云南某猪场猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

为有效地对猪链球菌病开展诊断、防治工作,笔者对云南某猪场的疑似病猪进行了病原菌的分离与鉴定,获得了10个样本,并进行氯霉素、环丙沙星、头孢吡肟、青霉素、红霉素、磺胺等抗生素敏感试验。结果显示,分离菌株对抗菌药物有不同程度的耐药性,其中,头孢类、磷霉素等高度敏感,敏感率在90%以上;青霉素、阿莫西林、庆大霉素等敏感度低于40%。敏感药物可作为防治猪链球菌的参考选用药物。     

猪链球菌14型的分离鉴定及生物学特性研究

为了检测确定2019年5月河南某规模化猪场一栋保育仔猪发病猪群的病原,本研究从送检的发病猪关节液中分离获得1株细菌。通过细菌纯化培养、革兰氏染色、形态学观察及猪链球菌gdh基因PCR扩增,确定该分离菌株为猪链球菌。用猪链球菌分型引物对该菌株进行PCR扩增分型鉴定及软件比对分析,结果表明该分离菌株为猪链球菌14型,与猪链球菌JS14株（GenBank登录号：CP002465.1）同源性为100%。毒力基因检测结果表明,该菌株的同时携带有epf、mrp、sly、fbps、orf2毒力基因,属于高致病性菌株。小鼠致病性试验结果也证明该菌株是一株高致病性猪链球菌。药物敏感性试验结果显示,该菌株对β内酰胺类和喹诺酮类药物敏感,对氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和磺胺类高度耐药,表现出多重耐药现象。对该菌株进行5大类24种耐药基因检测,该菌株同时携带有bla_TEM、aadA1、strA、strB、aacC2、aphA1、tet（B）、gyrA、parC、sul2耐药基因。该研究为后续进一步开展猪链球菌14型流行特点和致病机制研究奠定了基础,为猪链球菌14型临床防控提供了理论依据,同时具有重要的公共卫生意义。     

一株临床2型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了确定2013年9月至2013年11月江西省某规模猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,本试验将病猪剖杀,采取脑脊液和关节液在血平板上划线进行细菌分离培养,将分离到的菌株进行生化试验、16S rDNA序列分析及基因血清分型鉴定,进一步对其进行毒力基因(gdh、orf2、fbps、sly、epf、mrp)检测和药敏性测定。结果显示,分离菌株在血平板上形成灰色"半透明"边缘整齐的有草绿色狭窄溶血环的光滑型圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、16S rDNA序列分析及基因血清型分型,确定其病原为2型猪链球菌,命名为JMS2。毒力因子基因检测结果显示,JMS2主要毒力因子分布为gdh⁺/orf2⁺/fbps⁺/sly^-/epf^-/mrp^-,预示JMS2可能不是强毒力菌株。药敏试验结果显示,JMS2对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、复方新诺明等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。本研究对临床防控猪链球菌病具有参考意义。     

四川某猪场猪链球菌2型菌株的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某发病猪场的环境及病猪样品,通过细菌分离纯化、PCR鉴定为猪链球菌2型致病菌株,随后用纸片扩散法测定该菌株的耐药性,结果显示对青霉素类、头孢类（头孢噻呋）、喹诺酮类、糖肽类、氨基糖苷类、多肽类最为敏感,对头孢类（头孢西丁）、氯霉素类较为敏感,对磺胺类、碳青霉烯类（亚胺培南）、四环素类、大环内酯类耐药。选取敏感的10种药物进行最小抑菌浓度（MIC）值测定,结果显示：阿莫西林的MIC为8μg/mL,苯唑西林、头孢噻呋、氧氟沙星、万古霉素和庆大霉素的MIC为4μg/mL,恩诺沙星和恩拉霉素的MIC为1μg/mL。     

猪链球菌的分离鉴定

对禾自锦州市的疑似猪链球菌送检病料进行分离，结合培养特性和生化试验鉴定为猪链球菌，经血清学试验进一步鉴定为猪链球菌1／2及2型混合感染。毒力试验结果：病原株对小鼠有致死性；药敏试验结果：猪链球菌对头孢菌素敏感，对洁霉素和卡那霉素中度敏感，而对土霉素、链霉素、青霉素和庆大霉素不敏感。     

云南安宁猪链球菌的分离鉴定及耐药性研究

为了解云南安宁某猪场病死猪的致病菌及耐药性。采集病死猪只的肝、肺、脾、淋巴结进行涂片染色镜检、分离培养、生化试验、动物致病性试验、16S rRNA鉴定、血清型鉴定、毒力因子基因表型检测、药敏试验等方法对分离菌株进行研究。结果表明从病死猪的脏器中分离鉴定的菌株Ynanning SS为2型猪链球菌,Ynanning SS的16S rRNA基因序列与LC377187、KM972351同源高达99.3%,与其它猪链球菌16S r RNA序列同源性都高于92.5%以上。且遗传进化树与LC377187属于同一分枝,亲缘关系较近;Ynanning SS毒力因子基因表型为Epf+Mrp+Sly+,属于强毒力菌株;Ynanning SS对庆大霉素、克林霉素、林可霉素、头孢唑林、头孢呋肟、头孢他啶、磺胺对甲氧嘧啶耐药,对青霉素、环丙沙星中介,对多西环素、头孢曲松、头孢噻肟、四环素、磺胺嘧啶敏感。选用对临床分离菌株敏感的药物进行防治可取得良好的治疗效果,相关研究结果为当地猪链球菌病的防治提供一定参考依据。     

