原生质体非对称融合获得胡萝卜( Daucus carota L. ) 种内胞质杂种

 用紫外线辐射处理胡萝卜雄蕊瓣化型不育材料7-0-8 ( 供体) 的原生质体, 与经15 mmol/ L 碘乙酰胺预处理的来源于可育材料66-3 的原生质体( 受体) 电融合, 获得了33 株再生植株。所有再生植株营养体形态特征与受体亲本一致, 染色体数目为18 条, 是二倍体。RAPD 分析表明, 所有再生植株核基因型与受体亲本一致; 线粒体特异性引物- STS4 引物PCR 扩增中, 所有再生植株均得到了与供体亲本一致的谱带, 而与受体亲本不同, 认为33 株再生植株均为胞质杂种。对4 株再生植株进行花期形态学鉴定, 全部为雄蕊瓣化型不育株, 进一步证实获得的为胞质杂种, 雄蕊瓣化型细胞质不育性已由7-0-8 供体转移到受体可育材料66-3 中。     

金属离子对霍山石斛类原球茎增殖及植株再生的影响

 采用单因素浓度试验和正交试验研究了Mg²⁺ 、Ca²⁺ 、Fe²⁺ 、Mn²⁺和Zn²⁺离子对液体培养霍山石斛类原球茎增殖的影响。结果表明, 5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Fe²⁺ >Mn²⁺ >Mg²⁺ >Ca²⁺ > Zn^{2 +} , 促进类原球茎增殖的优化组合为Mg²⁺ 1.5 mmol·L ^-1、Ca²⁺ 4.5 mmol·L ^-1、Fe²⁺ 0.1 mmol·L ^-1、Mn²⁺ 0.5 mmol·L ^-1、Zn²⁺ 0.06 mmol·L ^-1。经优化的液体培养基增殖的类原球茎能保持植株再生能力, 平均每克类原球茎增殖后可再生植株1 985.2株, 是相同时间内对照类原球茎再生植株数的4.2倍。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。     

非对称体细胞融合获得花椰菜与Brassica spinescens的种间杂种

 拟利用非对称原生质体融合技术向芸薹属花椰菜中转移野生抗逆性状。供体Brassica spinescens具有光合效率高, 抗白锈病、蚜虫、黑斑病, 耐盐等优良特性。用经UV处理的供体叶肉原生质体与花椰菜下胚轴原生质体通过聚乙二醇( PEG) 融合, 培养后获得379株再生植株。对其中的120株进行过氧化物同工酶分析和RAPD分子标记检测, 证明有23株为杂种植株。流式细胞仪倍性分析表明, 杂种植株核DNA含量全部高于供、受体亲本核DNA含量总和, 植株倍性在四至八倍之间。还对供体不同UV射线处理的剂量进行了初步探索, 结果表明0.0750 J·cm ^{- 2}为最大辐射剂量。     

‘翠秀’黄瓜子叶原生质体的高效培养及植株再生

 分离纯化的黄瓜子叶原生质体，以5.5×10～5.5×10⁵个/mL的不同密度培养于mKMSp液体培养基中，均获得不同程度的细胞分裂。当培养密度超过1.0×10³个/mL时，原生质体可持续分裂至愈伤组织形成，最高植板率为54%。原生质体来源的愈伤组织经诱导培养产生大量体胚并再生成植株。Ca²⁺ 浓度对黄瓜原生质体的稳定和细胞分裂有重要影响。     

不同浓度NO3- 胁迫下黄瓜幼苗根系分生区细胞内Ca2+分布变化的差异

 以‘新泰密刺’黄瓜为试材, 采用焦锑酸钙沉淀的电镜细胞化学方法, 研究不同浓度NO₃^- 胁迫下黄瓜幼苗根系分生区细胞内Ca²⁺的分布变化, 以期为探讨不同浓度NO₃^- 胁迫下细胞Ca²⁺行为特征与黄瓜对NO₃^- 适应性之间的关系。结果表明, 对照生长条件下(14 mmol·L^-1 NO₃^- ) , 黄瓜根系分生区细胞内Ca²⁺主要出现在细胞膜和小液泡内, 线粒体、细胞质和细胞核及核仁内也有少量的较小颗粒钙沉淀。而其它浓度NO₃^- 胁迫下, 其根系分生区细胞Ca²⁺定位分布变化明显。在56和140 mmol·L ^-1NO₃^- 浓度下, Ca²⁺有向细胞基质分布的趋势, 其细胞间隙、细胞质和线粒体中亦出现大量钙沉淀颗粒。且不同处理浓度下, 线粒体和小液泡数量及结构变化较大。而当NO₃^- 浓度达182 mmol·L ^-1时, 根系分生区各细胞器内钙沉淀颗粒明显减少, 此时Ca²⁺的变化是各细胞器及膜系统遭严重破坏的结果。综上可知, 黄瓜幼苗可通过根系分生区液泡内Ca²⁺向细胞基质分布变化, 来增加对高浓度NO₃^- 胁迫的抗性。     

