产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析

选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。     

产蛋下降综合征（EDS—76）病毒DNA酶切图谱分析

选Ｅｃｏ，Ｒｉ，Ｐｓｔ，Ｉ，Ｐｖｕ ＩＩＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，Ｂｇ１Ｉｔ和Ｂｇ１ＩＩＩ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株子ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４，８，１０，１０，６和７条。各酶切图形，片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和Ｐｓｔ－Ｉ－Ｅｃ     

减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析

Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ａ Ａ２ 株纯化 Ｄ Ｎ Ａ 经 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 ＰｓｔⅠ和 Ｓｐｈ Ⅰ水解后, 分别提取 Ｄ Ｎ Ａ 片段并克隆至ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ Ｓ（ ＋ ） 和ｐ Ｇ Ｅ Ｍ３ Ｚｆ （ ＋ ） 载体, 构建了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 全基因文库。根据 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 片段和基因组 Ｄ Ｎ Ａ 电泳迁移率计算, Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 基因组大小为３２９ｋｂ , 通过克隆片段酶谱鉴定, 杂交建立了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 限制性内切酶 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓｐｈ Ⅰ的物理图谱。     

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

减蛋综合征病毒基因组HindⅢ酶切片段的克隆及酶谱分析

以ＰＵＣ１９质粒为载体,采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段,用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｇⅢ片段探针打点杂交,证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明,克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、ＧＨ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段,选取上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ＰＵＨＡ、ＰＵＨＢ、ＰＵＨＦ、ＰＵＨＧ、ＰＵＨＨ、ＰＵＨＩ、ＰＵＨ     

2型犬腺病毒DNA不同酶酶切片段E_3区定位研究

从2型犬腺病毒的MDCK细胞培养物中提取线状双链病毒基因组DNA,利用限制性内切酶Pst Ⅰ、Bgl Ⅰ和Hind Ⅲ分别进行酶切,在1％琼脂糖凝胶上电泳,随后Southern印迹到尼龙膜上,利用Digoxin标记的2型犬腺病毒E_3区PCR产物与膜上DNA杂交,结果发现,E_3区探针分别与病毒DNA的PstIB片段、BglIAl片段和Hind ⅢA2、B2片段呈现阳性杂交反应。该结果为E_3区的克隆及犬腺病毒载体构建奠定了基础。     

牛传染性鼻气管炎病毒tk基因的克隆

根据牛传染性鼻气管炎病毒ＬＡ株的物理图谱及Ｃｏｐｅｒ株和ＬＡ标ｔｋ基因在基因组中的定位，将ＬＡ株ＤＮＡ ＨｉｎｄⅢＡ片段中的ＳａｌＩ－ＳａｌＩ亚片段、ＢｇｌⅢ－ＳａｌＩ双酶切亚片段分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中，筛选出３个重组质粒ｐ＾ｔｋ－１，Ｐｔｋ－２和Ｐｔｋ－３，其外源片段大小分别为２．７ｋｂ，１．１ｋｂ和１．６ｋｂ。经酶切分析及同源核酸探针杂交试验表明，２．７ｋｂ ＳａｌＩ－     

鸡减蛋综合征病毒分离株AA－2基因组Hind Ⅲ酶切部分片段的分子克隆

以非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经差速离心法纯化，电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。以蛋白酶Ｋ法抽提病毒基因组，琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量约３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。ＨｉｎｄⅢ酶切ＥＤＳＶＤＮＡ可见１０条片段，以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法对病毒基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段进行分子克隆，获得１７个重组质粒，通过酶切、斑点杂交鉴定，证实已经成功地克隆到ＥＤＳＶ的５．２４ｋｂ、２．０２ｋｂ、１．６５ｋｂ、１．４７ｋｂ、１．４１ｋｂ等５个ＤＮＡ片段。     

3株减蛋综合征病毒毒株核酸酶切谱分析

选用ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅤ、ＰｖｕⅡ、ＢｇｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ等８种限制性内切酶,对不同地区分离的３株减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒进行酶切图谱比较。结果发现３株毒用前６种酶切割后产生的片段数及各片段的大小均相同,而用ＳｍａⅠ和ＰｓｔⅠ切割后,贵州分离毒ＨＳ－１与国际标准毒ＡＶ－１２７、南京他离毒ＧＣ２相比,多出１个片段。表明不同地区ＥＤＳ分离毒的核酸结构基本相同而又略有差异     

