利用猪毛PCR—RFLPs方法检测氟烷基因

利用猪毛ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ方法检测“皮枫”长（丹）“长（丹）×皮枫”，“大约克×皮枫”，枫泾，“长（丹）×上”，“皮杜×长上”不同组合１４８头猪的氟烷基因其基因型频率ＮＮ４１头，占２７．７％，Ｎｎ８２头，占５５．４％，ｎｍ２５头，占１６．９％，相关试验表明，氟烷基因杂合子比率高的杂交组合，具有生长速度快，胴体瘦肉率高，肉质良好的优点，此法检测成本低，速度快，准确性高，能检出氟烷基因阴性，阳性或杂合     

PCR-RFLP法快速测定种猪氟烷基因型及其使用优点

从猪毛中提取DNA,用特异性引物进行PCR-RFLP扩增法对沈阳市畜牧兽医研究所种猪场种猪进行氟烷基因检测。结果表明,在测定的长白、大约克、杜洛克种猪中,发现长白猪HaLn基因的基因频率较高,为7.5%、大约克为2.1%、杜洛克为2.0%。所有种猪不含易引起猪应激综合征的氟烷基因隐形纯合子(nn)。用猪毛进行PCR扩增不仅成本低、速度快,且准确性高、取样方便,可大批量地处理样品。从仔猪开始至成年种猪,均可用毛样进行基因诊断,从而有效防止氟烷基因隐形纯合子(nn)的出现,加快种猪的改良步伐。     

基因型为杂合子的氟烷阳性猪检测

对１４７头猪进行了氟烷测验，测得氟烷阳性猪３头，阳性率为２．０４％，运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析法对氟烷阳性猪及其同胞进行了基因型检测。结果４头被测猪中有２头为隐性纯合子，２头为杂合子。结合氟烷测验结果，２头隐性纯合子表现为氟烷阳性，符合一般规律，而２头杂合子中发现１头为氟烷阳性，此前尚未见报道，这一结果又一次证明了氟烷表现与基因型并非完全对应。     

申农Ⅰ号猪氟烷基因的分子检测

采用PCR—RFLPs法检测申农Ⅰ号猪氟烷基因,结果表明：45头申农Ⅰ号猪中具NN氟烷基因型的猪为25头,具Nn基因型的猪为20头,未出现nn基因型。试验结果提示,引入中国地方猪血统能极大地降低加基因型出现的频率,从而改善其肉质。     

D1,SJ系猪氟烷基因的检测及不同基因型产肉性能间的差异

对中瘦肉猪新品系Ｄ１和ＳＪ系３０１头仔猪进行氟烷测验,阳性率为１．３３％。随机抽取氟烷阴性猪头进行基因型检测,有６头为杂合子,由此推知ＮＮ、Ｎｎ和ｎｎ的频率分别为８１．２６％、１７．４１％和１．３３％,Ｎ和ｎ的频率分别为８９．９７％和１０．０３％。     

用聚合酶链反应法鉴别猪的氟烷基因型

猪应激综合症是由常染色体座位上的氟烷基因决定。采用聚合酶链反应扩增一段含有突变位点的氟烷基因片段，经限制性内切酶酶切分析，鉴别出猪的３种氟烷基因型：阳性、阴性和杂合子。     

抗应激杜洛克专门化新品系猪的氟烷基因检测初报

采用PCR -RFLP技术 ,对本单位杜洛克猪选育基础群的氟烷基因型进行了检测 ,结果表明 :在杜洛克猪选育基础群中NN、Nn基因型频率分别为 91 3 0 %、8 70 % ,N、n基因频率分别为 95 65 %、4 3 5 %。检测结果为组群和选育成功抗应激杜洛克专门化新品系奠定了基础     

利用PCR-RFLP技术测定种猪的氟烷基因型

采用 PCR- RFL P方法对 6 1头长白猪、5 6头大约克猪和 30头杜洛克猪进行了氟烷基因型检测。结果表明 :3个品种猪群所含的氟烷应激基因分别为 5 .73% ,0 .89%和 3.33%。建议在四川省种猪选育过程中 ,应将氟烷基因型的检测作为种猪性能测定的内容之一 ,及时淘汰携带氟烷基因的个体 ,确保种猪质量     

利用梯度PCR和降落PCR扩增CIRP基因的比较

提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明：降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也能扩增出产物;梯度PCR法扩增结果不稳定,不但有非特异性条带出现而且不能...     

甘薯中fw2.2同源基因的PCR扩增

fw2.2是影响番茄果实重量的一个重要数量性状基因。通过其氨基酸序列的保守区设计简并引物,然后在甘薯中进行扩增,扩增出的片段大小为500bp。测序并从数据库中找到其对应EST序列,全长为751bp,其中包括5’侧翼序列、3’侧翼序列和全部编码序列,EST序列对应的氨基酸序列共190个氨基酸。甘薯与番茄fw2.2的氨基酸序列具有较高的同源性,达到56.4%,由此推断此基因可能就是甘薯中fw2.2的同源基因。     

利用降落PCR扩增KS基因

通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,降落PCR法较普通PCR法扩增KS基因特异性更高。使用普通Taq酶,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,它可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。     

