR产物的核苷酸序列分析表明 ,与已报道的 PCV- 2 (Gen Bank Ac-cession num ber AF0 2 72 17)相关区域的核苷酸序列同源性均大于 96 %。首次证实了我国猪群中存在 PCV- 2感染的PMWS。     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其在临床检测中的应用

选择猪圆环病毒2型(PCV-2)基因保守区设计1对引物P1和P2,扩增536 bp的片段,该方法可以特异地检测出PCV-2的DNA,而对猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒及未接PCV-2的PK-15细胞均呈阴性;该法能检测出29 ng/L的病毒DNA。对扩增片段进行测序,结果表明扩增片段属于PCV-2。应用该方法对2008年度上海及周边地区送检的91份临床样本进行了PCV-2的检测,结果表明,阳性样本为52份,阳性率为57.14%。研究结果表明,建立的PCR方法检测PCV-2具有较好的敏感性和特异性,可用于PCV-2感染疑似病例的诊断及其分子流行病学调查。     

华东地区PMWS患病猪群PCV-2的检测及其基因特征

用 PCR方法 ,对江苏、上海、山东、江西、安徽和浙江等省市 6 5家猪场 99例断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)肺脏和淋巴结病料 ,进行了猪圆环病毒 - 2 (PCV- 2 )基因检测 ,发现其中 18家猪场 2 1例病料为 PCV- 2阳性。源自安徽和上海的 PCV- 2分离株经基因序列分析显示 ,2个分离株部分 ORF2 与国外分离毒株同源性为 92 %～99%。安徽分离株 AHHF6与韩国分离株 KSY- 1同源性为 99% ,而上海分离株 SHHT1与加拿大分离株 Imp.114 7同源性为 98%。上述结果表明 ,我国 PMWS患病猪群广泛存在 PCV- 2 ,不同地区 PCV- 2存在一定基因差异 ,它们可能来源于不同国家或地区     

猪圆环病毒2型继发感染大肠杆菌和副猪嗜血杆菌的诊断

江苏某猪场断奶仔猪发生以体温升高为主要临床特征的传染病,发病率和死亡率均较高。本研究对其送检的病死猪样本进行了病原学检测和病原的分离与鉴定,结果从其内脏样本中检测和分离到多种病原。通过细菌学方法分离到副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,通过病毒学方法分离到猪圆环病毒2型（PCV-2）。通过临床诊断、病理解剖和实验室确诊,综合判断该猪场感染了PCV-2,并继发感染了副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,造成较大损失。     

PCR检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV的混合感染

参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条带。采用建立的PCR方法对江西各地发病猪和死亡猪的133份临床病料进行PCV-2检测,结果总检出率53.38%(71/133)。在71份PCV-2阳性的病料中检测出PRRSV20份,阳性率28.17%(20/71);CSFV9份,阳性率12.68%(9/71);PRRSV和CSFV共同感染9份,阳性率12.68%(9/71)。     

猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的研制与应用

为制备猪圆环病毒2型(porcine circovirus serotype2,PCV-2)高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,通过自制猪圆环病毒2型(PCV-2)灭活苗,免疫SPF产蛋鸡,收集高免蛋,制备PCV-2高免卵黄抗体,对高免卵黄抗体进行无菌检验、活体动物安全性检测,用琼脂扩散方法进行效价检验和人工感染保育猪治疗试验,并将其应用于临床实践,观察其治疗效果。结果抗体效价达到1∶64;人工感染治疗试验治愈率达100%;临床试验治愈率为96%,应用效果良好。     

猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达

猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap.本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定.将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白.根据文献报道,致病性的PCV-2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX-6p-1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段.通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE结果,重组质粒pPRO-Cap和pPRO-Rep以及pGEX-△Cap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%.将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV-2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX-△Cap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV-2感染用候选抗原.     

猪圆环病毒2型感染细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是多种因素调节的细胞主动死亡过程,细胞凋亡的两条主要通路分别是死亡受体介导的凋亡途径和线粒体凋亡途径,但它们共同的凋亡效应物为胱冬酶;理化因素如放射线、紫外线和高温等及生物学因素如基因表达产物、酶和细胞因子等都影响细胞的凋亡。肿瘤坏死因子和胱冬酶在猪圆环病毒2型感染细胞凋亡中起着非常重要的作用;p53诱导环-H2J、un氨基端激酶,NF-κB等均参与细胞凋亡。生产中,可采用猪圆环病毒2型疫苗免疫,干扰RNA的使用和减少应激等措施降低PCV-2感染,抑制细胞凋亡。