华东地区家鸭中N2亚型低致病性禽流感病毒神经氨酸酶基因的重排

为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年～2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析.44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%～99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同源性为96.9%～99.9%,所有H3N2病毒的NA基因同源性为92.3%～99.9%,H5N2、H6N2和H11N2病毒的同种亚型毒株间的NA基因同源性变化幅度较大,相反,有些不同HA亚型毒株间的NA基因同源性反而很高.进一步分析NA基因推导的氨基酸序列也表现出相似的规律.华东地区家鸭中N2亚型的禽流感病毒正处于不断地进化状态中,不同N2亚型的禽流感病毒之间已存在NA基因的重排.     

两株鸭源H1N3亚型流感病毒的分离鉴定和遗传进化分析

从2008年10月至2010年7月,每月定期在华东地区扬州活禽市场采集健康家鸭泄殖腔拭子,并从中分离鉴定了14株H1亚型禽流感病毒。对其中的2株病毒进行全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均属于H1N3低致病性禽流感病毒。各基因遗传进化分析均与类禽猪流感的分离株的亲缘关系相对较近;除血凝素(haemagglutini,HA)基因外,其它所有的基因均发生了不同程度基因重组。其中H5N1病毒参与了多聚酶蛋白PB1与PB2基因的重组,H9N2病毒参与了PA基因的重组。     

H5N1禽流感病毒诱导哺乳动物呼吸道上皮细胞凋亡

近年来,高致病性禽流感病毒H5N1已引起了全世界范围内对全球流感大流行的高度关注,但对流感病毒H5N1的生物学发病机制的研究还存在很大空白。为了阐明禽流感病毒H5N1的发病机制,研究人员准备了12月龄猪肺泡组织上皮细胞,并测定了3株H5型禽流感病毒（A/Crow/Kyoto/53/2004[H5N1],A/Duck/Hong Kong/342/78[H5N2],A/Duck/Hong Kong/820/80[H5N3]）的生长动力学曲线,由此引起细胞病变,尽管所有3株病毒在鸡胚胎成纤维细胞可以引起类似细胞病变,但H5N1型病毒却可强烈诱导猪肺泡上皮细胞（pAEpC）的细胞凋亡。3株病毒在pAEpC内的增长和繁殖有相似之处。与此相反,只有在禽流感病毒H5N1感染的pAEpC细胞内才能检测到TUNEL阳性细胞,并且半光氨酸酶3、8和9的活性在禽流感病毒H5N1感染的pAEpC细胞内均显著升高,在禽流感病毒H5N2和H5N3感染的细胞内没有发现该现象。这些结果表明,只有H5N1型禽流感病毒诱导pAEpC的细胞凋亡。H5N1型禽流感病毒致病性在增加半光氨酸酶抑制剂Z-VAD-FMK后受到抑制;然而在病毒生长或释放子代病毒方面无显著差异。采用反向遗传学技术进一步研究结果表明,H5N1禽流感病毒HA蛋白在感染的pAEpC细胞中对半光氨酸酶依赖的细胞凋亡起着关键作用。H5N1病毒特异性的细胞病变在人类主要呼吸道上皮细胞中也可观察到。综上数据表明,禽流感病毒H5N1由于诱导细胞凋亡而导致哺乳动物呼吸道上皮细胞大量的细胞死亡。     

H5N1禽流感病毒微磁粒捕捉系统和SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

利用禽流感H1N1抗体包被微磁珠制备免疫磁珠,再通过抗原抗体反应得到了含有N1亚型的病毒,然后设计针对H5亚型的特异性引物,同时构建含有H5亚型HA基因部分序列的标准质粒,定量后作为模板,建立了可以检测H5亚型禽流感病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法.结果表明,制备的免疫磁珠可以吸附4个血凝单位的H5N1流感病毒和5个血凝单位的H1N1流感病毒,而对H9N2亚型流感病毒无特异性结合,从而可以富集N1亚型的流感病毒.H5亚型RRT-PCR检测灵敏度可达到4.6拷贝/μL,线性范围达5个数量级;特异性强,与NDV和H1、H9亚型禽流感病毒不发生交叉反应.因此,利用该方法可以很好地检测H5N1禽流感病毒.     

