大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅰ．菌毛抗原及其血凝活性测定

Ｎｏ．１和Ｎｏ．２两株大肠杆菌产生一种新菌毛抗原（暂定名Ｆ１９８７），并有性菌毛形成；菌毛直径３．６３６ｎｍ，性菌毛直径４．２ｎｍ。抗Ｄ－甘露糖血凝试验（ＭＲＨＡ）表明：本菌毛抗原具有独特的血凝谱，能稳定地凝集人（Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ）及貂的红血球，不凝集豚鼠、绵羊、山羊、马、牛、家兔、犬、貉子、小白鼠、鸡、鸽、鹌鹑等动物的红血球，对猪红血球凝集不稳定；血凝作用仅能被相应菌毛因子血清所抑制，不被Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、Ｆ＿４１，及ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛因子血清所抑制。血凝作用存在４℃－３７℃－４℃的凝集－解脱－复凝集现象。用Ｍｉｎｃａ培养基做３７℃培养１８～２４ｈ，可使菌毛抗原良好表达。在玻片凝集反应、反向间接血凝及反向间接血凝抑制试验中，本菌毛抗原与动物中常见的Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、９８７Ｐ、Ｆ＿４１，及人源ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛抗原不存在类属反应。     

大肠杆菌新菌毛抗原的研究：I.菌毛抗原及其血凝活性测定

Ｎｏ．１和Ｎｏ．２两株大肠肝菌产生一种新菌毛抗原（暂定各Ｆ１９８７），并有性菌毛形成；菌毛直径３．６３６ｎｍ，性菌毛直径４．２ｎｍ。抗Ｄ－甘露糖血凝试验（ＭＲＨＡ）表明：本菌毛抗原具有独特的血凝谱、能稳定地凝集人（Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ）及貂的红血球，不凝集豚鼠、绵羊、山羊、马、牛、家兔、犬、貉子、小白鼠、鸽、鹌鹑等动物的红血球，戏猪红血球凝集不稳定；血凝作用仅能被相应菌毛因子血清所抑制，不被Ｋ８８、Ｋ     

大肠杆菌K99菌毛抗原的制备及其免疫抗体效价的测定

肠毒素型大肠杆菌 (Enterotoxigenic E.coli,ETEC)是幼龄动物 (仔猪、犊牛、羔羊等 )腹泻中常见而且重要的致病菌之一 ,此类大肠杆菌能借助于其所产生的菌毛抗原粘附于动物的小肠黏膜上 ,定居并产生肠毒素 ,从而呈现出致病作用。当大肠杆菌 K99菌毛粘附于绵羊红细胞上时 ,能使红细胞发生凝集 ,且不被 D-甘露糖抑制 ,系一种甘露糖低抗血凝反应 (MRHA) ,菌毛的MRHA可被相应的抗体抑制 ,故又可用甘露糖抵抗血凝抑制反应 (MRHI)来对其作出确诊[1] 。目前在各种动物中已发现并展开研究的大肠杆菌菌毛抗原主要有 :K88(F4)、K99(F5)、987…     

大肠杆菌的一种新型菌毛抗原（F1987）

从腹泻死亡貉病例中分离到２株（Ｎｏ１,Ｎｏ２）能产生一种新型菌毛抗原（暂定名：Ｆ１９８７）的大肠杆菌。该新型菌毛在菌体上生长致密、长短不一,直径为３．６３６ｎｍ,同时有性菌毛形成（直径４．２ｎｍ）。该菌毛在Ｍｉｎｃａ培养基上３７℃培养能良好表达,具有能稳定地凝集人及貂红细胞的特定血凝谱,血凝作用可被相应抗血清所抑制。菌毛蛋白质的分子量为１９１００,等电点为３．０,含有天门冬氨酸等１６种氨基酸。用凝集反应、沉淀反应、标记抗体技术等血清学反应能有效地检验该新型菌毛抗原。产生该新型菌毛抗原相应菌株的菌体抗原为Ｏ２３群,能产生肠毒素,人工感染能引起本动物貉发病。     