马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。     

用 Digoxigenin 标记核酸探针检测 EDS-76 病毒核酸的研究

用ＥＤＳ７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株（Ｂ９６株）感染鸭胚,提取病毒核酸,分别经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切,获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切,也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后,与ＰＵＣ１９质粒载体重组,并转化到ＥｃｏｌｉＪＭ１０１中,筛选出一个插入片段（Ｇ片段）约为２７ｋｂ的重组质粒。用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｍｉｎ标记ＥＤＳ７６ＤＮＡＧ片段（ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切片段）及含该片段的重组质粒分别制备探针,对ＥＤＳ７６病毒ＤＮＡ进行斑点杂交,两种探针均为阳性,而对照组ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＤＶ正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者,它的ＤＮＡ检出限量为４ｐｇ水平。结果表明,两种探针具有高度的特异性、敏感性。     

藏绵羊线粒体DNA遗传多样性研究

本文用ＡｐａＩ,ＡｖａⅡ,ＢａｍＨＩ,ＢｃｌⅡ,ＣｌａＩ,ＥｃｏＲⅤ,ＨｉｎｄⅢ,ＨｐａＩ,ＫｐｎＩ,ＰｓｔＩ,ＰｖｕⅡ,ＸｂａＩ,ＸｈｏＩ等１４种内切酶,分析了１２头藏绵羊ｍｔＤＮＡ的限制性片断长度多态性,共检测了３５个酶切位点,发现ＡｖａⅡ,ＣｌａＩ,ＰｖｕⅡ三种酶切类型具有多态性,根据不同个体的ｍｔＤＮＡ的酶切类型,发现藏绵羊存在三种ｍｔＤＮＡ单倍型,计算ｍｔＤＮＡ多态度π值为０．００１２,     

云南保种山羊线粒体DNA限制性酶切研究

采用碱变性法,提取来自云南省不同地区４个保种山羊的１３个个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）,并用ＡｐａⅠ,ＡｖａⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＢｃｌⅠ,ＢｃＩⅠ,ＢｇｌⅡ,ＣｌａⅠ,ＤｒａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＥｃｏＲⅤ,ＨａｅⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＫｐｎⅠ,ＰｓｔⅠ,ＰｖｕⅡ,ＳａｃⅠ,ＳａｌⅠ,ＳｍａⅠ,ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析。结果发现它们的线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５．８Ｋｂ;不同限制性内切酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点,ＡｖａⅢ有６个酶切位点,ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点,ＨｉｎｄⅡ和ＨａｅⅡ有４个酶切位点,ＢａｍＨⅠ,ＢｇｌⅡ,ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点,ＡｐａⅠ,ＣｌａⅠ有两个酶切位点,其余有１个酶切位点。各保种山羊间未发现变异,说明云南的４个保种山羊极可能来自于共同的母性祖先。     

适于家蚕AFLP标记的酶切反应系统

ＡＦＬＰ作为一种新的分子标记技术，其成功的关键依赖于ＤＮＡ的酶解效果，本文使用ＰｓｔＩ、ＴａｑＩ两种限制性内切酶，选用不同的酶切方式与不同的反应离子的组合对家蚕ＢＣ１代基因组ＤＮＡ进行酶切、通过人工接头连接、二次扩增及ＰＡＧＥ电泳、银染检测，结果显示是两酶在２５ｍＭＴｒｉｓ－Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＨ７．８）、１００ｍＭＫＡｃ、１０ｍＭＭＧＡｃ２、１ｍＭＤＴＴ反应系统中能得到多态性丰富、重复性好的ＤＮＡ指纹图谱。同时，表明寻求适宜的限制酶缓冲组分是十分重要的。     

鸡痘病毒复制非必需区的筛选及酶切分析

本实验对鸡痘病毒２８２Ｅ４株基因组ＰｓｔⅠＨｉｎｄⅢ或ＢａｍＨⅠ片段进行了克隆、鉴定，并对部分克隆进行酶切分析，在此基础上对其中６个克隆插入Ｐ１１Ｐ７．５－ＬａｃＺ报告基因盒，构建了含报告基因的重组质粒。用其中的三个重组质粒以磷酸钙法共转染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），其中有２个产生了蓝色空斑．经三次空斑纯化能稳定产生子代病毒．证明所使用ｐＦＢ１７６和ｐＦＨ１３３为病毒复制非必需片段，分别是２．９ｋｂＢａｍＨⅠ片段和４．７ｋｂ的ＨｉｎｄⅢ片段，并绘出了它们的物理图谱．     