根癌农杆菌介导Cry1Ac基因转化‘雪青’梨获得转基因植株

 以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体, 经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kan^r芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3 d后, 转入含50 mg·L^-1 Kan的筛选培养基培养30 d, 15 d转接1次。结果表明,在MS + 5 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1 IAA筛选培养基中, Kan^r芽率为34.24% , 在1/2MS + 2 mg·L^-1 IBA+ 0.5 mg·L^-1 6-BA + 500 mg·L^-1AC筛选培养基中, 15.58% Kan^r芽生根。共获得再生植株32株, 经PCR和Southern-blot分析证明, 其中4株的基因组已成功导入和整合Cry1Ac基因。     

胡萝卜新品种‘红参’

 ‘红参’胡萝卜是由完全瓣化型雄性不育系培育的杂交新品种。肉质根长圆柱形, 橙红色,大小均匀, 产量64 500 kg/hm² , 胡萝卜素含量91.3 mg/kg, 叶幅小, 成形早, 抗抽薹, 适合春、秋两季种植。     

酿酒葡萄‘神索’体胚发生及再生体系遗传稳定性分析

 以酿酒葡萄‘神索’未成熟合子胚为外植体, 通过植物生长调节剂、光照、温度等因素的控制, 研究了葡萄体胚的产生、保存及植株再生。结果表明, 以NN为基本培养基, 诱导胚性愈伤组织的适宜植物生长调节剂水平是1.0 mg·L ^{- 1} 2,4-D; 诱导体胚的生长调节剂水平是1.0 mg·L ^-1 NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 体胚诱导率为37.5%; 5℃微光条件, 适宜体胚的保存; 体胚成熟及植株再生的植物生长调节剂水平是0.05 mg·L ^{- 1} NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 成苗率为42.1%。利用流式细胞仪并结合染色体计数对体胚及再生植株细胞核DNA含量及染色体鉴定表明, 体胚细胞染色体存在一定的变异, 而体胚再生植株倍性稳定, 细胞核DNA含量及染色体数与供体母株一致。     

芹菜胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用芹菜胚性细胞悬浮系成功分离得到大量原生质体, 获得芹菜大量原生质体的最佳反应体系为: 酶液组成为3.0%纤维素酶Onozuka R210、1.0%离析酶R210、11%甘露醇、0.5% CaCl₂ ·2H₂O和0.1% MES; 摇床转速为80 r/min, 温度(25 ±2) ℃, 酶解时间5～6 h; 原生质体产量为25.00 ×10⁶ /g, 原生质体活力83.41%。原生质体浅层培养, 培养基为1 /2 MS + 1 mg/L 2, 4-D + 0.5 mg/L KT + 11%甘露醇+ 500 mg/L水解络蛋白, 两天后, 重新再生细胞壁之后进行第1次分裂, 逐步降低渗透压至甘露醇3% ,大约30 d形成小细胞团。小愈伤组织经增殖培养后在1 /2MS + 500 mg/L CH + 0.25 mg/L KT固体分化培养基诱导出不定芽, 30 d后再转入MS基本培养基, 获得完整的再生植株。     

外源钙对苹果果实乙烯生成的影响

 外源Ca2 + 浓度低于350 mmol ·L^-1时, 可促进‘红富士’苹果果实乙烯释放, 在400 ～1 000 mmol·L^-1之间时, 乙烯的释放速率仅为对照的29. 8 %～41 %。分别用高浓度(500 mmol·L^-1) 与低浓度(80 mmol·L^-1) CaCl₂处理果实12 h, 随处理时间延长, 低浓度钙促进乙烯释放量持续增加, 12 h 时乙烯释放量是2 h 时的2. 9 倍, 而高浓度钙抑制乙烯生成的效应比较稳定, 保持在12. 6～14. 4 nL·g^-1。低浓度的Mg²⁺、Mn²⁺也有刺激乙烯生成的作用。Ca²⁺的胞内流动抑制剂La³⁺及CaM的抑制剂TFP (三氟啦嗪) 在80 mmol·L^-1的CaCl₂存在时, 明显抑制乙烯释放。     