申农I号猪氟烷基因的分子检测

采用PCR -RFLPs法检测申农Ⅰ号猪氟烷基因 ,结果表明 :45头申农Ⅰ号猪中具NN氟烷基因型的猪为 2 5头 ,具Nn基因型的猪为 2 0头 ,未出现nn基因型。试验结果提示 ,引入中国地方猪血统能极大地降低nn基因型出现的频率 ,从而改善其肉质。     

不同氟烷基因型猪脂肪组织中perilipin基因及糖皮质激素作用相关基因的表达

为研究脂滴包被蛋白(Perilipin)在猪脂肪组织中的表达分布情况及其与糖皮质激素作用的关系,选取氟烷基因隐性纯合子猪(Halnn)和氟烷基因显性纯合子猪(HalNN)为动物模型,采用半定量实时荧光PCR(rqRT-PCR)技术分析其背脂和肾周脂中perilipin基因及脂肪代谢和糖皮质激素作用相关基因的表达。结果显示:两种氟烷基因型猪的体重、背膘厚和背膘指数无显著差异,但Halnn肾周脂重(P=0.09)和肾周脂指数(P=0.10)有低于HalNN猪的趋势。双因子方差分析结果表明Halnn猪脂肪组织中perilipin mRNA水平显著高于HalNN猪(P<0.05),而糖皮质激素受体基因(GR)表达水平显著低于HalNN猪(P<0.05),11β-羟基类固醇脱氢酶1基因(11β-HSD1)、脂肪酸合成酶基因(FAS)和激素敏感酯酶基因(HSL)表达水平在两种基因型之间无显著差异。背脂中perilipin和GR的表达水平与肾周脂中的无显著差异,背脂中11β-HSD1和FAS表达水平显著高于肾周脂(P<0.05),而HSL在背脂中的表达情况正好相反(P<0.05)。以上结果提示:HalNN与Halnn猪脂肪...     

牛CD18编码全基因特异引物设计与PCR扩增

为了获得牛整合素CDl8亚单位编码全基因序列以进行牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)相关研究,采用DNAstar引物设计软件对网上牛CDl8mRNA编码全基因序列及其限制性内切酶酶切位点进行分析,设计一对PCR扩增引物,经PCR扩增条件优化后,获得含有CD18编码全基因序列的2350bpPCR产物。     

嘉兴市凤桥镇猪氟烷基因检测与对PSE肉的影响

2008年9月至2009年4月采用PCR-RFLP技术对浙江省嘉兴市风桥镇主要养殖场61头种猪和1 572头繁殖母猪的氟烷基因进行了检测,统计了浙江中法肉联厂(位于凤桥镇)110 547头商品猪PSE肉发生率,并通过浙江中法肉联厂433份外三元商品猪肉样初步分析了氟烷基因对PSE肉发生率的影响.结果表明:养殖场氟烷基因频率分别为长白种猪0,杜洛克种猪4.17%,大约克夏种猪1.85%,长白×大白母猪6.76%,大白×长白母猪3.41%,长白×嘉兴黑猪母猪0.89%.肉联厂外三元商品猪PSE肉检出率为3.25%,内三元商品猪PSE肉检出率0.57%.商品猪3种氟烷基因型猪的PSE肉发生率为显性纯合子猪2.34%,杂合子猪4.35%,隐性纯合子猪100%.氟烷基因检测结果为风桥镇各养殖场合理利用基因技术改善猪肉品质提供了理论依据,同时试验结果证实氟烷基因是影响PSE猪肉产生的主要因素之一,但并非唯一因素,导入地方猪种血统可以减少PSE肉产生.     

猪氟烷标记基因及基因型频率的品种间比较研究

本研究采集了丹系长白猪55头、雅南猪51头和新荣昌猪50头，共156头猪的血样。测定了红细胞磷酸己糖异构酶（PHI）、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）和血浆后白蛋白-2（PO-2）三个氟烷标记基因位点的基因和基因型频率，分析了位点间的连锁不平衡性。结果表明：6PGD有AA、AB、BB三种表现型；PO2有FF、FS、SS三种表现型；PHI有AA、AB、BB三种表现型，但在雅南猪中仅有AA一种表现型。在基因频率差异上，丹系长白猪与雅南猪在PHI、6PGD、PO2三位点都达到了极显著水平（P＜0．01）；丹系长白猪与新荣昌猪在PHI、6PGD、PO2三位点都达到了显著水平（P＜0．05）；雅南猪与新荣昌猪在PHI、6PGD两位点上达到了极显著水平（P＜0．01），在PO2位点上只达到了显著水平（P＜0．05）。三个品种内的公猪与母猪间在PHI、6PGD、PO2三位点上的基因频率差异都不显著（P＞0．05）。丹系长白猪与新荣昌猪在PHI与6PGD、PHI与PO2、6PGD与PO2以及雅南猪在PO2与6PGD位点间的连锁不平衡系数（D）都达到了极显著水平（P＜0．01）。     

利用PCR进行基因定点突变方法的改进

本研究旨在对利用PCR进行定点突变的方法进行改进。设计1对含突变碱基对的互补引物,以插入目的外源基因的质粒为模板,经过20个循环的PCR扩增出质粒的全长序列之后,用氯仿抽提PCR产物,然后转化感受态细胞TOP10,通过测序验证阳性克隆。利用这种改进的方法可以简单、快速对质粒上的外源基因进行定点突变,降低了构建突变体的成本。