应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

从冠状病毒（ＣＣＶ）阳性病犬粪便提取物中提纯抗原，制备豚鼠抗血清，用饱和硫酸铵盐析法粗提，再经ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子柱层析，提取ＩｇＧ，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，制备酶标抗体，按ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法操作术式，建立检测犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，诊断犬冠状病毒肠炎粪样，并以电镜检查比较，证明该法特异、敏感，可在４小时内报告结果。     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

将电镜检查犬冠状病毒阳性的病犬粪便，经ＰＥＧ沉淀、蔗糖线性梯度超速离心，用提纯的抗原免疫豚鼠制备抗血清，经饱和硫酸铵粗提、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ５０层析柱纯化提取ＩｇＧ。将提纯的ＩｇＧ与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了诊断犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。对收集的４５份粪便样品进行检测，并以电镜检查作为旁证，证明该法具有特异、敏感的特点，可在４小时内报告结果。     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

应用ELISA双抗体夹心法检测＼猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最侍工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检 出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．２％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。     

ELISA双抗体夹心法检测幼犬轮状病毒的研究

应用ELISA双抗体夹心法对幼犬轮状病毒感染情况进行调查,结果表明兰州地区幼犬轮状病毒感染阳性率为57.1%,其中2～4月龄的幼犬占阳性病例的75.0%,而2月龄以内及大于4月龄的犬感染轮状病毒的病例较少。     

牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG，采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶（HRP），建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果，抗体的最佳包被量为150μg／mL，酶标抗体最适工作浓度为1：200；封闭液为50mL／L的兔血清；待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃ 120min；底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测，结果，阳性检出率为42．6％。     

应用ELISA检测鸭瘟抗体

应用ＥＬＩＳＡ间接法测定鸭瘟抗体,具有简单,快捷,特异的优点,小鸭免疫鸭瘟弱毒疫苗２周后抗体水平明显上升,４周达最高峰,用１０００个致死量鸭瘟强毒攻击,抗体效价与免疫保护无明显的相关性。     

牛附红细胞体病双抗体夹心ELISA诊断方法的建立

用过碘酸钠改良法制备酶标抗体,建立了从血液中检测奶牛温氏附红细胞体抗原的双抗体夹心ELISA。试验结果表明:抗体最适包被量为156μg/mL;酶标抗体最适工作浓度为1∶400;抗原及酶标抗体的作用温度和时间分别为37℃、1 h;封闭液为5%犊牛血清;底物显色时间为15 min;对温氏附红细胞体抗原的最低检出量为6.64μg/mL;全血及带有附红细胞体的红细胞与纯化抗体反应的最大稀释倍数分别为1∶160和1∶40,可按照此浓度检测血液中的附红细胞体抗原。对该方法进行特异性阻断试验、交叉性试验和重复性试验,结果表明此法是一种特异、灵敏、快速的诊断方法,并适合作群体检测。     

水貂冠状病毒性肠炎ELISA双抗体夹心法

以PEG沉淀法结合蔗糖线性梯度超速离心从电镜阳性病貂粪便中提纯病毒抗原,再用其免疫注射豚鼠制备抗血清,提取IgG后,进行过氧化物酶标记获得特异性酶标记抗体,从而建立起检测水貂冠状病毒的ELISA双抗体夹心法。本法具有特异、敏感的特点,其敏感度为0.625μgVP/mL。可在4h之内报告结果。     

鸭病毒性肠炎间接ELISA诊断方法的建立及应用

本研究以鸭病毒性肠炎(DVE)病毒作为包被抗原,建立了检测DVE抗体的间接ELISA诊断方法.应用该ELISA诊断方法检测DVE阳性对照血清,当血清稀释至12800 倍时,结果仍为阳性;检测其它7种鸭病阳性血清结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于10%;该检测方法与血清中和试验的符合率为100%.DVE 活疫苗皮下免疫鸭抗体监测结果表明:鸭免疫后第7d 可以在血清中检测出DVE特异性抗体.本试验建立的诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为DVE免疫鸭的抗体监测和DVE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法.     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ,试验方法的最佳工作条件为：抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１：２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体,脑和肺的检出率最高,其次为心,肝,脾,肾等组织。     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为,抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体、脑和肺的检出率最高,其次为心、肝、脾、肾等组织。     

应用ELISA双抗体夹心法诊断鸭冠状病毒性肠炎的研究

将电镜检查鸭冠状病毒阳性的病鸭肠管及粪便,经PEG沉淀及蔗糖线性梯度超速离心提纯抗原。用其免疫豚鼠制备抗血清,经饱和硫酸铵粗提,再经QAE-ScphadcxA50离子柱纯化提取IgG。纯化IgG与辣根过氧化物酶(HRP)用过碘酸钠法进行标记,制备酶标抗体,建立ELISA了双抗体夹心法,以诊断鸭冠状病毒性肠炎抗原,对发病鸭及回归试验、人工感染试验中收集的55份粪便样品,用本试验检测,并用电镜检查作为对照,证明该法具有特异、敏感、快速、简便之优点,解决了仅靠电镜检查的局限性。     

应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原分布动态

利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检出率高４０％左右，灵敏度高１００～２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测，并且该方法具有特异性、高度敏感性，稳定性、快速性等优点，是一种实用的组织病毒检测方法。     

ELISA双抗体夹心法诊断兰州地区幼犬轮状病毒病

应用ELISA双抗体夹心法对兰州地区幼犬轮状病毒感染情况进行调查,结果表明该地区幼犬轮状病毒感染阳性率为57.1%,其中2～4月龄的幼犬占阳性病例的75.0%,4月龄以上者感染率最低为42.86%.