鸭冠状病毒的分离鉴定

鸭冠状病毒的分离目前国内外尚无报道．我们将回归发病鸭的肠粪及肠内容物处理后，经羊膜腔、尿囊腔接种１２～１４日龄鸭胚，３７℃培养４８小时后取羊水和尿囊液继代，将第５代的鸭胚羊水、尿囊液混合（称ＤＣＶ５）并对其进行系统鉴定，结果表明；该病毒在鸭胚；其ＴＣＩＤ５０为５．０，电镜负染观察多呈不规整的圆形，直径８０～１２０ｎｍ。有囊腹，病毒粒子外周有花瓣样突起。核酸型为ＲＮＡ型，对乙醚敏感、５６℃１５分钟即可使其失去感染性，在ｐＨ３条件下室温３小时仍保持一定活力，该毒接种幼鸭可引起幼鸭腹泻症状，接种幼鸡和火鸡不引起任何症状。     

减蛋综合症病毒在鸭胚中增殖规律的研究

通过在鸭胚上增殖规律的研究，证实了鸡减蛋综合症病毒在尿囊腔接种１０日龄鸭胚，接种后２４ｈ以前病毒未增殖，２４ｈ后才开始增殖，１２０ｈ ，病毒增殖到高峰，以后随时间延长下跌；同时还表明，鸡减蛋综合症病毒在尿囊膜、尿囊液、羊水中含量较高，病毒纯化及其他研究提供了依据。     

鸡减蛋综合征油乳剂灭活苗的研制

采用鸡减蛋综合征(EDS76)K-11株细胞毒为种毒，通过鸭胚连续盲传5代，使其扩增，收获尿囊液作为基础种子毒。基础种子毒在非免疫健康鸭胚上增殖动态的试验结果表明，EDS76病毒在羊水、尿囊膜(包含羊膜)、尿囊液中含量较高，增殖动态趋于一致；接种病毒后120h为最佳收毒时间，突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法，使收获的病毒材料由原来的每胚5．2ml增加到每胚49．4ml，显著降低了研究费用和制苗成本。确定了0．1％甲醛在20℃条件下48h灭活病毒为最佳灭活方法。成功地研制出尿囊膜、羊膜、羊水、尿囊液四元材料混合的EDS76油乳剂灭活疫苗。此疫苗在甘肃省推广试用80万羽份，安全可靠，免疫持续期长，能有效地预防和控制EDS76的发生和流行。     

鸡减蛋综合症油乳剂灭活苗的试制与应用

采用鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）Ｋ－１１株细胞毒为种毒,通过鸭胚盲传５代,使其扩增,收获尿囊液作为基础种子毒。基础各 非免疫歪 增殖动态的试验表明,ＥＤＳ－７６病毒在羊水、尿囊膜（包含羊膜）、尿囊液中含量较高,增殖动态趋于一致;接种病毒后１２０ｈ为最佳收毒时间,突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法,使收 病毒材料由原来的每胚５．２ｍＬ增加到每胚４９．４ｍＬ,显著降低了研究费用和制苗成本。确定     

鸭肝炎病毒的分离鉴定

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,接种9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓,胚爪发育畸形,肝脏变绿。分离病毒接种2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100%发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没有观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型鸭瘟病毒(DHV)标准血清所中和。应用RT-PCR方法对病鸭的肝脏悬液及鸭胚尿囊液进行检测并测序,证明所分离病毒为I型DHV。     

鸡减蛋综合征病毒血凝特性和在鸭胚中繁殖规律的研究

EDS病毒CH—1分离株能凝集鸡、鸭和鹅等禽类的红细胞,但不能凝集兔、小白鼠和人O型血红细胞。该病毒的血凝特性对缓冲液种类和浓度无严格要求。可耐受56℃24小时,但80℃作用30分钟,则几乎完全丧失血凝活性。1.0％胰酶和0.5％β—巯基乙醇对病毒血凝活性无明显影响,用0.1～0.4％甲醛37℃作用24小时血凝活性无变化,而0.5～1.0％甲醛处理后,病毒血凝价下降4～7个滴度。病毒反复冻融6次对血凝特性无影响。EDS病毒接种10日龄鸭胚后24小时就可检测到病毒的血凝滴度(2~(3.2))、96～120小时病毒在鸭胚液中的血凝滴度达到高峰(HA>2~(14)),此时胚液量也最大。病毒在鸭胚尿囊液和尿囊膜中的血凝滴度最高,其次是羊水,胚体中血凝滴度最低。     