泰国研究表明禽流感病毒正在发生适应人类的突变

高致病性H5N1型禽流感病毒已经蔓延到3大洲的至少45个国家。虽然能够传播,但是,还不能有效的进行人传人。这表明,H5N1病毒还不能完全适应人类这个新的宿主。然而,新的研究揭示,H5N1病毒发生了可能会导致大流行的基因突变。泰国Mahidol大学教授Prasert Auewarakul博士说：“我们分析了来自死亡人病例的H5N1病毒上的血凝素,结果表明,发生了新的可以使禽流感病毒适应人的突变”。Auewarakul博士和他的同事发现,在被称作H5N1禽流感病毒的准种（quasispecies）中,一些突变出现的频率高于其他。     

家鸭可能带来禽流感的新威胁--FAO、OIE和WHO发出联合警报(www.FAO.org)

2004年11月11日，巴黎——家鸭可能是H5N1禽流感病毒(AIV)的隐性储存宿主，因此对病毒传给其他家禽，将还有人类，可能起到重要的新作用，与动物卫生有关的3个国际组织今天发出联合警报。     

一株H5N3亚型禽流感病毒全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

为了解H5N3亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2017年浙江省分离到的一株H5N3亚型禽流感病毒(AIV)[DK/ZJ/S1368/2017(H5N3)]进行了遗传演化分析及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该株病毒的HA蛋白裂解位点处仅含一个碱性氨基酸,属于低致病性AIV。同时,该病毒的血凝素(HA)基因与H5N7亚型流感病毒亲缘关系较近;聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因和核蛋白(NP)基因与H10N7亚型流感病毒亲缘关系较近;碱性聚合酶蛋白1(PB1)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近;酸性聚合酶蛋白(PA)基因与H6N2亚型流感病毒亲缘关系较近;神经氨酸酶(NA)基因与H10N3亚型流感病毒亲缘关系较近;基质蛋白(M)基因与H3N8亚型流感病毒亲缘关系较近;非结构蛋白(NS)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近。表明其基因来源复杂。小鼠感染实验结果显示,该分离株无需提前适应即可以在小鼠肺脏和鼻甲中复制,小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体质量变化不明显,表明该病毒对小鼠呈低致病性。本研究通过对该H5N3亚型AIV的生物学特性的分析,发现该病毒基因来源复杂,无需提前适应就可以在小鼠体内复制,具有感染哺乳动物的潜在威胁,提示应当持续加强对H5N3亚型AIV的监测和相关生物学特性的研究工作。     

禽流感自我防护

H5N1病毒是多年来最具毒性也最致命的禽流感病毒。它是从鸟类传染给人类的第一种H5类型的病毒。如果H5N1病毒变异为可以人传人的形式的话，全球上百万人将因此送命。怎样在禽流感疫情中生存下来？首先，我们要了解更多关于禽流感的科普知识。     

一株野鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005的全基因组克隆和序列分析

应用流感病毒通用引物对盐城珍禽自然保护区野鸭泄殖腔棉拭子分离株禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005（简称Mallard/YC/2005）（H4N6）进行全基因组序列扩增,结合GenBank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明,Mallard/YC/2005（H4N6）HA基因与A/duck/Siberia/1701/1996（H4N6）的核苷酸同源性最高（97.5%）,推导的氨基酸剪切位点序列为PEKASR,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列;神经氨酸酶（NA）、非结构蛋白（NS）均没有氨基酸缺失;基质蛋白2（M2）与宿主特异性有关的位点及碱性聚合酶2（PB2）的627位都是亲禽类细胞的氨基酸;M基因与家鸭分离株A/duck/Yangzhou/02/2005（H8N4）的核苷酸同源性为99.4%,PA基因与家鸭分离株A/duck/Jiangxi/1286/2005（H5N2）的核苷酸同源性达98.9%,说明这2个基因已经在家鸭体内存在并参与了基因重排。     

澳大利亚开发出无危害研究H5N1病毒技术

澳大利亚研究人员近日表示,他们开发出一种解开致命性禽流感病毒H5N1编码的技术。该技术将帮助病毒专家和药物研究人员在研究H5N1病毒某个重要表面蛋白质时,免受被病毒感染的危险。     

连翘水提液体外对禽流感病毒增殖及炎症因子表达的抑制效应

旨在评估连翘体外抗H5N1和H9N2禽流感病毒（avian influenza viruses,AIVs）增殖及其介导炎症的效果,本试验制备了连翘水提液,首先采用CCK-8法测定了连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度,并通过3种处理方法（药液预处理病毒后感染细胞、先感染病毒后给药、先给药后感染病毒）来筛选连翘水提液的最佳给药方式;在最佳给药方式下,使用TCID₅₀法检测禽流感病毒H5N1和H9N2的增殖情况,并采用qRT-PCR检测了炎症相关趋化因子和细胞因子的表达变化。结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的最高安全浓度为4 mg·mL^-1;先感染病毒后给药是最佳的给药方式;在最佳给药方式下,连翘水提液能显著降低H5N1和H9N2 AIVs在各个时间点的病毒滴度,并呈剂量依赖性关系;与对照组相比,H5N1 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、SCYA4、IL1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低,H9N2 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、IFN-β、IL-6和TNF-α的表达也有类似的下降趋势。这表明连翘能够抑制H5N1和H9N2 AIVs在DF-1细胞中的增殖,降低炎症相关细胞因子的表达,有良好的抗炎和抗病毒活性。     

