气管环组织培养中和试验及间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗原交叉反应的相关性研究

本试验利用气管环组织培养中和试验和间接血凝试验检测鸡血清中传染性支气管炎病毒(IBV)抗体,由此确定7株IBV之间的抗原交叉范围,从而比较这两种检测方法之间的相关性。结果表明,在间接血凝试验中7株IBV之间的抗原相关性R值介于3.13～100之间,而气管环组织培养中和试验R值介于O.78～100之间。中和试验R值变化范围较血凝试验宽得多,两种检测方法相关系数R可达0.853。     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体的研究

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果证明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应未处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个鸡群进行流行病学调查，结果有１８个鸡群ＴＢ阳性，阳性率达８３％。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

气管环中和试验对2株IBV定型研究

本试验将二个 Ｉ Ｂ Ｖ 地方分离株宜毒和１１８ 毒连同 Ｉ Ｂ Ｖ 呼吸型代表株 Ｍ４１和肾型代表株 Ｔ 株制备免疫血清后在气管环上作交叉中和试验，结果显示宜株与 Ｔ 株（ Ｒ＝ ０．１８）， Ｍ 株（ Ｒ＝ ０１３５）抗原性上相差甚远，可能是一株不同于 Ｔ 和 Ｍ株的独立血清型或变异株，而１１８ 株与 Ｔ株相差较远，与 Ｍ 株（ Ｒ＝ ０．７１）比较接近，可能是马萨诸塞血清型中的一个亚型或变异型，这结果对疫苗的研制有一定指导意义。     

用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气 …

将ＩＢＶＴ株基因组Ｓ１基因上０．６kb片段（位于Ｓ１基因上１１２１bp～１７２３bp之间）克隆到ＰＩＢ－ＰＣＲ Ｃloning vector中,用地高辛标记探针,分别与９株ＩＢＶ 的ＰＣＲ产物和１２株ＩＢＶ的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＲＮＡ,ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测ＩＢＶ－ＰＣＲ产物的灵敏度为１００～２００pg。用该探针检测不同毒株ＩＢＶ在鸡胚中的繁     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体…

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果表明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应示处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个     

PCR方法快速检测鸡传染性支气管炎病毒

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性 Ｐ Ｃ Ｒ 方法。通过对纯化后 Ｉ Ｂ Ｖ核蛋白基因进行直接 Ｐ Ｃ Ｒ及套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增表明,两次 Ｐ Ｃ Ｒ 产物的大小为０．７ ｋｂ 和０．５ ｋｂ,与实际设计相符。而对照的 Ｎ Ｄ Ｖ 及 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物均为阴性。用 Ｉ Ｂ Ｖ Ｈ Ｂ株感染 Ｓ Ｐ Ｆ鸡后,应用我们所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的 Ｉ Ｂ Ｖ,在 Ｓ Ｐ Ｆ鸡感染 Ｉ Ｂ Ｖ后的２１ ｄ 仍然能够检测到 Ｉ Ｂ Ｖ 的基因组, Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 杂交试验证明了我们获得的 Ｐ Ｃ Ｒ 产物为 Ｉ Ｂ Ｖ 的核蛋白基因。该 Ｐ Ｃ Ｒ 检测方法比免疫荧光抗体（ Ｆ Ａ）法更具敏感、特异、快速等特点,完全适用于不同来源及不同血清型 Ｉ Ｂ Ｖ 的检测。     

PCR方法快速检测鸡传染性支气管炎病毒

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性ＰＣＲ方法。通过对纯化后ＩＢＶ核蛋白基因进行直接ＰＣＲ及套式ＰＣＲ扩增表明,两次ＰＣＲ产物的大小为０．７ｋｂ和０．５ｋｂ,与实际设计相符。而对照的ＮＤＶ及ＩＢＤＶ的ＰＣＲ扩增产物均为阴性。用 ＩＢＶ ＨＢ株感染 ＳＰＦ鸡后,应用我们所建立的 ＰＣＲ方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的 ＩＢＶ,在 ＳＰＦ鸡感染 ＩＢＶ后的２１天仍然能够检测到 ＩＢＶ的基因组,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ杂交试验证明了我们获得的 ＰＣＲ产物为ＩＢＶ的核蛋白基因。该ＰＣＲ检测方法比免疫荧光抗体（ＦＡ）法更具敏感、特异、快速等特点,完全适用于不同来源及不同血清型ＩＢＶ的检测。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）其抗体感染作时间Ｉ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法。     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