新型鸭肝炎病毒流行病学调查及免疫防治试验

本试验通过鸭胚尿囊腔接种，对我国部分省市采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，获得9个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100％，人工感染6日龄雏鸭的致死率为0～100％不等。死亡鸭呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏肿大，有出血点或出血斑。将9株分离株经鸭胚传至第5代，收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD50为10^-7.32／0．2ml～10^-3.5／0．2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清进行中和试验，结果表明：有7株为新型DHV，有2株为1型DHV。对实验室早期分离的新型鸭肝炎病毒B株经过鸭胚传代致弱后，收集鸭胚尿囊液毒稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫，并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验，结果B20株在20倍稀释时，保护率达100％。采集免疫的雏鸭血清，中和试验测定血清的效价，雏鸭在免疫后可检测到中和抗体，第10天时抗体水平达到高峰，然后呈逐渐下降趋势。结果表明，B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性．可以作为疫苗的候选株。     

新城疫病毒D10毒株稳定性及最小免剂量测定

将ＮＤＶＤ１０毒株于鸭胚尿囊腔和绒毛膜两个途径接种传代至５０代，分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ，ＥＩＤ５０及免疫原性，结果表明该病毒尿囊腔途径接种也可获得较滴度病毒，不同代次病毒液ＨＡ和ＥＩＤ５０都分别在１：２５６和１０＾８．０／０．１ｍｌ以上免疫原性良好，但鸭胚致性随传代数增加而减轻，１２０小时内死亡率仅说明该病毒稳定性良好，该病毒于－２０℃和－５０℃保存期分别达６个月和１２个月，最小免疫剂量≤亡     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

取疑似雏鸭病毒性肝炎病死鸭肝脏制成１：１匀浆，分别接种９日龄鸡胚和１１日龄鸭胚，鸡，鸭胚均于接种后２４～３６小时全部死亡，取鸡胚尿囊膜制成１：２匀浆 接种１１日龄鸭胚，鸭胚于接种后６４小时死亡，取鸡胚尿囊液回归４日龄雏鸭进行人工发病雏鸭于２４～９６小时全部死亡，用已知抗鸭肝病毒卵黄液对发病鸭群紧急被动免疫注射，病鸭群于注射后３天全面停止死亡，取鸡，鸭胚尿囊液制成油乳剂免疫注射后３天全面停止死亡，了     

河北省鸭肝炎病毒的分离鉴定和病毒的细胞培养

从某鸭场疑似鸭病毒性肝炎的发病雏鸭及病死雏鸭肝脏中分离到1株病毒，经鉴定为鸭肝炎病毒。利用鸭胚肝细胞培养病毒，呈现典型CPE，向细胞维持液中加入1％的鸭胚尿囊液，CPE的维持时间可延长至60小时。将病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭．其致病力不见明显减弱。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

利用I型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组的5′端UTR附近区域设计1对引物,以病死鸭肝组织悬液、鸭胚尿囊液毒和鸡胚尿囊液毒为模板,RT-PCR扩增得到336 bp基因片段。经测序分析病死鸭分离病毒与已发表鸭病毒性肝炎DHV-Ⅰ型病毒的基因同源性可达98%,该病毒与已知DHV-Ⅰ毒株之间病毒基因组一级结构有较高的同源性。为进一步验证所分离的病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒,依据Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因特异性引物进行PCR,得到714 bp左右目的片段,证明该病毒为鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒。     

一种新免疫吸附剂的应用试验

用正常兔血清作鸡胚尿囊液和羊水(简称胚液)固化载体制备的免疫吸附剂吸附的兔抗鸭瘟病毒血清与含鸭瘟病毒的鸡胚液进行琼脂凝胶沉淀试验,24小时后出现一条特征性的沉淀线,而对照鸡胚液均无此现象。经吸附的抗血清能有效地除去非特异抗体。现将试验初步结果报告如下。     

