伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及肠道内环境的影响

90只清洁级昆明系小鼠,随机分为5组,预饲基础日粮一周后,各组分别灌胃:生理盐水(对照组,CK)、伴大豆球蛋白液(Ⅰ)、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液(Ⅱ)、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液提纯B组分(Ⅲ)、伴大豆球蛋白盐酸水解液(Ⅳ),除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等,实验期21 d.结果显示:与对照组相比,第3周Ⅱ组和Ⅲ组每只小鼠日均采食量较对照组显著下降,分别降低8.75%(P＜0.05)和9.28%(P＜0.05);Ⅲ组小鼠胸腺相对质量极显著下降,降低了10.40%(P＜0.01),肠黏膜sIgA水平提高45.49%(P＜0.01),大肠食糜中6-磷酸果糖酮糖酶(F6PPK)活性极显著提高(P＜0.01),pH值下降了1.80%(P＜0.05),肠球菌数显著下降(P＜0.05).实验结果表明水解肽作为腔内信号分子可能与肠道内相关因素有着多层次调控关系,共同促进宿主的健康.     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对大鼠肠道细菌区系变化的影响

 【目的】在分子水平上探讨伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌生长的影响。【方法】选取21日龄健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为4个处理,每个处理3只,基础日粮预饲一周后,分别灌胃生理盐水（对照组）、伴大豆球蛋白液（Conglycinin组）、伴大豆球蛋白酶水解肽P2组分（P2-PTC组）、伴大豆球蛋白盐酸彻底水解液（HCl-FHC组）,各0.5 ml,1次/天。除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等（折合蛋白含量为0.5 mg?ml-1）,实验共21 d。应用PCR-DGGE技术分析灌胃伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠粪样细菌区系变化的影响,并采用连续稀释PCR的方法半定量研究伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠肠道双歧杆菌数量的影响。【结果】灌胃伴大豆球蛋白酶解肽的大鼠在实验后第1周,其粪样微生物区系变化迅速,而后缓慢,最终形成稳定的体系,提示酶解肽在一定程度上影响了肠道细菌的组成,与对照组和蛋白盐酸彻底水解液组比较,肠道双歧杆菌数量明显增加。【结论】本试验在分子水平证明了伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌的生长有促进作用。     

伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗沙门氏菌感染的作用

选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV组)和水解肽分离有效抑菌组分组(基础日粮+水解肽分离有效抑菌组分,V组)。预饲3 d后,除I组和II组外,其他各处理组灌喂液体总含氮量为10mg/mL,每只小鼠灌喂量均为0.5 mL。连续灌胃10 d后,于第11天将108CFU/mL的沙门氏菌分别灌喂除正常对照组的其他各组(剂量均为0.5 mL/只),24 h后采用摘除眼球法收集血液后,宰杀各组小鼠,取脾脏、肠黏膜,分析血清和脾脏中TNF-α、IL-6和肠黏膜组织中sIgA的变化。结果表明在小鼠发生沙门氏菌感染时,伴大豆球蛋白水解肽以及水解肽分离有效抑菌组分能显著降低小鼠血清TNF-α水平(P<0.05)和脾脏IL-6水平(P<0.01),提高脾脏TNF-α和肠道黏膜sIgA水平(P<0.01)。说明伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。     

大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的研究进展

大豆是一种高蛋白含量的作物,在畜禽养殖中多用作蛋白质原料。但其抗营养因子限制了大豆的使用,其中大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白又是主要的抗原蛋白。文章主要综述了大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的结构、抗营养作用和抗原性的消除方法。     

大豆肽对小鼠免疫功能的影响

研究了大豆肽对小鼠免疫器官和免疫功能的影响。将120只小鼠随机分成4组,对照组饲喂基础日粮,3个试验组分别在基础日粮中添加1%、2%、4%的自制大豆肽,饲喂小鼠21 d后,以免疫器官指数、血清溶菌酶、巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素为指标进行免疫功能的测定。结果表明,日粮中添加大豆肽可显著提高小鼠免疫器官指数,增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,激发小鼠抗鸡红细胞抗体的产生,而血清溶菌酶酶活则无明显差异,说明芽孢杆菌y-6发酵制备的大豆肽具有一定的免疫调节作用。     