H5N1禽流感病毒核酸多重RT-PCR检测方法的建立

根据禽流感病毒的基质蛋白(M)基因序列和H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因设计并合成了三对特异性引物,用于建立H5N1禽流感病毒核酸的RT-PCR分型鉴定方法。试验证明,建立的多重PCR方法可以将H5N1与H6N2、H9N2有效区分。该方法具有较好的灵敏度和特异性,适合在基层动物防疫和监督部门进行H5N1禽流感病毒核酸的检测。     

北美H7亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立

本研究通过分析NCBI数据库中H7亚型禽流感病毒HA基因序列,根据该基因设计引物,建立了针对北美H7亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,并对反应条件进行了优化。该方法可特异地检出北美H7亚型禽流感病毒HA基因,而未检出欧亚分支H7亚型禽流感病毒H7N2和H7N9、其他亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H5N8和H9N2),以及新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒;检测方法的灵敏度可达0.1 pg/μL。该检测方法的建立为监测北美H7亚型禽流感病毒提供了良好的技术支撑,可用于外来禽流感病毒的检测。     

中国H5N1禽流感疫苗研究取得新突破

<正>据悉,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感基础与防控研究团队的陈化兰研究员等,在英国出版的《生物技术趋势》上发表关于"H5N1禽流感疫苗研究"主编约稿文章。文章详细阐述和论证了H5N1禽流感疫苗研制以及在家禽中应用方面的最新进展。目前,亚洲、欧洲和非洲的60多个国家和地区均已发现H5N1禽流感病毒,为有效控制,许多国家都采用对家禽进行疫苗免疫的策略,尤其是在H5N1禽流感病毒已在家禽和野鸟中呈地方性流行的国家。     

国外畜牧业最新进展信息六则

1 中国学者称,H1N1型禽流感病毒可以产生危险的杂交毒株 研究H9N2型禽流感病毒以及H1N1型猪流感病毒的中方科学家发现,在目前所发现的127种潜在杂交毒株中,有八种比其任何一株原代病毒的致病力都强。     

新型基因芯片检测禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鸡减蛋综合征病毒

建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法.从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针.使用Dr.chip系统进行芯片点样、杂交、显色、读数,优化反应条件后做灵敏度、特异性试验,然后应用于临床检验.结果显示,各病原间无交叉反应,探针可特异性识别靶基因;病原的最低浓度为4.83 pg/μL,灵敏度较高;每个梯度的两个反应结果一致,重复性良好.对临床样品检验,结果同病毒分离鉴定方法一致.本研究建立的基因芯片检测方法可用于禽流感通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及NDV、EDSV的鉴别检测.     

日本发现H5N1和甲型H1N1流感病毒易杂交

<正>2010年8月5日,日本东京大学医学研究所教授河冈义裕领导的研究小组在美国《病毒学杂志》网络版上发表论文指出,H5N1型禽流感病毒具有易和甲型H1N1流感病毒杂交的特性,虽然H5N1型禽流感病毒不容易感染人类,但它与甲型H1N1流感病毒杂交后,有可能诞生传染性更强的新病毒。     

1株重组的H5N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析

本研究对1株H5N2亚型禽流感病毒(CK/GD02/14)进行全基因测序及遗传进化分析,结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点含有多个连续的碱性氨基酸(321PQIEGRRRKR*GLF333),为高致病性禽流感病毒特征。遗传进化分析结果显示,CK/GD02/14与A/chicken/Jiangsu/1001/2013(H5N2)各基因片段都有较高的同源性(97.6%~98.9%)。HA基因位于H5N1亚型遗传进化树的7.2分支,NA基因属于H9N2亚型遗传进化树的BJ/1/94-like分支。其内部基因与1株H9N2亚型病毒的内部基因有较高的同源性,但其M基因属于类H5N1病毒分支,表明该H5N2亚型禽流感病毒为H9N2和H5N1亚型禽流感病毒的重组毒株。结果表明,CK/GD02/14与A/chicken/Jiangsu/1001/2013(H5N2)为同源毒株,可能由江苏传到广东地区。     

六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒M基因全长约1 464～1 465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19-1431位,长度均为1 413bp.6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类.对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失.研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢.     

家鸭禽流感的变化特征及防控对策

通过研究家鸭禽流感的变化发现,近年来鸭感染H5N1亚型高致病性禽流感后,内脏广泛性出血性病变减少,主要出现以神经症状为特征的临床症状和脑炎型病理变化;高致病性禽流感病毒对鸭的致病性呈现减弱趋势,在试验感染鸭体内病毒排毒期延长,隐性感染比较普遍,但部分毒株对鸡仍保持着高致病力,对人可能有致病力,这对人的身体健康构成了潜在的威胁。对此,迫切需要关注和跟踪研究家鸭禽流感的变化特征,对家鸭实行生物安全饲养,开展免疫预防和抗体监测,推行科学消费,阻断病毒向家禽和人的传播。