几种鸟类mtDNA限制性酶切图谱的比较研究

本文用５种限制内切酶（ＨｉｎｄⅢ，ＢｇＬＩ，ＰｓｔＩ和ＢａｍＨＩ）初步建立了头鹅、白鹅、火鸡和鹌鹑的肝脏线粒体ＤＮＡ的内切酶图谱。结果表明白鹅和狮头鹅的ｍｔＤＮＡ的酶切图谱极为相似。山鸡、火鸡和鹌鹑的ｍｔＤＮＡ限制性性内切酶图谱之间的差异是很大的，以上事实说明驯化中的鹅类的不同品种间ｍｔＤＮＡ差异不在。而鸡形目中的不同物种间的ｍｔＤＮＡ是有很大的差异的。     

用Digoxigenin标记核酸探针检测EDS—76病毒核酸的研究

用ＥＤＳ－７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株感染鸭胚,提取病毒核酸,分别经ＥｃｏＲ１和Ｐｓｔ１双酶切,获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行了ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切,也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后,与ＰＵＣ１９质粒载体重组,并转化到ＥｃｌｉＪＭ１０１中,筛选出一个插入片段约为２．７ｋｂ的重组质粒。     

减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码框架（ＯＲＦ），分别编码ｐＶⅢ蛋白、１００Ｋ蛋白基因Ｃ端和纤维蛋白Ｎ末端部分。ｐＶⅢ蛋白基因由７５３个碱基（ｎｔ）组成，编码２５０个氨基酸（ａａ），编码产物的分子量为２８５００。氨基酸水平的同源性比较表明，ＥＤＳＶ的ｐＶⅢ蛋白与禽腺病毒１型（ＦＡＶ１）及人和其他动物腺病毒ｐＶⅢ蛋白的同源性为２８％～３６％，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性高达５２％，提示ＥＤＳＶ与ＯＡＶ间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征，在ｐＶⅢ和纤维蛋白基因之间，应为Ｅ３区，但该序列只有２４５个ｎｔ组成，序列中保留了ＴＡＴＡＢｏｘ和ｐｏｌｙＡ信号。但除了２个仅编码４９ａａ和３２ａａ多肽的ＯＲＦｓ外，不编码任何产物，且核苷酸序列与其他腺病毒的Ｅ３区无同源性，证实此区无明显Ｅ３区样结构。     

减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组

采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株,经差速离心法浓缩纯化后,提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后,回收Ｃ、Ｄ、Ｅ片段。克隆到ｐＵＣ１９载体的ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ双酶切位点及ＨｉｎｄⅢ位点上,经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定,获得了ｐＵＨＣ、ｐＵＨＤ、ｐＵＨＥ重组质粒,其中ｐＵＨＣ含有末端片段。将ＥＤＳＶＳａｌⅠ水解产生并回收的大片段与ｐＵＨＣ在９５℃水浴中变性,６５℃复性后,用钙离子介导法,共转染５０％～７０％的单层鸭胚成纤维细胞,转染后３６ｈ开始产生细胞病变（ＣＰＥ）。４８ｈ后将病变细胞反复冻融,经尿囊腔接种９～１０日龄鸭胚,回收的尿囊液能凝集鸡红细胞,这种血凝性能被ＥＤＳＶ高免血清抑制,电镜下观察到腺病毒样颗粒。     

限制性内切酶片段长度多态性在几个绵羊品种中的研究

本文利用羊的促卵泡激素（ＦＳＨ）ｃＤＮＡ，胸腺（Ｔｈｙｍｕｓ）基因组ＤＮＡ及卵泡抑止素（Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）ｃＤＮＡ等３种探针与泰国长尾羊，喀麦隆羊（Ｃａｍｅｒｏｏｎ）及它们Ｆ１代杂种的基因组ＤＮＡ进行分子杂交，结果在ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＴａｑⅠ酶切的ＤＮＡ片段与ＦＳＨｃＤＮＡ杂交的图谱上，可观察到ＲＦＬＰ的存在，并可根据某些特殊区带的存在与否区别两个不同种的羊。用ＥｃｏＲＩ酶切的ＤＮＡ片段与胸腺基因组ＤＮＡ探针杂交，也发现了ＲＦＬＰ，而其它３种酶的酶切片段与此探针杂交，个体间的图谱是一致的。利用本实验所采用的４种限制性内切酶，在所测定品种及杂交种的卵泡抑止素位点没有发现变异。