Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。     

猪对传播流行性出血热作用的研究

应用IFA和免疫酶染色法(IEA)分别对家猪屠宰工人和饲养员及其猪肺组织和血清检测流行性出血热(EHF)病毒抗原与抗体(抗-EHF),结果屠宰工人和饲养员EHF隐性感染率随着工龄和接触时间的增加而上升,呈正相关关系(r=0.95;0.98)。特别是EHF病毒抗原阳性猪的饲养员抗-EHF率高达20％(2/10),而EHF病毒抗原阴性猪饲养员未见感染(0/50);不同疫区猪带毒率和抗-EHF阳性率均为EHF高发病区>中发病区>低发病区;非疫区未见感染。就此认为,在EHF疫区不应低估猪传播EHF的作用,及其流行病学意义,应引起足够重视。     

快速测定火鸡出血性肠炎病毒的单克隆抗体—免疫过氧化…

应用生物素－新和素过氧化物酶复合物和单克隆抗体（ＡＢＣ－ｍＡｂ）检测冷冻和福尔马林固定石蜡包埋的感染火鸡出血性肠炎（ＨＥ）的火鸡脾组织切片中ＨＥ病毒抗原的间接免疫过氧化物酶技术（ＩＰ），与间接免疫荧光抗体技术（ＩＨＡＴ）及琼脂沉淀试验（ＡＧＰＴ）作了比较。ＩＰ染色法从感染后４８小时至试验结束时的第１１天均能检出ＨＥ病毒抗原。ＡＧＰＴ和ＩＦＡＴ检出ＨＥ病毒抗原的时间分别为感染后３～７天和２～９天.同     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

半胱胺对小鹅血浆中β-END和某些激素的影响

选用２４只二月龄的杂交鹅（川白×太湖）,随机分成对照组（１２只）和试验组（１２只）。试验组于日粮中一次性添加半胱胺（１００ｍｇ／ｋｇ·ＢＷ）。处理后第三天从翅静脉采取血样。用ＲＩＡ双抗法测定其中的β－ＥＮＤ、ＩＧＦ－Ｉ和各种激素的含量。结果表明：试验组的ＳＳ含量较对照组低１９．６４％（Ｐ＜０．０５）、而ＧＨ、ＩＧＦ－Ｉ和β－ＥＮＤ含量较对照组分别高５０．００％（Ｐ＜０．０１）、６２．８０％（Ｐ＜０．０１）和４４．５５（Ｐ＜０．０５）;与对照组相比较,试验组的ＴＳＨ低３２．３２％（Ｐ＜０．０５）,Ｔ４下降１４．７２％（Ｐ＞０．０５）,而Ｔ３升高２６．８０％（Ｐ＜０．０１）。以上结果提示：半胱胺可能是通过降低鹅血液中ＳＳ含量,使β－ＥＮＤ、ＩＧＦ－Ｉ、ＧＨ和Ｔ３水平升高,从而促进了鹅的快速生长。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

用生殖激素诱导母牛产双胎的试验

试验结果表明，用适量ＰＭＳＧ（１３５０－２０００ＩＵ）和纯化ＦＳＨ（５ｍｇ）均能诱导母牛产双胎，其双胎率分别为４２．９％（３／７）和３３．３％（１／３）。输精时注射ＬＲＨ－Ａ３双胎率为５０．０％（３／６），较对照组２５．０％（１／４）提高２５．０个百分点。     

日粮烟酸水平对肉鸭后期生产性能和脂肪代谢的影响

７２只２１日龄樱桃谷鸭平均分成４组,分别添加０、３０、６０、９０ｍｇ／ｋｇ烟酸进行３周饲养试验。测定平均日采食量（ＡＤＦＩ）、平均日增重（ＡＤＧ）、料重比（Ｆ／Ｇ）、血清总胆固醇（ＴＣＨ）、血清总甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）。结果表明：①日粮烟酸水平不影响ＡＤＦＩ、ＡＤＧ、Ｆ／Ｇ（Ｐ＞０．０５）,但与ＡＤＦＩ、ＡＤＧ、Ｆ／Ｇ存在显著（Ｐ＜０．０５）或极显著二次曲线关系（Ｐ＜０．０１）。②日粮烟酸水平可能影响ＴＣＨ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ,但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。当基础日粮烟酸和色氨酸水平分别为３５ｍｇ／ｋｇ和０．１６％时,建议肉鸭后期烟酸添加水平为６０ｍｇ／ｋｇ。     

一种检测猪生殖——呼吸道综合征的ELISA抗原的制备

利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００助溶，由猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞可制备出高纯度的ＥＬＩＳＡ抗原。这一技术消除了涉及到ＰＲＲＳＶ抗的及细胞抗在的常见本底反应。将这种高质量抗原应用到检测抗ＰＲＲＳＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ中，辅以一咱有效的血清封闭稀释剂可消除血清样品的非特异性反应。这种ＥＬＩＳＡ技术比间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）更为敏感；特别是对感染后期血清有高度特异性     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。     

FMDV在BHK21细胞扩增后FMDV 140 S抗原的测定

本文报告了用蔗糖密度梯度离心和光密度分析相结合口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）在单层ＢＨＫ２１细胞中扩增后，其中ＦＭＤＶ １４０ Ｓ抗原浓度，并同时分析了经ＢＥＩ（二乙烯亚胺）灭活后，这种抗原含量的改变。结果表明，Ｏ型ＦＭＤＶ在单层ＢＨＫ２１细胞中增殖后，其ＦＭＤＶ １４０ Ｓ抗原浓度降至０．９μｇ／ｍｌ。     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原,排汇分泌抗原的电泳分析

枉文报道了应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌幼虫排汇分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１￣８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇     

N—甲基—D,L—天门冬氨酸对肥育猪生长性能的影响

用１２０头杜大长肥育猪分别研究口服不同剂量Ｎ－甲基－Ｄ,Ｌ－天门冬氨酸（ＮＭＡ）对猪生长性能的影响,并分析了５０ｍｇ／ｋｇＮＭＡ对猪消化性能和血清激素水平的影响。试验表明：①添加ＮＭＡ均不同程度地提高了日增重,降低了料重比。其中５０ｍｇ／ｋｇＮＭＡ组效果最佳,日增重提高了９．６５％（Ｐ＜０．０２）,料重比降低了９．５９％（Ｐ＜０．０１）;②５０ｍｇ／ｋｇＮＭＡ使饲料中粗蛋白、粗脂肪的表观消化率分别提高了４．３９％（Ｐ＜０．０１）、２６．６１％（Ｐ＜０．０２）,而对干物质和粗灰分的表观消化率无明显影响（Ｐ＞０．０５）;③在添加５０ｍｇ／ｋｇＮＭＡ组,猪血清ＧＨ、ＩＧＦ－Ｉ、Ｉｎｓｕｌｉｎ水平分别提高了１１７．１９％（Ｐ＜０．０１）、９２．８９％（Ｐ＜０．０１）、４８．２９（Ｐ＜０．０５）。     

异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性