结核变态反应阳性牛的非典型性分枝杆菌的分离与鉴定

本试验从６９头结核变态反应阳性牛中采取病料２０２份进行分枝杆菌，特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定，共获２６株分枝杆菌，除５株分枝杆菌外，其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分杆杆菌中，５株偶发分枝杆菌，６株瘰疠分枝杆菌，５株鸟－胞内分枝杆菌，２株副结核分枝杆菌和１株ＲｕｎｙｏｎⅡ群。从病料看，有病变的分离率为４１．２％，无病变的为７．１％。在三种淋巴结病料中，以肠系膜淋巴结的分离率为最高，颌下淋巴     

结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组比较分析

本研究旨在揭示结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组的遗传差异,为结核分枝杆菌与牛分枝杆菌的鉴别诊断提供新的分子标志。利用结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌AF2122/97的全基因组测序结果,通过在线比对,完成了两者的全基因组比对分析。结果显示AF2122/97相对H37Rv存在14处大片段缺失,大小范围为0.8～12.7kb,其中RD18、RD19及RD20等3处缺失为首次报道。此外,AF2122/97还存在6处基因内部小片段的缺失,大小范围为12～714bp,其中Mb1319及Mb3293c基因内部缺失为首次报道。H37Rv相对AF2122/97存在6处大片段缺失,大小范围为1.3～5.4kb。此外,H37Rv还存在5处基因内部小片段的缺失,大小范围为10～48bp,这些基因的内部缺失都为首次报道。通过结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌AF2122/97的全基因组序列比对,揭示了这2种菌株间的遗传差异,阐述影响表型特征、寄主偏好性及毒力差异的关键性遗传基础。这些新的认识将有助于开发新的药物、诊断试剂和疫苗。     

牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析

牛结核分枝杆菌LppA基因是一个编码磷脂蛋白的基因,为了研究牛结核分枝杆菌LppA基因的多态性,试验以牛结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆 LppA基因,并进行序列测定,然后利用DNAMAN软件对其序列进行分析.结果表明:LppA基因全长564 bp,编码187个氨基酸,与GenBank所发表的牛结核分枝杆菌LppA基因的核苷酸同源性为99.47% ,氨基酸同源性为98.40%,有3处位点发生有义突变.     

牛结核分枝杆菌基因文库的构建

以国际标准牛型结核分枝杆菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ＴＭＣ４１０为材料,制备其总ＤＮＡ,经过限制性内切酶Ｓａｕ３Ａ部分消化后,纯化回收９～２５Ｋｂ片段,并将其用Ｔ４ＤＮＡ连接酶与经ＢａｍＨＩ酶切为粘性末端的ＬａｍｂｄａＥＭＢＬ３左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌ＬＥ３９２。所获重组子为６×１０４,因为牛结核杆菌基因组大小约为４×１０６Ｋｂ则以９９％概率筛到任一基因,要求的重组子数为１．０８×１０３,故该基因文库已达到要求     

牛病毒性腹泄病毒核酸探针的研制及其应用

本文描述了应用光敏生物素标记制备的牛病毒性腹泄病毒核酸探针，并对其稳定性和有效期，灵敏度及特异性进行了试验研究。利用牛病毒性腹泄病毒生物素探针对乌盟达茂旗等４个地区１１５份病样的检测结果表明，生物素探针比常规免疫学方法高出１／３，是一种重复性好和特异性强的牛病毒性腹泄病毒检测方法。     

牛结核病研究进展

牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病,可通过病畜传染给人类或其他动物。牛结核病在世界各国均有发生,在我国依然是最常见的多发性疾病,牛结核病有众多的宿主谱,几乎可以感染所有的温血脊椎动物。牛结核病的传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,还造成牛奶产乳率和乳质下降,更严重威胁着人类的身心健康。     

鹿结核分枝杆菌的分离与荧光PCR鉴定

为了研究鹿结核病的病原,试验采用荧光探针PCR方法对分离到的6株鹿源分枝杆菌进行检测.结果表明:5株为牛分枝杆菌,1株为人型结核杆菌.说明鹿结核病的主要病原菌为牛分枝杆菌,但也存在人型结核杆菌.     

牛结核分枝杆菌的生物学性状

1 形态与染色 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌,牛分枝杆菌则比较粗短,细菌细胞壁脂质含量较高,约占干重的60％,特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,可影响染料的穿入.分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法,以5％石炭酸复红加温染色,但用3％盐酸乙醇不易脱色.若再加用美蓝复染,则分枝杆菌呈红色,而其他细菌和背景中的物质为蓝色. 近年发现结核分枝杆菌在细胞壁外尚有荚膜.     

地高辛标记核酸探针检测牛粘膜病病毒

本课题建立了地高辛标记核酸探针检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤＶ）的诊断方法。根据ＢＶＤＶ基因序列的结构特点,在编码非结构蛋白ｐ１２５高度保守基因区内,设计合成一对特异性引物。以ＰＣＲ技术从ＢＶＤＶ基因重组质粒中扩增出了ＢＶＤＶ特异的、保守的４００ｂｐ核苷酸片段,经纯化后,地高辛标记,制备牛病毒性腹泻病毒的特异性核酸探针。通过检测ＢＶＤＶ细胞培养物、相关病毒及核酸载体和ＢＶＤＶ细胞培养物的总Ｒ     

牛结核分枝杆菌PCR检测方法的建立

随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要.试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法.结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝杆菌,在模板浓度、引物浓度和退火温度分别为1.32 μg/mL、0.5 μm/L、54℃时最佳;性能评估显示,该方法具有较好的特异性、敏感性和临床应用性,为我省牛结核病的综合防控提供关键技术.