间接法Dot－ELISA检测传染性法氏囊病病毒的研究

本文应用间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ进行鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗原的检测，其最低检出量为０．４３μｇ／ｍｌ。对人工感染／自然病例的各组织脏器进行检测，结果法氏囊的ＩＢＤＶ检出率为１００％，脾脏的检出率为８０％／８４．９％，其它器官组织如肾、胸腺、心、肝、肺、盲肠扁桃体、胸肌等均含有一定量的病毒（１１～６０％）。经统计学分析，法氏囊与脾脏的病毒检出率之间具有显著性差异（人工感染差异极显著Ｐ＜０．０１，自然病例差异显著Ｐ＜０．０５），进一步证实法氏囊是ＩＢＤＶ最主要的靶器官。试验结果表明，该法检测ＩＢＤＶ抗原，敏感性高、特异性强、重复性好，并且经济、方便、快速，适于大批量样品检测，可作为一种诊断ＩＢＤ的比较理想的方法。     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

平板血凝试验鸡快速诊断传染性支气管炎病毒

鸡的传染性支气管炎（ＩＢ）１９３０年首先发现于美国，到６０年代初世界各国均报道了此病，它是由传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起的一种急性、高度传染性的疾病。主要感染雏鸡的呼吸道和泌尿生殖道，ＩＢＶ属于冠状病毒科，冠状病毒属。诊断ＩＢＶ，主要是通过鸡胚尿囊液或气管组织培养物中分离病毒，也可以对气管或其他组织粘膜进行涂片通过免疫荧光法或免疫过氧化物酶法鉴定。血清学试验如血凝抑制试验、琼脂扩散试验、ＥＬＩＳＡ等也可以用于诊断。中和试验由于比较费时费钱而少用。最近几年新兴的方法有ＲＴ－ＰＣＲ法，通过对尿囊…     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体江国托，徐宝春，王永坤（扬州大学农学院２２５００１）目前，鸡传染性支气管炎（ＩＢ）已成为国内养鸡业的主要疾病之一，虽然已建立的检测ＩＢＶ及其抗体的方法很多，如琼脂扩散试验、细胞中和试验、ＥＬＩＳＡ、血凝和血凝抑...     

鸡胚气管环纤毛对不同类型AIBV毒株的敏感性

以鸡胚气管环纤毛运动作指示系统,应用鸡胚气管环组织培养不同血清型的７个标准ＡＩＢＶ毒株及５个不同致病型的分离毒株。采用５０ＣＤ５０病毒量ＩＢＶ毒株感染鸡胚气管环培养物,观察感染后不同时间气管环纤毛的存活率。结果表明,鸡胚气管环纤毛对不同血清类型的ＡＩＢＶ毒株敏感性各具特征。     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗原的研究

本试验用抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 单克隆抗体（ Ｓ Ｄ Ｏ Ｗ １７）建立了检测猪体内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的免疫组化染色法,主要步骤：组织块在１００ ｍ Ｌ／ Ｌ中性缓冲液福尔马林中固定２４～４８ ｈ→常规脱水、石蜡包埋、切片４～５μｍ →二甲苯脱蜡→１００％ 酒精→１０ ｍ Ｌ／ Ｌ盐酸酒精 ３０ ｍ ｉｎ（消除内源性过氧化物酶）→９５％ 酒精→８５％ 酒精→７５％ 酒精→蒸馏水→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ→１０％ 马血清３７ ℃３０ ｍ ｉｎ 后转４ ℃过夜→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→生物素化马抗鼠 Ｉｇ Ｇ（１∶２００） ３７ ℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３× ５ ｍ ｉｎ→辣根酶标记链亲和素（１∶２００）３７℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→新鲜配制的 Ｄ Ａ Ｂ室温下显色 ５～１５ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ洗→常规脱水、透明、封片。经对８ 例试验感染 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 仔猪各种组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的一种好方法。