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应用ELISA和AGP检测鸡白血病病毒的比较 总被引:4,自引:2,他引:2
应用ELISA和AGP检测羽随和蛋清中鸡白血病病毒ALV,样品采用同一品系的普通原种鸡群。当用此二种方法同时检测同一种样品中ALV的群特异性抗原时发现,ELISA的阳性率高于AGP,ELISA显示出较高的敏感性。当同时用AGP检测羽髓样品和用ELISA检测蛋清样品来鉴定同一鸡群中潜在的ALV感染母鸡时,结果表明ELISA的阳性率高于AGP,而且有一定比例的AGP阳性鸡用ELISA检测时为阴性,因此 相似文献
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禽白血病是由病毒引起的一种肿瘤性传染病,在自然界中鸡广泛发生的是淋巴细胞性白血病(LL)。本病在世界各地均有发生,感染率高,发病率低,是危害养鸡业的主要疾病之一。我国50年代在甘肃省兰州市发现可疑病例,70年代有14个省市自治区发现此病[1]。随着养鸡业向集约化高密度饲养的转化,80年代,北京市有5个县呈散发流行[2],据抽测某种鸡场禽白血病阳性率高达28.2%。北京市于1985年开始用禽白血病琼脂扩散试验检疫种鸡群,对阳性鸡淘汰处理。1997年至1998年上半年用DAS-ELISA方法对本市2… 相似文献
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利用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)的基本原理,根据蛋清可以直接吸附在硝酸纤维素(NC)膜上的特点,建立了Dot-ELISA检测鸡白血病病毒(ALV)群特异性抗原的方法,并与双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)进行比较,两种方法具有相同的特异性和敏感性。 相似文献
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为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果显示:从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2~3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品(DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪)的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。 相似文献
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3种ELISA试剂盒检测不同亚型外源性鸡白血病病毒的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒(ALV)的简易方法,作者使用A亚型(ALV-A)、C亚型(ALV-C)以及2株J亚型(ALV-J-PY和ALV-J-WS)鸡白血病病毒(ALV)按高、中、低(即100、10、1μL)3种接种量人工接种DF1细胞,在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原(P27)。结果表明,对ALV-A和ALV-J-PY,高剂量接种时,用A试剂盒在接种后第3天即可检测出;低剂量接种时,第7天可检出。使用B试剂盒,2株病毒的检出时间延长(高剂量组分别为第7天和第5天;低剂量组分别为第15天和第13天);使用C试剂盒,所需检出时间最长(接种后第13天)。对ALV-C和ALV-J-WS毒株,A试剂盒对高剂量组,分别能够在接种后第5天和第9天检出,其它中、低接种量组15 d内均没有检出;而B、C2个试剂盒对3个接种剂量组均没有检测出。从以上结果看出,3种ELISA试剂盒对3种亚型ALV毒株的检出时间存在明显不同,A试剂盒灵敏度最高,能最早作出检测;B试剂盒灵敏度次之。同时,无论使用哪种试剂盒ALVs的检出时间与病毒接种量间存在很大的相关性。本研究结果为外源性ALV的检测及病毒分离研究提供一定的科学依据。 相似文献
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单抗ELISA在鸡传染性支气管炎病毒分型中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
用8株抗鸡传染性支气管炎病毒结构蛋白单克隆抗体,以单抗ELISA法检测了澳大利亚不同年代分离的16株IBV。结果表明,系列单抗对IBV分型有一定意义。方法简便特异。 相似文献
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鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24~36h内完成检测并报告结果。 相似文献
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以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒(ALV)重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10%,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验(IFA)有更高的符合率. 相似文献
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J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果 总被引:14,自引:0,他引:14
应用特异性抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV-J抗原和抗体的方法。结果表明,在ALV-JADOL-Hcl感染鸡胚成纤维细胞(CFF)24小时后,可以用1FA检测出阳性细胞,感染72小时后,可以检测出最小病毒感染量≥1.25TCID50/孔。对人工感染ALV-J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明,免疫荧光法可以检测出组织中的ALV-J抗原,表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817-env感染的Sf9细胞作抗原,可以检测出鸡血清中抗ALV-J的特异性抗体。该方法在ALV-J的控制中必将产生重要作用。 相似文献
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本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在家禽体内各个器官的分布。根据ALV-J NX0101毒株基因5 258—5 510bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为253bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验。然后用已建立的方法对人工感染ALV-J的SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将Ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数。试验结果表明:标准曲线线性关系R值均为0.991 4,检测极限约为81拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有ALV-J能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。通过比较数值以得出胸腺ALV-J基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低。自然感染发病鸡各器官ALV-J基因均高于人工感染ALV-J的基因含量。本研究所建立的ALV-J基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病J亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布。这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持。 相似文献
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分别用绿猴肾细胞和鸡胚成纤维细胞殖鸡传染性鼻气管炎病毒NL7784株,提纯抗原建立了检测鸡传染性鼻气管炎病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),试验的最佳反应条件为:抗原最佳稀释度为1:160,酶标抗体为1:1000稀释,待检血清为1:160稀释,包被液为pH9.0的碳酸盐缓冲兴,6%犊牛血清(CS)作封闭液,稀释液用含10%CS的Tween-20磷酸盐缓冲液,洗涤液用含0.5%Tween-20的磷酸盐缓冲液,抗原与抗体的最佳反应时间为30分钟,底物的反应时间为15分钟。与中和试验进行了比较,证明所产方法具有很好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性。 相似文献
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禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定 总被引:11,自引:0,他引:11
用PCR从禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)RAV-1,RAV-2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)分别扩增出1.2kb囊膜基因片段,分别将上述PCR产物的KpnⅠ/SaⅡ酶切片段克隆到质粒pGEM-3zf( )中得到3个重组子即pGEM-3zf-RAV-1env、pGEM-3zf-RAV-2env和pGEM-3zf-Eenv。酶切分析和序列测定结果表明克隆的PCR片段分别来自ALV RAV-1,RAV-2和内源生E亚群病毒,这为病毒囊膜基因gp85的表达及个体鸡遗传抗性的鉴定打下基础。 相似文献
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荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用 总被引:5,自引:0,他引:5
gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102~8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍。组内CV为0.28%~1.45%;组间CV为2.13%~3.84%;对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151)。随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8~98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,鸡群的阳性率为14/14。同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。 相似文献
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禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。 相似文献