猪圆环病毒2型疫苗的研究与应用

猪圆环病毒病2型(PCV2)是主要侵害哺乳仔猪、育肥猪及怀孕母猪的免疫抑制性疾病,以5～12周龄仔猪高发病率、高死亡率及导致机体淋巴系统损伤与免疫缺陷为主要特征,给全世界养猪业造成了极大的经济损失。本文综述了PCV2疫苗的研究应用现状,分析比较了传统疫苗(灭活疫苗、弱毒疫苗)和基因工程疫苗(亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗)的优缺点,以期为PCV2疫苗未来的研发与使用提供参考。     

漳州部分猪场PCV-2血清学调查

猪圆环病毒2型(PCV-2)感染常常给猪场带来巨大的经济损失。本研究收集漳州市部分PCV-2亚单位疫苗免疫猪场血清250份,分别用基于Cap蛋白和ORF3蛋白包被的间接ELISA方法检测,并分析漳州市PCV-2亚单位疫苗免疫猪场PCV-2病毒的流行情况。结果表明,血清样本中Cap阳性230份,阳性率92%;ORF3阳性130份,阳性率52%。综上可知,漳州市使用PCV-2亚单位疫苗免疫的猪场,其抗体阳性率较高,但是野毒感染率也仍然较高。     

猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失.PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难.疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点.迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用.鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、价廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势.笔者在本文中概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考.     

首个以抗感染为评价标准的圆环病毒疫苗:诸元妥

<正>目前圆环病毒疫苗有全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗(核酸疫苗、重组疫苗、活载体疫苗)。主流产品是全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗。截至2013年5月,我国共有5种猪圆环病毒灭活疫苗研制成功,分别为猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)、猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)、猪圆环病毒2型灭活疫苗     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫猪抗体消长规律试验

为了确定猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征(PCVD-PRRS)二联灭活疫苗的免疫期,试验采用PCVD-PRRS二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,于免疫后7,14,21,30,60,90,120,150,180,210,240天采血,分别进行PCV-2、PRRSV的ELISA抗体和中和抗体测定,以测定疫苗免疫猪后抗体的消长规律和疫苗的免疫期。结果表明:4周龄仔猪在免疫后7天抗体开始出现,21天PCV-2ELISA抗体达峰值,30天中和抗体达峰值;30天PRRSVELISA抗体达峰值,21天中和抗体达峰值,所有猪维持较高的抗体水平达180d以上;该疫苗的免疫期可达6个月。     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型（PCV2）有多个免疫学和毒力上重要的抗原表位,这些表位为疫苗和诊断制剂的设计提供了理论依据。近年来PCV2弱毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和DNA疫苗等多种疫苗已取得新的研究进展和实际应用,且PCV2疫苗在种猪和仔猪中的应用效果良好。此外,羧甲基新茯苓多糖、谷氨酸、精氨酸和硒等免疫增强剂及营养物质均有助于提高PCV2感染动物的机体免疫力。为更好地防控猪圆环病毒病,作者对PCV2疫苗相关研究进行综述。     

基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起。该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失。近年来疫苗免疫接种是防控PCVAD的有效手段,由于衣壳蛋白(capside,Cap)是PCV-2的主要免疫保护性抗原,因此常被用作研制PCV-2基因工程疫苗的理想靶抗原。论文就PCV-2Cap蛋白基因工程疫苗的研究进展进行综述,以期为今后PCV-2新型疫苗的研究提供参考。     

猪圆环病毒2型核酸疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)通过侵害猪免疫系统,降低猪抵抗力和免疫力,引起免疫缺陷及免疫抑制,可联合其他病原共同感染引发断奶仔猪综合征等多种疾病,在全世界范围内对养猪业造成了巨大损失。目前,针对PCV2的上市疫苗主要为灭活疫苗与亚单位疫苗,因两者成本高及使用不方便,急需新型疫苗克服这些缺点。核酸疫苗作为一种新型疫苗,在许多方面有传统疫苗所不具备的优势。笔者搜集了PCV2核酸疫苗的国内外研究资料,进行详细介绍。     

悬浮培养技术在猪圆环疫苗生产中的应用

猪圆环病毒病是猪的一种非常重要的免疫抑制性疾病,可直接破坏猪的免疫系统,并引起其他疾病的并发或继发感染。针对该病的疫苗主要为全病毒灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗,基因工程亚单位疫苗一般利用生物反应器生产,而国内猪圆环全病毒灭活疫苗的微载体悬浮培养生产的工艺目前还处于研究阶段。     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗。PCV2变异较快,主要临床流行毒株从PCV2b逐渐演变为PCV2d,现有商业化疫苗免疫效果需进一步研究证实。论文就近年来国内外PCV2传统疫苗、新型基因工程疫苗、PCV2疫苗与其他疫苗联合免疫的研究进展进行综述,旨在为猪圆环病毒相关疾病的防控及疫苗的开发与利用提供参考。     

