琯溪蜜柚炭疽病拮抗放线菌的筛选和鉴定

为筛选出对琯溪蜜柚炭疽病有防治效果的生防菌,以琯溪蜜柚炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）为靶标菌,采用平板对峙法进行初筛,用生长速率法和人工接种法对抑菌效果较好的菌株FX28进行抑菌谱及防治效果测定;通过形态学、生理生化特征,结合16S rDNA序列分析等方法研究其分类地位。结果表明：从25份土样中共分离到放线菌105株,对琯溪蜜柚炭疽病菌有较好拮抗作用的放线菌有16株,其中菌株FX28抑菌活性最高,其抑菌带宽度为15.3 mm,抑制率达86.4%,抑菌谱广,对琯溪蜜柚炭疽病菌、琯溪蜜柚黑点病菌、琯溪蜜柚黑斑病菌等14种供试植物病原菌均有抑制作用;其作用机制表现为菌丝分枝增多、变粗、顶端膨大等,对琯溪蜜柚炭疽病的预防效果和治疗效果分别为83.8%和71.1%。根据形态、生理生化特性及16S rDNA序列分析,初步确定菌株FX28为深红紫链霉菌（Streptomyces violaceorubidus）。     

昆虫病原线虫共生菌对小麦根腐病菌和小麦赤霉病菌的抑菌活性

为探索小麦根腐病和小麦赤霉病可持续控制的有效生防途径,以小麦根腐病菌和小麦赤霉病菌作为供试真菌,评价了昆虫病原线虫共生菌及其毒素的抑菌活性,并对高毒力菌株抗逆性进行了初探。结果表明,供试的28个昆虫病原线虫共生菌发酵液和毒素均有一定的抑菌活性,其中,高毒力共生菌菌株SY5发酵液和毒素对小麦根腐病菌的抑菌率分别为56.05%和67.41%,对小麦赤霉病菌的抑菌率分别为82.41%和83.32%;菌株SY5发酵液经50℃处理60 min及18 W紫外灯照射120 min后对小麦根腐病菌的抑菌率无明显变化,但对小麦赤霉病菌的抑菌率有所下降;常温保存150 d,抑菌活性略有下降。说明共生菌菌株SY5对小麦根腐病菌和小麦赤霉病菌抑菌活性显著,且具有一定的抗逆性,极具应用潜力。     

共生菌对两种玉米病虫害杀虫抑菌活性的测定

利用40株昆虫病原线虫共生菌菌株,以亚洲玉米螟和玉米小斑病菌作为供试昆虫和供试真菌,对其杀虫抑菌活性进行测定。结果表明,共生菌发酵液对两种病虫害均有一定的活性。其中菌株A24-2的杀虫抑菌活性最为明显,处理后120h对亚洲玉米螟的平均校正死亡率为44.25%,抑菌圈大小为15.00mm。     

生防细菌的抑菌谱和对大豆根腐病的防治

用8株生防细菌对15种病原真菌进行室内平板对峙试验,试验结果表明8株生防细菌都具用较广的抑菌谱,其中B021a、B072b对14种病原真菌具有较宽抑菌带,B09、B131对13种病原真菌具有较宽抑菌带。抑菌率为15.6％～67.5％。对大豆根腐病病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium axyspo-rum）和茄腐镰刀菌（Fusarium solani）分别进行盆栽试验。防效最高为m4b（F．axysporum）达62.7％和mg（F.solani）达60％。各生防菌株对大豆种子发芽均有一定促进作用,同时在种子发芽过程中还能抑制尖孢镰刀菌的生长。田间试验大豆根腐病防效34.6％～47.6％,各菌株对大豆植株有一定的促生作用。     

河南省花生根、茎和荚果部镰孢菌的分离鉴定

花生根腐、茎腐和果腐病在我国各花生产区发生严重,其病原菌的组成和优势种群尚不明确。本研究于2020年从河南省6个市的花生种植区采集病株样品,共分离得到151个菌株,其中花生根腐病菌41株、茎腐病菌71株、果腐病菌39株。真菌形态鉴定和利用rDNA-ITS和EF-1α序列进行分子鉴定的结果表明,这些菌株均为镰孢菌,分别属于木贼镰孢菌(Fusarium equiseti)、变红镰孢菌(F.incarnatum)、尖孢镰孢菌(F.oxysporum)、层出镰孢菌(F.proliferatum)和茄病镰孢菌(F.solani);从花生根腐和茎腐病样品中都可以检出这5种镰孢菌,果腐病样品中未能检出层出镰孢菌。尖孢镰孢菌在供试的花生根腐、茎腐和果腐病样品中检出率最高,分别为39.02%、30.99%和56.41%。根据柯赫氏法则验证了这5种镰孢菌均对花生具有致病性。本研究明确了河南省花生根腐、茎腐和果腐病的致病镰孢菌组成和优势种群,为病害防控奠定了基础。     