滹沱河沿岸野生大豆种子β-伴大豆球蛋白表型的多样性

山西省原平市境内滹沱河沿岸分布有大量野生大豆。野生大豆种子蛋白质类型丰富,是重要的蛋白质资源。大豆种子蛋白质主要包括β-伴大豆球蛋白(7S球蛋白)和11S球蛋白,其中,β-伴大豆球蛋白主要由76 k D的α′,72 k D的α和52~54 k D的β亚基组成。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,筛选400份滹沱河沿岸野生大豆种质,发掘出5种关于β-伴大豆球蛋白的系列表型:对照型、α′亚基分子量偏高型、α′亚基分子量偏低型、β亚基上位缺失型、β亚基缺失型。结果表明,滹沱河沿岸野生大豆种子β-伴大豆球蛋白性状的多样性,揭示出野生大豆种子β-伴大豆球蛋白具有复杂的分子构成和遗传机制。     

β-伴大豆球蛋白对IPEC-J2细胞损伤的作用机制研究

【目的】研究β-伴大豆球蛋白通过核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对猪肠上皮细胞（IPEC-J2）造成损伤的差异,为探索β-伴大豆球蛋白引发仔猪肠道黏膜损伤的分子机制提供理论依据。【方法】采用β-伴大豆球蛋白体外诱导IPEC-J2损伤,试验设对照组T0（猪肠上皮细胞不做处理）,试验组T1（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白）、T2（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷（PDTC））、T3（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME））、T4（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L JNK抑制剂SP600125）和T5（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L p38抑制剂SB202190）,处理24 h后观察细胞结构,测定各组细胞活性及细胞因子NO、TNF-α、IL-10、IFN-γ含量,细胞损伤相关基因NF-κB p65、iNOS、JNK、p38及其编码蛋白的表达水平。【结果】在IPEC-J2中加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白24 h后,细胞数量减少,线粒体改变,染色质边集,细胞活性显著下降（P<0.05）,NO、TNF-α、IFN-γ含量均极显著增加（P<0.01）,而IL-10含量极显著减少（P<0.01）,NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA表达水平极显著升高（P<0.01）,NF-κB、iNOS、JNK、p38蛋白表达量极显著上升（P<0.01）;加入抑制剂后,细胞活性显著提高（P<0.05）,细胞结构趋于完整和规则,IL-10含量极显著增加（P<0.01）,而NO、TNF-α、IFN-γ含量极显著减少（P<0.01）,NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA及其编码蛋白表达受到抑制。其中T2组细胞活性显著高于T3、T4、T5组（P<0.05）,细胞数量、形态和完整性最接近对照组细胞。【结论】β-伴大豆球蛋白主要通过NF-κB/iNOS信号通路对IPEC-J2造成损伤,PDTC对这种损伤作用的抑制效果最好。     

β-伴大豆球蛋白α′-亚基的基因克隆及原核表达

为制备N-连接糖基缺失的重组β-伴大豆球蛋白α′-亚基,以‘鲁96150’大豆种子为原料提取总RNA,经RT-PCR一步法获得‘鲁96150’大豆的全长cDNA,采用自行设计的引物F1/F2扩增得到目的基因α′,与pGEM-T easy载体相连构建重组克隆载体pGEM-α′,经XhoⅠ/EcoRⅠ双酶切得到目的基因与载体pET-28a连接构建重组原核表达载体pET-28a-α′,将经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确的表达载体转入感受态细胞E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白α′-亚基。对重组α′-亚基的诱导表达条件进行筛选,发现在菌液OD600值为0.8、诱导温度30℃、IPTG浓度为0.2mmol/L的诱导条件下诱导9h后α′-亚基的表达量较高,重组α′-亚基的分子质量大小约为70ku;工程菌pET-28a-α′-BL21经超声破碎、离心后发现重组α′-亚基部分存在于上清液中,部分形成包涵体蛋白。重组α′-亚基的克隆及表达为β-伴大豆球蛋白结构及功能特性的研究奠定基础。     