上海及周边地区猪圆环病毒2型基因型分析

采集上海及周边地区猪内脏样本,进行猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）病原学检测,并对阳性样本的ORF2序列进行分析和比对。结果显示,发病猪群PCV-2阳性率为39.06%（25/64）,健康猪群阳性率为13.51%（5/37）,PCV-2总阳性率为29.70%（30/101）。30份阳性样本中PCV-2a亚型为2株,检出率为1.98%（2/101）,其余28株均为PCV-2b亚型,检出率为27.72%（28/101）。PCV-2的ORF2序列与已登录的ORF2序列的同源性在90.7%~100%。2株PCV-2a株相互间的同源性为99.6%;28株PCV-2b株的同源性在94.4%~100%,PCV-2b株中只有4株与已登录株DQ141322、AY321984和AY484413株同源性关系最近,处于同一分支中,而另外24株与Q151643中国株同源性关系最近且处于同一分支中。研究结果表明上海及周边地区PCV-2感染比较普遍,发病猪场的感染率远高于健康猪场,且感染率比往年有升高,PCV-2在猪场疫病的爆发和传染中起着重要的协同作用;在PCV-2的感染病例中,PCV-2b亚型为感染的优势毒株;绝大多数PCV-2b ORF2片段的同源性与已登录的一株中国株同源性关系密切,在基因进化树上处于同一分支,但是否可以推断其为PCV-2的另一个亚型有待进一步考证。     

Comparative analyses of humoral and cell-mediated immune responses upon vaccination with different commercially available single-dose porcine circovirus type 2 vaccines

The objective of this study was to compare the induction of humoral and cell-mediated immune responses by four commercially available single-dose porcine circovirus type 2 (PCV-2) vaccines. A total of 50 3-week-old piglets were assigned to five groups (10 pigs per group). Four commercial PCV-2 vaccines were administered according to the manufacturer's instructions and the piglets were observed for 154 days post vaccination (dpv). Inactivated chimeric PCV-1-2 vaccines induced higher levels of PCV-2-specific neutralizing antibodies (NA) and interferon-γ-secreting cells (IFN-γ-SC) in pigs than did the other three commercial PCV-2 vaccines. The proportions of CD4⁺ cells were significantly higher in animals vaccinated with inactivated chimeric PCV-1-2 and PCV-2 vaccines than in animals vaccinated with the two subunit vaccines. To our knowledge, this is the first comparison of humoral and cell-mediated immunity induced by four commercial single-dose PCV-2 vaccines under the same conditions. The results of this study demonstrated quantitative differences in the induction of humoral and cell-mediated immunity following vaccination.     

利用单抗免疫组化技术检测PCV-2 WH株在人工感染猪组织中的分布

将猪圆环病毒2型(PCV-2)WH株通过颈部肌注和滴鼻感染26日龄PCV抗体阴性仔猪,于攻毒后28 d剖杀,采集相关的神经组织、消化器官及免疫器官进行免疫组化SABC法检测、病理学观察及PCR检测。免疫组化结果显示,在攻毒猪的大脑和小脑、胃、十二指肠、淋巴结、脾脏、扁桃体、肺、肾、肝存在阳性信号,心脏无阳性信号。阳性信号主要位于淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆中,偶尔出现在细胞核内和上皮细胞中。免疫组化结果与病理学变化和PCR检测基本相符。结果表明,本试验建立的免疫组化SABC法,可用于定位PCV-2 WH株在体内不同组织器官中的分布情况。     

珠三角地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及序列分析

为了解珠三角地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行变异情况,从2008年-2010年珠三角地区疑似PMWS病死猪组织中分离获得PCV-2流行毒株,用间接免疫荧光方法进行检测和用PCR方法对这些毒株进行全基因扩增及测序分析.结果显示,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光,8株PCV-2分离株与GenBank中的其他P...     

Porcine circovirus-2 DNA concentration distinguishes wasting from nonwasting pigs and is correlated with lesion distribution, severity, and nucleocapsid staining intensity.

The emergence of severe porcine circoviral disease in North America is associated with Porcine circovirus-2 genotype b (PCV-2b), which has led to speculation that PCV-2b is more virulent than PCV-2a. The objectives of this study were to 1) correlate the PCV-2 DNA concentration and lesions in wasting (WST) and age-matched healthy (HLTH) pigs from 2 clinically affected farms, and unaffected (UNFCT) pigs from a farm with no prior clinical or diagnostic history of PCVD; and 2) to determine the initial estimates of sensitivity and specificity of PCV-2 quantitative polymerase chain reaction (qPCR). PCV-2b was confirmed in all 3 farms. Compared with HLTH pigs, WST pigs demonstrated significantly more prevalent thymic atrophy, failure of normal pulmonary collapse, and ascites (P < 0.017 for all). The HLTH and UNFCT pigs had significantly more pronounced lymphoid germinal centers and proliferative paracortical T-dependent zones, compared with WST pigs (P < 0.017). Across all tissues, PCV-2 DNA concentrations were significantly higher in WST compared with HLTH and UNFCT pigs (P < 0.017 for all). The PCV-2 DNA concentrations were strongly correlated with PCV-2 nucleocapsid staining intensity in lymph node, spleen, Peyer's patches, lung, liver, and kidney (0.60 < or = r < or = 0.84). In the current study, the PCV-2 DNA log10 cutoff concentrations best able to distinguish WST from HLTH and UNFCT pigs were between 7.0 and 8.0 per gram for tissues, and between 4.0 and 5.0 per milliliter for sera. The presence of PCV-2b in UNFCT pigs is evidence that PCV-2b by itself is not sufficient to induce severe disease.     