一株拮抗椰子茎泻血病菌的链霉菌鉴定

从文昌椰子园土壤分离筛选到一株对椰子泻血病菌奇异长喙壳菌（Ceratocystis paradoxa）有良好抑制效果的放线菌FXJ-258，对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析。结果表明：该菌孢子方形至长圆形，表面光滑，在高氏培养基上，气丝初期白色，随着时间渐变为浅灰色，基丝无鉴别色素，无可溶性色素；能利用L-阿拉伯糖，D-半乳糖， D-葡萄糖，D-甘露糖，D-木糖，D-核糖，L-鼠李糖等碳源，不能利用D-果糖，肌醇，蔗糖，水杨苷等。以16S rDNA序列为基础构建了菌株FXJ-258的系统发育树，其与模式链霉菌株的16S rDNA序列的同源性为99.64%，初步将该菌株鉴定为Streptomyces murinus。     

茶白星病拮抗放线菌的初步筛选

从茶园土壤分离到62株放线菌株,采用平板对峙培养法对茶白星病（Phyllosticta theafolia Hara）进行拮抗放线菌的筛选。结果表明,共获得拮抗放线菌菌株9株,编号分别为：F1、F2、F3、F5、F8、F11、F15、F57、F59,其中菌株F1、F2、F3、F5、F8抑菌活性强且抑菌谱广,对辣椒炭疽病菌 （Colletotrichum capsici ）,烟草黑胫病菌（Phytophthora var.nicotianae）,水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）、黄瓜腐霉病菌（Pythium aphanidermatum）亦有较好的拮抗作用。     

抗生素产生菌Streptomyces albogriseus发酵液的抗菌谱及稳定性测定

从海南土壤中筛选的一株链霉菌菌株.经鉴定为Streptomyces albogriseus[1],编号JFA-001.采用抑制菌丝生长速率法测定JFA-001菌株发酵液对15种病原真菌的抑菌活性,其中对多数供试真菌的抑制率达80%以上.对JFA-001菌株发酵液的稳定性测定结果表明,菌株传接6代时,活性稳定,从第7代开始其活性缓慢降低,第15代的抑菌圈直径比出发菌株仅减少了1.9mm;发酵液对热和碱的稳定性强,加热到80℃时未丧失活性,在pH10.0的溶液中活性几乎不丧失,但对酸的稳定性较差.     

玉竹叶斑病病原菌拮抗菌株的筛选及其发酵条件的优化

采用平板培养法从玉竹根茎中分离得到的18株内生真菌,通过对峙培养法,筛选出部分菌株对于供试的5种病菌均有不同的抑制作用。其中菌株DP06对玉竹叶斑病病原菌具有较强拮抗性,并对其他几种病菌均有抑制效果,通过分子鉴定,鉴定该菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。通过Design-expert软件进行单因素方差分析,利用Box-behnken法进行响应面优化,确定了其最佳发酵条件为培养时间13.29d,温度24.55℃,转速120rpm,抑菌活性达到了82.25%。     

玉米弯孢病菌拮抗放线菌的筛选初报

放线菌是重要的抗生素产生菌。从土壤中获得具有高效抗菌活性的抗生素产生放线菌是目前世界范围内研制和开发新农药必不可少的基础工作。本试验从辽宁省沈阳市、大连市、营口市、普兰店等地采集土样11份。采用稀释分离法,在高氏一号培养基上分离纯化出28株放线菌。从分离到的放线菌中,以PDA培养基做平板拮抗试验筛选出拮抗菌株SY-1、SY-2,对玉米弯孢病菌的抑菌带宽度超过8 mm。     