辣椒离体植株再生及其变异的SSR检测

采用6个不同基因型辣椒（Capsicum annuum L.）的子叶、下胚轴、去除生长点并带下胚轴和各切去一半的两片子叶、去除生长点并带下胚轴和半片子叶为外植体,分别培养在附加不同激素和 AgNO₃ 的MB₅和MS培养基上,研究不同基因型、外植体、激素配比和AgNO₃等对外植体不定芽诱导和芽伸长的影响。结果表明,不定芽诱导以MB₅+2.0 mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1 IAA+4 mg·L^-1 AgNO₃培养基最佳,诱导率最高可达100 %。而芽伸长的最佳培养基为MB₅+3.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 IAA+5.0 mg·L^-1 AgNO₃+2.0 mg·L^-1 GA₃,最高伸长率可达87.5 %。生根培养基为MS+0.2 mg·L^-1 IAA+0.1 mg·L^-1 NAA,生根率均达100 %。不同的外植体类型具有不同的不定芽诱导和芽伸长的能力,以去除生长点并带下胚轴和各切除一半的两片子叶作外植体时的诱导效果最好。用50对SSR引物检测再生植株,其中86株伏地尖的再生植株和对照植株间均没有扩增出差异条带,而茄门再生植株的SSR检测结果有12对引物表现多样性。     

GA3 和 Ca2+ 对安祖花佛焰苞花青苷含量及花梗 PAL 活性的影响

 以安祖花(Anthurium andraeanum Lind．)为试材，探讨了环境条件对佛焰苞花青苷含量的影响及弱光下Ca²⁺ 、GA₃，处理改善花朵品质的效应。研究结果表明，光照不足是导致花青苷含量下降的主要原因，5.4 mmol·L^-1 的CaCl₂、1.16 mmol·L^-1 的GA₃，单独及复合处理均能有效地提高弱光下安祖花佛焰苞花青苷含量与花梗苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。通过钙调蛋白、RNA及蛋白质等的不同抑制剂处理，发现抑制剂均可抑制安祖花离体花梗CaM含量与PAL活性，讨论了Ca²⁺ 、GA₃的可能作用机理。     

葡萄根系钙处理对叶片镉伤害的保护作用

以巨峰葡萄扦插幼苗为试材,通过根部处理,研究氯化镉（CdCl₂） 处理下,氯化钙（CaCl₂）对叶片的保护作用。结果表明：0.5 mmol·L^-1 CdCl₂处理能够显著增加叶片H₂O₂和MDA（丙二醛）含量以及质膜透性,显著抑制叶片CAT（过氧化氢酶）活性、降低呼吸速率和质膜H⁺-ATPase、Ca²⁺ATPase活性。0.5 mmol·L-1 CaCl2处理显著抑制由CdCl₂引起的叶片MDA和H₂O₂含量以及电解质渗漏率的升高,显著减轻CdCl₂对叶片CAT活性、呼吸速率以及质膜H⁺-ATPase和Ca²⁺-ATPase活性的抑制。这些结果显示,根部应用0.5 mmol·L^-1的CaCl₂能够缓解CdCl₂对葡萄叶片造成的伤害。     

培养基对胡萝卜悬浮系茄红素合成代谢活性的影响

 以胡萝卜品种‘新透心红’稳定的细胞悬浮系为材料, 研究了基本培养基、蔗糖浓度和PO₄^3-浓度对其茄红素合成代谢活性的影响。结果表明, 在B₅ 、MG₅ 、ER 和White 培养基中, MG₅ 培养基最适宜于茄红素合成代谢, 细胞中茄红素含量显著高于其它培养基。以MG₅ 为基本培养基, 在7 个蔗糖浓度处理中, 100.0～120.0 g·L^-1范围内, 细胞中茄红素含量极显著高于其它处理, 茄红素合成代谢活性最高; 在13个PO₄^3-浓度处理中, 30.0～50.0 mmol·L^-1范围内, 细胞中茄红素含量极显著高于其它处理, 茄红素合成效果最佳。     