应用对流免疫电泳技术鉴定肠病原大肠杆菌菌毛抗原

应用对流免疫电泳技术对肠病原大肠杆菌菌毛抗原成分鉴定结果,K_(88)、F_(41)菌毛抗原均出现2条沉淀线,K_(99)和987P 出现1条沉淀线。通过应用 K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)因子血清分别对相应产菌毛抗原标准株的交叉试验及对不产菌毛抗原菌株的对照试验表明,本方法具有特异、敏感、快速等特点,可以在实际工作中用于菌毛抗原成分的鉴定。电泳时采用0.06M 巴比妥缇冲液(pH8.6),孔径及孔间距均为4.0mm.端电压6V/cm,一般电泳3小时即可得到终结果。     

大肠杆菌新菌毛抗原菌株的生物学特性鉴定

两株产生新菌毛抗原(F_(1987))的大肠杆菌的形态特征、理化特性等均为典型反应,呈β型溶血,血清鉴定为O_(23)型,试验建立了该供试菌株的反应模式。本菌株产生肠毒素,无侵袭力,对小鼠有致病力,消化道接种能引起本动物貉发生腹泻,并能从感染的小鼠和貉回收到感染菌.药物敏感性测定结果表明,对氯霉素、卡那霉素、痢特灵等15种药物敏感,对青霉素、链霉素、庆大霉素等14种药物耐药.     

大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较的研究

本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原,并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果,四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ＞Ｓ＞Ｐ,而Ｔ检不出Ｋ９９;对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ＞Ｔ＞Ｐ＞Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果,Ｆ４１纯化后大量上样做电泳时仍有微细的污染带出现,而且氯化镁沉淀后造成Ｆ４１严重损失。Ｋ９９和Ｆ４１纯化前后的各个样品经超声波处理、０．５％脱氧胆酸钠处理和未处理的原液与自家因子血清做琼扩试验以及Ｋ９９和Ｆ４１做交叉琼扩试验,均具有良好的特异性,而且以超声波处理后的样品做琼扩试验效果最佳。     

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅱ．菌毛抗原蛋白质特性测定

用保温法和裂解法可以有效提取Ｆ_(１９８７)新菌毛抗原蛋白质；该菌毛蛋白经区带电泳显示主、次两个组分，在０．０６ｍｏｌ／ＬｐＨ８．６巴比妥缓冲液电泳条件下，均向阳极泳动；免疫电泳显示两条沉淀线；其分子量为１９１００Ｄａ；等电点为３．０；由天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、胱氨酸等１６种氨基酸组成。     

致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F107菌毛抗原的提取及鉴定

将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌107／86菌株在TSB、TSA培养基上传代，使之表达F107菌毛，大量收集菌毛化的细菌，利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带，以染色凝胶为对照，将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下，进行提纯。经免疫印迹反应，证实其条带为F107菌毛蛋白。     

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

采用PCR技术，从大肠杆菌K99中扩增出0．54kb的K99菌毛抗原基因，然后将其克隆到pUCm—T载体上，用Bgl Ⅱ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，通过T4连接酶与同样经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切合成的耐热肠毒素ST Ⅰ核苷酸序列连接，通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析，证明插入的K99-ST Ⅰ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。     

大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较 …

本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原,并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果,四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ〉Ｓ〉Ｐ,而Ｔ检不出Ｋ９９;对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ〉Ｔ〉Ｐ〉Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果,     

大肠杆菌菌毛油乳剂苗的实验研究

利用加热法对一株用牛心琼脂培养的当地产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）进行了宿主特异性菌毛的提取，并用该菌毛制成的油乳剂苗进行了家兔免疫试验。用甘露糖抵抗血凝反应（MRHA）及血凝抑制试验（HI）检测了菌毛的表达效果及抗体含量。结果显示，菌毛的血凝价为1：512，抗体滴度为1：64。     

犊牛腹泻大肠艾希氏菌菌株的鉴定

本文采用玻片凝集反应、酶联免疫吸附测定、琼脂扩散试验对北京农业大学兽医学院分离自犊牛腹泻的3株大肠杆菌进行了鉴定。结果表明:3株均产生F41抗原,其中两株同时还产生K99抗原。用豚鼠、马、绵羊红细胞做甘露糖抗性血凝试验显示,3个菌株均具有F41抗原的血凝特性。     