海南粗榧内生真菌对罗非鱼无乳链球菌抑菌活性研究

利用活菌菌饼法和滤纸片法研究筛选64株海南粗榧内生真菌对罗非鱼源无乳链球菌的抑菌活性,并对活性菌株的代谢产物化学成分进行初步测试。菌饼试验结果显示,11株海南粗榧内生真菌对无乳链球菌具有明显抑制作用,占总菌株数的17.2％,抑菌圈在Φ(8.7±0.3～16.2±0.2)mm间。滤纸片试验结果显示,12株具有明显抑制作用,占总菌数的18.8％,抑菌圈在Φ（8.7±0.3～28.2±0.4）mm间。2种方法的最高活性菌株不一致,但最高活性菌株（B30、F52）和同时显示较高活性的菌株（B14、B30、B32、F7、F52）被测出都含有甾体及三萜类化合物。根据结果推测,对无乳链球菌有显著抑制作用的菌株可能含有甾体及三萜类物质。结果为深入研究内生真菌对罗非鱼无乳链球菌的抑制奠定基础,也为生物防治罗非鱼病害提供有益借鉴。     

青稞根腐病生防放线菌的筛选及防效研究

为获得防治青稞根腐病的生防放线菌,从大田采集健康青稞植株及其根际土壤,利用选择性培养基对青稞根表及根际土壤进行放线菌分离筛选;以青稞根腐病原菌木贼镰孢为靶标,利用平板对峙法进行初筛,选取平均抑菌圈大于20 mm的放线菌,用发酵液法进行复筛并计算其生长抑制率;采用盆栽法测定生长抑制率较高菌株的防效及致病性,并通过分子鉴定确定其分类地位。结果表明,从初筛得到16株抑菌圈大于20 mm的放线菌中,复筛得到2株对青稞根腐病生长抑制率大于70%的菌株,分别为H35-1和AP11;测定其对青稞根腐病的防效发现,H35-1的防效为30.74,AP11的防效为48.31。对防效较好菌株AP11的16S rDNA序列进行测定并构建系统发育树发现,其与酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)的遗传距离为零,1 000次重复自展支持值为100,鉴定其为酸疮痂链霉菌。致病性分析发现,该酸疮痂链霉菌不具有致病性。本研究为青稞根腐病生防菌剂的研制提供了菌种资源,为青稞根腐病生物防治提供参考。     

芒果炭疽病拮抗菌的筛选及防治效果研究

针对芒果炭疽病菌进行了拮抗菌的分离和筛选,并且采用有效菌株的发酵液进行了平板培养基抑菌试验以及采后芒果果实炭疽病防病试验。结果从24个菌株中筛选得到1株有效抑制炭疽病菌的芽孢杆菌M35,其抑菌圈大于13 mm,而且其发酵液对炭疽病菌也有明显的抑制作用;果实防病试验结果也显示,该菌株对于芒果采后炭疽病有显著的防治效果,且随着该拮抗菌菌悬液浓度的增加,防病效果提高,在浓度为l×l08 CFU/mL时,发病率为45%,病斑直径为14.1 mm。     

水稻纹枯病菌拮抗菌B34分离鉴定及杀菌蛋白的获得

从水稻植株上分离到1株对水稻纹枯病菌有较好拮抗作用编号为B34的菌株,室内对水稻纹枯病菌的抑菌带达到10.3 mm。经生理、生化检测及细胞壁化学成分分析,确定其为致黄假单胞菌（Pseudomonas aureofaciens）。其代谢粗提物经蛋白酶作用,拮抗作用消失。经70%饱和度的（NH4）2SO4沉淀,透析后得到粗杀菌蛋白,分别上样SephadexG-100和DEAE纤维素32LKB柱层析系统,分离纯化了杀菌蛋白,经SDS-PAGE检测其分子量约为33.0 kDa,经低温、真空干燥,得到了该杀菌蛋白的结晶体。     

玉米茎腐病拮抗菌筛选及发酵条件优化

采用平板稀释法进行菌种选育, 筛选玉米茎腐病的生防菌及对该菌株进行液体发酵。应用响应面法优化发酵条件, 以禾谷镰刀菌为指示菌测定生物活性。筛选得到1株较高活性菌株(YH-1), 将该菌株进行发酵条件优化, 抑菌圈直径由原来的20.60 mm增至25.80 mm。YH-1作为高效玉米茎腐病拮抗菌株, 可为生防菌剂开发奠定良好基础。     