一株猪链球菌8型菌株的分离鉴定及其生物学特性研究

为明确天津市某猪场保育猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其致病力等生物学特性,将猪场一头发病猪扑杀,无菌采集病料于哥伦比亚血琼脂平板上划线培养,对分离的疑似菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA序列分析和血清型鉴定,确定分离菌株为猪链球菌8型,命名为TJS31.药敏试验结果显示,TJS31株对8种受试药物耐药,4种...     

一株21型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了确定保定市某猪场发病猪感染的病原并了解该病原的生物学特性,试验对采集的肺脏组织病料进行病原菌的分离,采用荧光定量PCR、生化试验对分离菌株进行鉴定,并对分离菌株进行血清型鉴定、药敏试验、耐药基因和毒力基因检测。结果表明：分离到一株病原菌,将其命名为BDS21。经鉴定该分离菌株为21型猪链球菌。BDS21菌株对头孢曲松钠、阿奇霉素敏感,对氨苄西林、卡那霉素、左氧氟沙星中介,对头孢噻肟、四环素、林可霉素、环丙沙星耐药;检出tetM和ermA 2种耐药基因,gapdh、sly、fbps、gdh、orf2 5种毒力基因。说明该养殖场发病猪感染的病原可能是21型猪链球菌,防控首选药物为头孢类和大环内酯类抗生素。     

猪链球菌的分离鉴定

对来自锦州市的颖似猪链球菌送检病料进行分离,结合培养特性和生化试验鉴定为猪链球菌,经血清学试验进一步鉴定为猪链球菌1/2及2型混合感染.毒力试验结果:病原株对小鼠有致死性;药敏试验结果:猪链球菌对头孢菌素敏感,对洁霉素和卡那霉素中度敏感,而对土霉素、链霉素、青霉素和庆大霉素不敏感.     

江苏省某猪场猪链球菌分离鉴定及致病特性分析

为了探明2018年3月江苏省某规模化猪场发病猪的病原,本研究对发病猪进行采样和细菌分离,并对细菌进行了PCR鉴定、多位点序列分型(MLST)及小鼠致病力分析。结果发现:在该场4份发病猪组织中分离到猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌9型(SS9)菌株各2株,MLST分析显示分离的SS2菌株属于ST7,SS9菌株属于ST243,SS2、SS9分离菌株的毒力基因表现型分别为mrp^+epf^+sly^+orf2^+sao^+fbps^+gdh^+和mrp^-epf^-sly^-orf2^+sao^-fbps^+gdh^+。动物试验显示其中3株猪链球菌分离菌株对BALB/c小鼠有较强致病力。研究结果为该养殖场猪链球菌感染防控措施的制定提供了重要参考。     

广东省1株猪2型链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

为确诊引起广东省某规模化猪场保育仔猪发生死亡的病因,本试验采集病猪肝脏、脾脏、心脏、脑、关节液和淋巴结等病料进行细菌分离,并对分离菌株进行纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色、形态学观察、生化试验,用血清型特异性引物进行PCR扩增,并进行毒力基因检测、药敏试验、生长曲线测定及动物试验。结果显示,分离菌株在成牛血清琼脂平板上呈圆形、灰白色、表面光滑、边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阳性球菌,呈链状排列。该菌株的生化试验结果符合链球菌的特征,PCR扩增结果显示猪链球菌保守基因片段（gdh和gapdh）和猪2型链球菌特异的cps2J基因片段均为阳性,表明该分离菌株为猪2型链球菌。毒力基因检测结果表明,该菌株毒力因子基因型为gdh⁺/gapdh⁺/epf⁺/mrp⁺/sly⁺/orf2⁺/fbps⁺。分离菌株用营养肉汤培养6 h达到对数生长期,培养10 h的菌液D_{600 nm}值为0.310。药敏试验结果表明,该菌株对青霉素、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸钾等药物敏感,但对强力霉素耐药。动物试验结果表明,感染分离株的BALB/c小鼠未出现死亡且无明显临床症状,毒力较低。本研究为该猪场链球菌病的防控提供了重要参考信息。     

Isolation,Identification and Biological Characteristics Analysis of a Strain of Clinical Streptococcus suis Serotype 2