华南地区猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒检测分析

为了解华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒的最新流行情况,采集了华南地区11个规模猪场各饲养阶段猪血清807份,用套式PCR(nPCR)检测猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2);采集了若干猪场2010年1月至2011年8月期间有咳嗽、喘气、消瘦及疑似PDNS等临床症状的猪血清312份,以及无临床症状猪血清104份,以nPCR检测PCV-2,以一步法反转录PCR(RT-PCR)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。结果发现,所调查的11个规模猪场中只有5个检出PCV-1,所有猪场均检出PCV-2。PCV-2阳性率为30.61%,而PCV-1阳性率仅为4.21%;经产母猪和7周龄以上保育猪PCV阳性率最高;有临床症状的猪血清PCV-2阳性率为58.65%,PRRSV阳性率为37.82%,PCV-2阳性猪群中有39.89%的猪同时感染PRRSV;有症状猪群7月～9月的PCV-2感染率最高,而1月～3月最低;无临床症状猪血清PCV-2阳性率为27.9%,PRRSV阳性率为0.96%,PCV-2与PRRSV无混合感染。证明PCV尤其是PCV-2在华南地区仍广泛传播并流行,而且PCV-2与PRRSV混合感染致病情况较多。PCV-2的感染率与季节有一定的相关性,种猪带毒情况严重。     

猪圆环病毒2型免疫抑制机理研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)致病的一个主要原因是使感染的个体产生免疫抑制,感染猪体免疫细胞受到不同程度的损伤.PCV-2可以在单核细胞、巨噬细胞等抗原递呈细胞中存在,影响这些细胞对于抗原的递呈.PCV-2也可在T淋巴细胞及B淋巴细胞中增殖,引起机体体液免疫及细胞免疫反应能力的下降.调节免疫的各种细胞因子在感染PCV-2后也有一定程度的改变,PCV-2感染可引起IL-10分泌的增加,PCV-2与猪天然干扰素分泌细胞相互作用,可使这些细胞分泌干扰素的能力下降.PCV-2造成免疫抑制也与病毒ORF3分泌的功能蛋白有一定的关系,ORF3可诱导免疫细胞凋亡,主要是激活caspase-8途径而不是caspase-9途径.     

应用PCR技术检测猪圆环病毒

根据已报道的PCV-2序列,设计1对特异性引物,建立PCR检测方法,并用所建立的方法对送检的25头病猪进行检测,结果阳性检出率为28%。这表明安徽地区猪群中存在PCV-2感染。     

猪圆环病毒2型湖南株的分离与序列分析

为了解湖南省猪群中猪猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行变异情况,从2003年-2008年湖南省疑似PMWS病死猪组织中分离获得7株PCV-2流行毒株,分别命名为HuN-03、HuN-05、HuN-0601、HuN-0602、HuN-0701 HuN-0702、HuN-08。用PCR方法对这7株病毒进行全基因扩增及测序分析。结果显示,7株PCV-2分离株基因组全长均为1 767 bp,有典型的PCV-2基因组结构;病毒毒株间同源性在94.9%~99.3%之间,与GenBank中的13株PCV-2基因组同源性在93.6%~99.7%之间,与2株PCV-1亲缘关系较远,同源性只有75.7%~76.5%;在遗传演化关系上,7株分离株分属4个进化方向,HuN-0601可能是外来毒株,HuN-03在一个独立的进化方向内,可能是其他5株病毒的母源性毒株,其他5株病毒可能代表了两个遗传种群,一个是国际流行稳定毒株,一个是国内地域性流行毒株。     

猪圆环病毒2型的分离鉴定及全基因组克隆和序列分析

通过PCR方法对采自四川省某规模化猪场一批疑似断奶仔猪多系统衰弱综合征病例的肺脏、淋巴结进行PCV-2的抗原检测,并将检测结果为阳性的对应组织研磨、过滤除菌后接种无PCV-1污染的PK-15细胞,盲传15代后,IFA方法检测出有明显的特异性荧光,将该毒株命名为PCV-2-SC株,并对PCV-2-SC病毒基因组全长进行扩增及克隆、测序与比对分析。测序结果显示该病毒基因组全长1 767bp,分离株与国内外参考毒株核苷酸序列相似性在95.2%～99.5%之间,进化树分析表明,PCV-2分离毒株在进化上存在地域相关性。PCV-2四川株的分离鉴定为其诊断试剂的研制及检测方法的建立奠定了基础。