林蛙油活性肽对小鼠免疫功能的影响

以林蛙油蛋白双酶水解超滤后获得的2种不同分子质量区间的活性肽BPOR1及BPOR2为试验原料,体外通过脾淋巴细胞增殖试验,分别加入不同剂量的BPOR1、BPOR2和Con A诱导,观察淋巴细胞的增殖情况,体内通过灌胃不同剂量BPOR1及BPOR2(100、300、600 mg·kg-1·d-1)30 d,以脾脏指数和胸腺指数的变化来观察2种活性肽对小鼠免疫器官的影响,利用流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群的变化情况。结果表明:BPOR1可明显地促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且具有对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖的协同刺激作用。2种混合肽对小鼠脾脏指数和胸腺指数比均有影响,并且都能影响小鼠CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的分布。可见,林蛙油活性肽能增加小鼠的免疫能力,且BPOR1的作用效果比BPOR2明显。     

复合有机酸对大肠杆菌攻毒小鼠免疫功能及肠道菌群的影响

【目的】旨在探究饲粮中添加复合有机酸对大肠杆菌攻毒小鼠生长、免疫功能及肠道菌群的影响。【方法】选取7周龄健康雌性昆明小鼠90只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复3只小鼠。对照组（CON组）和大肠杆菌组（ETEC组）饲喂基础饲粮,3个有机酸化剂组（OA组）分别饲喂在基础饲粮中添加1.5%,3.0%,6.0%复合有机酸的试验饲粮。试验第15天,对照组小鼠腹腔注射PBS溶液,其余4组小鼠均腹腔注射大肠杆菌培养液（2×108CFU/mL）,试验期为21 d。【结果】（1）攻毒后,饲料中添加有机酸对小鼠的心脏、肝脏和脾脏等器官指数无显著影响（P>0.05）。（2）与CON组相比,ETEC组小鼠血清中炎症相关因子（TNF-α、IL-6、D-LA和DAO）水平升高（P<0.05）,空肠组织中炎症相关基因（IL-6、TNF-α、MyD88和MCP-1）mRNA表达升高（P<0.05）,添加1.5%有机酸可显著降低血清炎性因子含量并下调炎症相关基因mRNA表达量（P<0.05）。（3）与CON组相比,ETEC组小鼠空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著降低（P<0.05）...     

生物活性肽调节断奶仔猪肠道健康

断奶是养猪业中最具挑战性的阶段,对仔猪生长性能及之后的发育有着重要的影响。断奶对仔猪的肠道发育和健康带来了极大的挑战,可能会导致采食量减少、生长速率降低、发病率和死亡率增加。采取有效的营养策略可改善仔猪肠道健康和最大限度地提高断奶仔猪的产量。本文综述了生物活性肽通过仔猪肠道免疫、肠道微生物稳态及肠-脑轴的调节仔猪肠道健康,为加深生物活性肽的开发和利用提供参考。     

基于微生物16SrRNA测序技术对ICR小鼠传代后肠道菌群变化的分析

为探讨不同代次雄性ICR小鼠生长发育与其肠道微生物的关系,本研究通过对16SrRNA基因V3~V4区测序,分析F0到F3代雄性ICR小鼠肠道菌群多样性和菌种组成。结果显示:1)从F0到F3代,组间微生物的Alpha多样性中的Chao1指数,Observed-species指数和香侬指数(Shannon)指数随代次积累显著降低(P<0.05),Simpson指数无显著差异(P>0.05)。2)从F0到F3代的优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)(F0、F1、F2和F3丰度分别为83.3%、79.0%、81.8%和90.3%)和拟杆菌门(Bacteroides)(F0、F1、F2和F3丰度分别为6.0%、5.1%、4.0%和3.2%)。3)F0,F1和F2代三组的优势菌属均为乳酸菌属(Lactobacillus)(F0、F1和F2丰度分别为83.1%、62.8%和38.2%),但F3代的一些未确认分类的菌属占比较高,丰度约为45.3%;从F0到F3代在属水平上微生物组成上存在显著差异(P<0.05),各组的乳酸菌属丰度随代次的积累显著降低(P<0.05)。4)对差异菌属进行了KEGG差异代谢通路预测,发现乙醛酸盐代谢、胰岛素信号通路、苯丙氨酸,色氨酸和酪氨酸生物合成途径,萜类化合物生物合成途径,肽聚糖生物合成和糖酵解糖异生作用在F3代中显著降低,表明F3代氨基酸合成、糖类代谢等多条基础代谢通路受损。综上,本研究基于微生物16SrRNA测序技术对ICR小鼠传代后肠道菌群变化进行了一系列分析和功能预测,发现微生物多样性发生改变,F0至F2代优势菌门未发生明显变化,但在F3代出现了较多的为确认分类菌属,并且在属水平上各组的乳酸菌属丰度随代次的积累显著降低,F3代氨基酸合成、糖类代谢等多条基础代谢通路受到影响。本研究有助于从肠道微生物与宿主间的相互作用角度解释ICR雄性小鼠传代后出现的体重偏低等现象产生的原因。     