鸡减蛋综合症病毒在鸭胚尿囊液中增殖动态试验研究

通过对鸡减蛋综合症(EDS-76)病毒在鸭胚尿囊液中增殖动态的研究表明,EDS-76病毒经尿囊腔接种9～10日龄鸭胚,接种后24h以前病毒处于"隐蔽期",24h后才开始增殖,120h病毒增殖达到高峰,以后随时间下跌。上述结果,为该病的进一步研究和应用提供了科学依据。     

鸽新城疫病毒在鸡胚上的增殖动态

采用红细胞凝集试验（HA），通过对鸽新城疫病毒（NDV）在鸡胚上增殖动态的研究表明，ND－gs01病毒经尿囊腔接种9－10日龄鸡胚、24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始增殖，72h左右鸡胚死亡。新城疫病毒在尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中含量较高，增殖动态趋于一致。卵黄、胚体中含量较低。上述结果，为该病毒的进一步研究和应用提供了科学依据。     

新城疫病毒D_(10)毒株稳定性及最小免剂量测定

将ＮＤＶＤ１０毒株于鸭胚尿囊腔和绒毛膜两个途径接种传代至５０代,分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及免疫原性,结果表明该病毒用尿囊腔途径接种也可获得较高滴度病毒,不同代次病毒液ＨＡ和ＥＩＤ５０都分别在１∶２５６和１０８．０／０１ｍｌ以上,免疫原性良好,但鸭胚致死性随传代次数增加而减轻,１２０小时内死亡率仅说明该病毒稳定性良好。该病毒于－２０℃和－５０℃保存期分别达６和１２个月,最小免疫剂量≤５０００ＥＩＤ５０     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

取疑似雏鸭病毒性肝炎病死鸭肝脏制成1:1匀浆,分别接种9日龄鸡胚和11日龄鸭胚,鸡、鸭胚均于接种后24～36小时全部死亡,取鸡胚尿囊膜制成1:2匀浆接种11日龄鸭胚,鸭胚于接种后64小时死亡,取鸡胚尿囊液回归4日龄雏鸭进行人工发病雏鸭于24～96小时全部死亡;用已知抗鸭肝病毒卵黄液对发病鸭群紧急被动免疫注射,病鸭群于注射后3天全面停止死亡,取鸡、鸭胚尿囊液制成油乳剂免疫产蛋鸡,免疫后21天的鸡卵黄经3倍稀释,1ml可抵抗10~(-2)0.5ml鸡胚尿囊液对2日龄樱桃谷鸭的致病性,获100％保护,而对照鸭的发病率为100％,致死率为66.7％,从而确诊某鸭群为雏鸭病毒性肝炎,用鸭肝病毒无需灭活制成油乳剂免疫产蛋鸡以制取抗鸭肝病毒鸡源性卵黄抗体防治雏鸭病毒性肝炎,取材方便,制作简单,疗效显著,值得推广和应用。     

鸡减蛋综合征病毒GC2毒株稳定性测定

将ＥＤＳ７６ＧＣ２毒株接种于１０～１１日龄鸭胚尿囊腔内,连续传至第３０代,分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及其免疫原性。结果,该病毒不同代次胚液ＨＡ和ＥＩＤ５０分别在１∶２１５和１０５．０／０．１ｍＬ以上,免疫原性良好,对鸭胚致死性随传代次数增加而减弱,说明该病毒稳定性良好。于－２０℃和－５０℃可分别保存６和１２个月以上。     

新城疫病毒Lastota株在鸡胚中的繁殖动态研究

用新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株尿囊腔接种１０月龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。     

新城疫病毒Lasota株在鸡胚中的繁殖动态研究

用新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｌａｓｏｔａ株尿囊腔接种１０月龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６、１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水），胚体，尿囊膜的ＨＡ价，结果表明，在上述时间内，胚体，尿囊膜的含毒量很低，无收获价值，病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。     

新城疫病毒LaSota株在鸡胚中的繁殖动态

用新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ株尿囊腔接种１０日龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６，１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。