K99基因探针菌落原位杂交鉴定K99~+毒素源性大肠杆菌

经碱变性酸酚法分离纯化的pMV99重组质粒,用SmaⅠ和BamⅢ消化,琼脂糖凝胶电泳分离,冻融法回收,得到4.2Kb的K99基因片段。该片通过DNA缺口翻译技术标记上α-32p,以此为探针,用菌落原位杂交对K99~+毒素源性大肠杆菌(ETEC)进行鉴定。探针与标准的K99~+ETEC杂交为阳性。从腹泻仔猪和犊牛离到ETEC。玻片凝集和反向间接血凝试验检测为K99抗原阳性。与探针杂交物均为阳性。K99基因探针与携带K88、987P,CFA/Ⅰ、CFA/Ⅱ菌毛的大肠杆菌杂交都呈阴性。以上试验表明,以DNA杂交技术测定K99菌毛抗原,结果可靠,特异性强,适于ETEC菌毛的鉴定。     

用反向间接血凝技术定量艾希氏大肠杆菌“K88”抗原试验

本试验介绍了用反向间接血凝试验定量艾希氏大肠杆菌“K88”抗原的方法;经对已知19株菌株进行抗原测定和反向间接血凝抑制试验,证明反向间接血凝试验是特异性的。用此方法测定已知 K88~+菌株的浅层静止培养及深层通气培养物中的抗原以及纯化浓缩抗原,其血凝滴度有显著差异,说明用反向间接血凝试验能够用作定量“K88”抗原的一种血清学手段。     

禽流感检测方法研究进展

无菌采集病料经处理后接种9-11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性，若为阴性则应继续盲传2—3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HD试验，以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异性核心抗原——核糖蛋白(NP)或基质蛋白(MP)，再用血凝抑制试验     

鸡卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻中的应用

仔猪大肠杆菌性腹泻病的致病过程主要与产肠毒素型大肠杆菌菌毛介导的粘附作用和产肠毒素密切相关，用禽菌毛抗原免疫产蛋母鸡制备卵黄抗体，在初生仔猪和断奶仔猪的人工感染实验中，口服卵黄抗体能降低腹泻程度和仔猪的死亡率；在商业性猪场的实验表明，卵黄抗体能降低提前断奶仔猪的腹泻发生率，并且有利于仔猪的增重，鸡卵黄抗体是仔猪大肠杆菌性腹泻病的一种新的防治方法，本文就国内外鸡卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌腹泻的研究概况作了简要介绍。     

地高辛标记大肠杆菌1型菌毛结构基因核酸探针对鸡大肠杆菌分离株？…

将ＰＣＲ扩增的鸡大肠杆菌１型菌毛蛋白结构基因（ｐｉｌＡ）用地高辛标记成核酸探针与分属２８个血清型的５０个鸡大肠杆菌分离株进行斑点杂交，阳性率达８４％，用甘露糖敏血凝试验（ＭＳＨＡ）检测阳性率为７２％，表明核酸杂交比ＭＳＨＡ法更敏感。     

大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗预防仔猪黄痢试验

仔猪黄痢是由致病性大肠杆菌引起的一种急性传染病,有高的发病率及致死率,对养猪业危害甚大。致病性大肠杆菌的致病因子有三种:热不稳定肠毒素(LT),热稳定肠毒素(ST)及菌毛抗原。菌毛抗原是细菌细胞膜上的伞毛状结构,它们是由蛋白亚基经装配而成,不同的菌株产生不同的菌     

监测和诊断禽流感

常规鉴定禽流感病毒的方法是血凝试验 (HA)，血凝抑制试验 (HI)，琼脂扩散试验 (AGP)以及病毒中和试验 (NT)等。 　　检测采取的病料主要是血液、鸡蛋、肝脏等。 　　琼脂扩散试验可以检测出各种血凝亚型的病毒，但检出率较低，往往检测为阴性的鸡群，并不能保证没有感染禽流感。血凝抑制试验可以用于区别禽流感的血清亚型，且敏感性高，但一种血凝抗原只能检出相应的抗体，而不能查出其他血清亚型抗体。不过一个地区流行的禽流感病毒，其血清亚型在一定时间内是相对稳定的，所以用该地区流行的病毒株抗原做血凝抑制试…