硝酸钙处理对菊花扦插生根及抗氧化酶活性的影响

以切花菊品种‘万盛’为材料,研究了不同浓度Ca(NO₃)₂处理对菊花扦插生根及其过程中插穗叶片超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性以及膜质过氧化产物丙二醛（MDA）含量的影响。结果表明,60 mg·L^-1 Ca²⁺处理的生根数最多,而且插穗鲜样质量和干样质量也比对照明显增加,而80 mg·L^-1Ca²⁺处理的生根数、插穗鲜样质量和干样质量以及生根率比对照减少。60 mg·L^-1 Ca²⁺处理的SOD、POD、CAT和APX活性与其它处理相比显著增加,MDA含量明显减少。以上结果表明,在菊花扦插过程中,采用适当浓度的Ca2+处理可以提高插穗叶片SOD、POD、CAT和APX等保护酶的活性和降低MDA含量,从而促进菊花扦插生根,并提高扦插苗品质。     

大白菜、青花菜和叶用芥菜体细胞杂交种形态学与细胞学特性鉴定

 为拓宽十字花科蔬菜育种种质资源,以大白菜（Brassica campestris L. ssp. pekinensis）、青花菜（B. oleracea L. var. varitalica）和叶用芥菜（B. juncea L. Czern）的子叶、下胚轴为材料,分离、纯化原生质体,采用40% 聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）融合法进行原生质体融合。融合细胞在附加0.2 mg · L^-1 2,4-D + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.1 mg · L^-1 NAA + 0.1 mg · L^-1 激动素（kinetin）的改良K8p培养基中液体培养,当细胞分裂至8 ~ 10细胞期时,将分裂的细胞包埋于0.15%琼脂糖,然后在添加0.3 mol · L^-1蔗糖和2 mg · L^-1 6-BA + 2 mg · L^-1 玉米素（zeatin）+ 1 mg · L^-1 NAA + 0.5 mg · L^-1 kinetin的Kao培养基中诱导愈伤组织。将培养获得的936个愈伤组织转到3种不定芽诱导培养基MS + 5 mg ? L-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 2 mg · L^-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 NAA上诱导芽分化,当芽长3 cm左右时,转到1/2 MS + 0.2 mg · L^-1 NAA的生根培养基上诱导生根,共获得了96株再生植株,对其进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。形态学观察显示再生植株表型变化大,包括3个亲本的中间型或两个亲本的中间型;PCR技术鉴定结果显示96株杂种植株中93株为细胞质雄性不育特性;染色体计数显示,再生的植株染色体数变化范围广（2n = 38 ~ 64）,但未发现染色体数总和与3种融合亲本染色体数总数（2n = 74）相一致的个体。基因组原位杂交（Genomic in situ hybridization,GISH）和扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism,AFLP）分析结果表明,再生植株基因组中分别检测出大白菜、青花菜、叶用芥菜的DNA片段,证实了大白菜、青花菜、叶用芥菜种间体细胞杂交种的真实性。     

瓜叶菊耐热无性系离体筛选初步研究

以编号为B₁ 、N₁ 、Z₁的瓜叶菊增殖期的愈伤组织和丛生芽为材料,用高温胁迫和羟脯氨酸 (HYP)分别作为直接和间接选择压,进行了瓜叶菊耐热无性系的离体筛选研究。结果表明：⑴ 离体直接筛选的适宜选择压为40℃16-20 h,HYP)间接筛选的适宜浓度为30m mmol·L-¹;⑵ 经过直接选择、HYP与高温胁迫结合多次筛选获得了Z_1-1-1和 N_1-2-1 两个耐热无性系;⑶ Z_1-1-1 与对照母株Z1在叶片厚度、气孔指数、栅栏组织厚度/海绵组织厚度(TPT/TST)方面存在显著差异,成年植株Z1-1-1 和Z1在花的育性上也差异明显,Z₁结实率85%以上,而Z_1-1-1在人工授粉的情况下结实率也仅1.0%;N_1-2-1和其对照母株N1在形态和花的育性上没有明显差别;⑷ 在40℃24 h胁迫后,Z_1-1-1和 N_1-2-1的热害指数、细胞丙二醛含量、电解质伤害性外漏率都低于其对照母株,而POD、SOD活性明显高于其对照母株。