In order to determine the pathogen and its virulence characteristics of a suspected case of piglets streptococcosis in a pig farms in Jiangxi province during September to November of 2013,a strain was isolated from the joint fluid and cerebrospinal fluid of one diseased piglet.The isolated strain was identified by culture characteristics,biochemical test,16S rDNA sequence analysis,serotype PCR test and further studied the presence of the following virulence genes:Glutamate dehydrogenase (gdh),virulent-assocciated sequence (orf2),fibronectin-binding proteins (fbps),suilysin (sly),extracellular protein factor (epf),muramidase-released protein (mrp) and antibiotic sensitivity tests.The isolated strain was identified as Streptococcus suis serotype 2 by culture characteristics,biochemical test,16S rDNA sequence analysis and serotype PCR test,and it was named as JMS2. Detection results of virulence gene showed that the distribution of main virulence genes of JMS2 were gdh⁺/orf2⁺/fbps⁺/sly^-/epf^-/mrp^-,suggesting that the strain maybe not likely to be high virulence.Drug sensitivity tests showed that the JMS2 was susceptibility to β-lactams such as penicillin,amoxicillin,but resistant to azithromycin,SMZ-TMP,and so on.The result was significant for the clinical prevention and treatment of swine streptococcosis.     

猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌,药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同,但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5%。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型,确认26株为猪链球菌,其中1株为1型,16株为2型,4株为7型,没有9型,另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100%致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf^＋mrp^＋sly^＋2型猪链球菌,1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。     

湖南省猪链球菌的分离与鉴定

从病猪脏器病料中通过细菌培养、生化试验分离鉴定出了121株猪链球菌.经PCR技术鉴定马链球菌兽疫亚种28株,占23.1%,猪链球菌24株,占19.8% ,其中猪链球菌2型4株,占3.3%,猪链球菌9型2株,占1.7%,猪链球菌1型和7型都没检测到,证实省内除了猪链球菌2型外,也存在其他血清型的猪链球菌.     

广西部分地区猪链球菌的分离鉴定及小鼠致病性研究

对来自广西边境地区部分发病猪场及屠宰场的370份猪组织进行细菌分离鉴定,共分离到16株链球菌,对这16株链球菌进行了形态学观察、PCR鉴定及小鼠致病性试验。结果表明,其形态、染色、生化特性均符合猪链球菌的特点,通过GDH鉴定与测序,证实这16株菌株均为猪链球菌,分别命名为GX1~GX16。通过特异性引物PCR分型（35个血清型）,其中有1株为1型,1株为2型,1株为5型,1株为29型,5株为8型,7株未分出型。用这16株猪链球菌对昆明小鼠和BALB/c小鼠进行动物致病性试验,结果发现,菌株GX10对昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均为100%;菌株GX11对BALB/c小鼠致死率为80%;其他菌株对昆明小鼠和BALB/c小鼠均无致病性。菌株GX10、GX11对BALB/c小鼠的LD₅₀分别为4.5×10⁵和3.6×10⁹ CFU。本试验结果表明,广西边境地区存在致病性猪链球菌8型。BALB/c小鼠对猪链球菌的敏感性高于昆明小鼠,更适合作为猪链球菌致病性研究的动物模型。     

Isolation,Identification and Pathogenicity on Mice of Streptococcus suis in Pig in Guangxi Border Area

16 strains of Streptococcus were isolated and identified from 370 pig tissues of clinically morbidity farms and slaughter houses in Guangxi border area.Morphological observation, PCR identification and pathogenicity test were carried out. The results showed that the morphology,dyeing,biochemical characteristics were coincidence with the characteristics of Streptococcus suis,confirmed that 16 strains were Streptococcus suis,and named as GX1 to GX16. Further by divided type identification (35 serotypes) by GDH,1 strains was type 1,1 strains was type 2,1 strains was type 5,1 strain was type 29,5 strains were type 8 and 7 strains could not differentiate types. The pathogenicity of 16 strains Streptococcus suis were detected by Kunming mice and BALB/c mice. The results showed that the letal rate of GX10 for Kunming mice and BALB/c mice was 100%;GX11 for BALB/c mice was 80%;Other strains were apathogenicity to the Kunming mice and BALB/c mice. The LD₅₀ of GX10 and GX11 was 4.5×10⁵ and 3.6×10⁹ CFU for BALB/c mice,respectively. The results showed that pathogenic Streptococcus suis type 8 occured in Guangxi border area. The sensitivity of BALB/c mice to Streptococcus suis was higher than Kunming mice, BALB/c mice was more suitable for the pathogenic study of Streptococcus suis.     

一株猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

从送检的一份疑似链球菌病病死猪病料中分离出1株细菌,通过对分离菌株进行细菌的培养特性、生化试验、玻片凝集试验及PCR分型鉴定,确定为2型猪链球菌,动物致病性试验表明,1×10⁸ CFU/mL的剂量可致死小白鼠,对该分离菌株的毒力因子进行PCR检测发现,溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)和溶血素(sly)均为阳性。此菌的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株。