云南省椰子主要病虫害种类初步调查

经过对云南省零星椰子种植区近两年的抽样调查,发现危害本区域的椰子病虫害种类较多,椰子病害主要有椰子茎干泻血病、灰斑病、芽腐病、果腐病、煤烟病,虫害主要种类有椰心叶甲、二疣犀甲、椰园蚧、红脉穗螟、黑刺粉虱等13个类群,并明确了分布范围。     

拮抗油菜菌核病菌的链霉菌分离筛选与鉴定

从甘肃省河西走廊改良后的盐碱地分离链霉菌用于油菜菌核病菌的拮抗研究,并对拮抗菌进行鉴定。分离得到10株不同菌落形态的链霉菌,其中有2菌株对油菜菌核病有拮抗作用,编号Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12。与油菜菌核病进行对峙培养结果发现,Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12抑菌圈直径分别为1.2和0.9cm;离体叶菌丝接种试验表明,Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12对油菜菌核病菌的防治效果分别达63.5%和49.1%;Ⅲ22-3-12能在油菜菌核上定殖并寄生分解菌核,同对照相比菌核萌发率下降18.2%;通过形态培养特征、生理生化特征和16S rDNA鉴定表明,Ⅲ22-3-3为产水链霉菌(Streptomyces hydrogenans),Ⅲ22-3-12为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)。 [     

玉米穗腐病原菌禾谷镰孢的分离鉴定与致病力测试

利用形态学和分子鉴定技术,从玉米穗腐病病穗上分离并鉴定到17个禾谷镰孢菌株。以玉米自交系X178、593和B73为材料,对其中5个产孢能力强的菌株通过玉米发芽抑制试验进行致病力测试。结果表明,菌株FG14对测试自交系的平均发芽抑制率达54.10%;FG7最低,仅有23.22%,两者相差2.3倍。选用5个菌株在田间分别接种B73和LH59果穗,两个自交系对菌株FG14和FG21的抗性评价均为感,FG7为中抗。种子发芽和田间接种鉴定结果均表明,禾谷镰孢菌株间致病力存在显著差异。试验明确不同菌株对穗腐病抗性鉴定的影响,获得的菌株为玉米种质的穗腐病抗性筛选提供理论参考。     

Purification of an antifungal endochitinase from a potential biocontrol Agent Streptomyces griseus

Streptomyces griseus (MTCC 9723) is a chitinolytic bacterium isolated from prawn cultivated pond soil of Peddapuram Village; East Godavari District was studied in detailed. Chitinase (EC 3.2.1.14) was extracted from the culture filtrate of Streptomyces griseus and purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose ionexchange chromatography, Sephadex G-100 and Sephadex G-200 gel filtration chromatography. The molecular mass of the purified chitinase was estimated to be 34, 32 kDa by SDS gel electrophoresis and confirmed by activity staining with Calcofluor White M2R. Chitinase was optimally active at pH of 6.0 and at 40 degrees C. The enzyme was stable from pH 5-9 and up to 20-50 degrees C. The chitinase exhibited Km and Vmax values of 400 mg and 180 IU mL(-1) for colloidal chitin. Among the metals and inhibitors that were tested, the Hg+, Hg2+ and P-chloromercuribenzoic acid completely inhibited the chitinase activity at 1 mM concentration. The purified chitinase showed high activity on colloidal chitin, chitobiose, and chitooligosaccharide. An in vitro assay proved that the crude chitinase, actively growing cells of S. griseus having antifungal activity against all studied fungal pathogen. This result implies that characteristics of S. griseus producing endochitinase made them suitable for biotechnological purpose such as for degradation of chitin containing waste and it might be a promising biocontrol agent for plant pathogens.     

阿扎霉素F5a抗南方根结线虫和香蕉枯萎病菌活性研究

为寻找抗线虫和香蕉枯萎病菌的天然产物。从链霉菌211726的发酵液中分离纯化出阿扎霉素F5a，以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)为供试线虫，采用击倒实验，测定阿扎霉素F5a高(1.0%)、中(0.1%)、低(0.01%)3个浓度的抗线虫活性；同时以尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)为供试菌株，采用牛津杯琼脂平板法，对阿扎霉素F5a的抗香蕉枯萎病活性进行研究。结果表明：1.0%的阿扎霉素F5a溶液在24 h内对供试线虫2龄幼虫的平均校正