面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响

选用 5 0只SD大鼠 ,分为试验组和对照组 ,每组 2 5只 ,试验组用经氯化钠缓冲液洗涤法制备的面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物灌喂 ,对照组灌喂未经酶解的面筋蛋白 ,连续灌喂 2 1d。实验结果显示 :与对照组相比较 ,大鼠胸腺和脾脏相对重量分别上升了 2 0 % (P <0 0 1)和 2 9% (P <0 0 1) ;腹腔巨噬细胞吞噬活性上升了 12 % (P >0 0 5 ) ;淋巴细胞转化实验中刺激指数 (SI)提高了 33 0 % (P <0 0 5 ) ;血清NDV (新城疫病毒 )抗体血凝抑制效价 (HI)上升了 38 5 % (P<0 0 1) ;肠腔sIgA水平提高了 2 8 6 % (P <0 0 5 ) ;血清IL 2水平上升了 38 4 % (P <0 0 1) ;血清瘦素、胰岛素、T3 和T4水平均无显著变化。实验结果提示 :灌喂面筋蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强机体免疫功能 ,并且这种免疫增强作用与细胞因子的调理有较为密切的联系。     

绿豆活性肽对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用

【目的】研究绿豆活性肽对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用,为绿豆资源的综合利用提供参考。【方法】建立H22鼠肝癌荷瘤小鼠模型,研究不同剂量(400,800和1 600mg/kg)绿豆活性肽对小鼠H22移植性肿瘤的抑制作用及对胸腺、脾脏指数和血液生化指标的影响;采用ELISA测定瘤组织TE端粒酶活性以及Bcl-2、Bax的表达量,初步探究绿豆活性肽的作用机制。【结果】绿豆活性肽对荷瘤小鼠H22肿瘤的生长有明显的抑制作用,给药剂量为1 600mg/kg时抑制率达32.6%;绿豆活性肽能增大荷瘤小鼠胸腺指数和脾脏指数,升高血液中白细胞水平,降低血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酸和碱性磷酸酶水平;能显著抑制TE端粒酶活性,减弱Bcl-2表达而增强Bax的表达。【结论】绿豆活性肽对H22荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,且无毒副作用,这可能是通过调节免疫功能、抑制TE端粒酶活性、促进肿瘤细胞Bax表达以及抑制Bcl-2表达而实现的。     

海洋生物活性肽的生理功能及其应用研究进展

海洋生物活性肽因具有众多的生理功能而成为近年来研究的热点.主要介绍了海洋生物活性肽的抗氧化性、抗高血压、抗菌性及增强骨强度和预防骨质疏松等生理活性以及在医药、食品和养殖等行业的应用,为进一步开展海洋生物活性肽的研究提供参考.     

牛磺酸对断奶小鼠小肠发育的影响

为研究牛磺酸对断奶小鼠小肠结构和功能的影响,采用单因子设计,48只体重为(12±2)g的昆明小鼠随机分为6组,每组8只,雌雄各半,分为对照组和试验组,对照组饮用普通自来水,试验组在饮水中添加2.5、5.0、10.0、20.0和40.0g/L牛磺酸,试验期31d。观察牛磺酸对小肠和肝脏重量,空肠绒毛形态、细胞凋亡、小肠核酸和蛋白质含量,以及血清指标的影响。结果表明:1)饮水中添加牛磺酸可显著提高小鼠小肠绝对重量和相对重量(P0.05),且呈现二次曲线关系(PQ0.05);可线性提高小肠绝对长度、肝脏绝对重量和相对重量(PL0.05)。2)2.5、5.0和10.0g/L组与对照组相比,显著降低空肠肠腺(肠隐窝)深度(P0.05);回肠Prot/DNA随牛磺酸添加量提高而线性提高(PL0.05)。3)与对照组比较,5.0g/L添加组的细胞凋亡指数显著降低(P0.05),但40g/L添加组有升高的趋势。4)随着牛磺酸添加量的提高,回肠MDA含量有降低的趋势(P=0.07),空肠GSHPx呈现先升高再降低的二次曲线关系(PQ0.05),但不影响血清IGF-I水平。研究结果表明,饮水添加中低浓度的牛磺酸可提高小鼠小肠长度和重量,降低肠隐窝深度,减少细胞凋亡。     

芪苓制剂多糖对免疫损伤小鼠免疫调节作用的影响

将75只体重为18-22 g的雄性昆明小鼠随机均分为5组:芪苓制剂多糖低、中、高剂量组及空白对照组和环磷酰胺(CY)组.芪苓制剂多糖的3个剂量组小鼠分别灌服低(200 mg.kg-1)、中(400 mg.kg-1)、高(600 mg.kg-1)剂量的芪苓制剂多糖,空白对照组和CY组分别灌服等量的蒸馏水,每天1次,连续19 d.第20天,空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余4组均腹腔注射100 mg.kg-1CY,24 h后,各组小鼠摘眼球采血,检测小鼠血清免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)含量、补体(C3、C4)含量和溶菌酶活性,并测定胸腺指数和脾脏指数.结果表明:与CY组相比,芪苓制剂多糖高剂量组小鼠血清IgG含量极显著升高(P0.01);芪苓制剂多糖3个剂量组血清IgM、IgA含量均极显著升高(P0.01),C3含量显著或极显著升高(P0.05或P0.01);芪苓制剂多糖中、高剂量组小鼠的胸腺、脾脏指数显著或极显著升高(P0.05或P0.01).可见,芪苓制剂多糖能在一定程度上对抗CY所致的免疫损伤.     

9种中药成分对小鼠免疫细胞活性的影响

测定了淫羊藿多糖、黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、板蓝根多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、人参皂甙和黄芪皂甙9种中药成分对小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞和脾脏NK细胞活性以及抗体生成细胞数量的影响。结果表明，黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、板蓝根多糖、蜂胶黄酮、人参皂甙均能显著或极显著促进ConA(刀豆蛋白A)和LPS(脂多糖)诱导的小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖，黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮和人参皂甙均能极显著或显著提高小鼠腹腔巨噬细胞和NK细胞活性，黄芪多糖、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、人参皂甙和淫羊藿多糖、黄芪皂甙极显著或显著增加小鼠的抗体生成细胞数。结果表明，9种中药成分对小鼠免疫细胞具有不同的刺激能力，这种刺激能力可以作为筛选免疫增强剂的指标。     

4种合成活性肽对小鼠生长性能和免疫机能的影响

本试验选用4种合成生物活性肽(肽1、肽2、肽3、肽4分别由15、7、9、7个氨基酸构成,采用固相合成柱手工合成的直链肽)对小鼠进行灌喂饲养试验,旨在探讨其对小鼠的生长性能、免疫机能和器官发育的影响.选取清洁级健康小鼠90只,随机分为9组,每组10只,试验组分别连续灌喂10 μg/kg体重和50 μg/kg体重剂量的4种活性肽,空白对照组灌喂等量蒸馏水.试验期32 d.结果表明:(1)灌喂活性肽15 d和32 d,小鼠体重、平均日耗料量各试验组之间及与对照组间差异均不显著(P>0.05).(2)小鼠灌喂活性肽15 d,50 μg/kg体重肽3能显著提高小鼠血清IgG和IFN-γ含量(P<0.05).(3)小鼠灌喂活性肽15 d,50 μg/kg体重肽1组小鼠肝脏系数显著高于10 μg/kg体重肽1组(P<0.05),其余各组之间无显著差异(P>0.05);心脏、脾脏和肾脏系数各组之间差异均不显著(P>0.05).小鼠灌喂活性肽32 d时,50 μg/kg体重活性肽2、肽3、肽4对小鼠心脏、肝脏和肾脏系数有显著提高作用.综上可见,4种人工合成生物活性肽对小鼠生长性能未见明显影响,对免疫机能和脏器系数有一定的促进作用.