绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545 bp和精氨酸支原体806 bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10 pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。     

绵羊肺炎支原体环介导等温扩增联合横向流动 试纸条可视化检测方法的建立

为建立绵羊肺炎支原体快速检测方法,用环介导等温扩增(LAMP)技术进行核酸扩增,通过横向流动试纸条(LFD)实现可视化检测。针对绵羊肺炎支原体HSP 70基因设计一套特异性引物,其中HSP70FIP由生物素标记进行LAMP扩增反应,产物与生物素标记的探针杂交后,在LFD上完成检测,建立了绵羊肺炎支原体LAMP-LFD快速检测方法,并对其特异性、敏感性及临床应用进行检测。结果表明,LAMP在62℃反应70min,即可特异性的检测绵羊肺炎支原体的存在,最低检测线为1.0×102 CFU/mL,灵敏度是常规PCR检测方法的100倍,且对已知感染绵羊肺炎支原体的羊病变肺组织临床样品的检出率为100%。建立的LAMP-LFD检测绵羊肺炎支原体的方法特异性强、灵敏度高并且操作简便,为羊感染绵羊肺炎支原体的预防和诊断提供了新方法。     

丝状支原体簇及绵羊肺炎支原体双重PCR方法的建立及应用

为了快速检测和鉴别丝状支原体和绵羊肺炎支原体,试验采用2对检测丝状支原体和绵羊肺炎支原体的特异性引物,成功建立了一种能同时检测丝状支原体和绵羊肺炎支原体的双重PCR方法.结果表明:该方法特异性强、敏感性高,对临床病料的检测效果好.     

绵羊肺炎支原体对肺及肺外脏器影响的研究

绵羊肺炎支原体（M ovipneumoniae）是引起绵羊胸膜肺炎的病原体。一般认为绵羊肺炎支原体可引起羊的胸膜肺炎。通过病原培养和PCR检测，除了肺脏外，在其它脏器也能检测到支原体，特别是危重病羊在肺外其它脏器分离出支原体的几率更高。绵羊肺炎支原体除主要引起肺脏的病变外，还可以造成心、肝、脾、肾、脑、淋巴结的损害。肺脏不是肺炎支原体感染的唯一靶器官。     

杂交盘羊绵羊传染性胸膜肺炎支原体的诊断及防控

绵羊肺炎支原体（MO）是引起绵羊传染性胸膜肺炎的病原体,本研究主要从常规细菌学方法及分子生物学方法等对石河子公园野生盘羊发生疑似传染性胸膜肺炎病例进行了病原学诊断,探究该病的病原特性,从而为该病防治措施提供参考依据。     

绵羊肺炎支原体分离株交叉反应性的测定

绵羊肺炎支原体分离株致敏经过鞣酸和戊二醛处理的绵羊红细胞,制备成试验用抗原,与通过攻毒取得的几种血清进行间接血凝试验来检测其交叉反应性。通过检测,绵羊肺炎支原体分离株同无乳支原体、巴氏杆菌等几种可以引起肺炎症状的菌种无交叉反应性。     

青海省同德县绵羊流产类疾病血清学检测

应用虎红平板凝集试验(Rose-Bengal Plate Agglutination Test,RBPT)、衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体间接血凝试验(Indirect Hemagglutination Assay,IHA),对2013年采自青海省同德县部分乡镇的201份绵羊血清样品进行了布鲁氏菌、衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体的血清学检测。结果:未检出布氏杆菌阳性血清;分别检出衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体阳性血清2份、4份和7份,其阳性率分别为1.00%、1.99%和3.48%。此外,对于抗体阳性的血清样品采用PCR方法进行了抗原检测,结果表明,青海省同德县地区绵羊中存在衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体的感染。     

北疆某规模化羊场绵羊肺炎支原体感染的血清流行病学调查

为了查明北疆某规模化羊场绵羊肺炎支原体野毒感染的程度,本试验采集不同日龄绵羊的血液,分离血清,选择绵羊肺炎支原体抗体和抗原检测ELISA试剂盒进行该病的血清流行病学调查。结果表明,该场存在比较严重的绵羊肺炎支原体野毒感染的现象,其中成年母羊带菌、不同日龄阶段羔羊的混养可能是该场羔羊多发咳嗽、腹式呼吸等类似绵羊肺炎支原体感染的主要原因。     

肃南县高寒牧区绵羊肺炎支原体血清学检测调查

调查绵羊肺炎支原体在肃南县绵羊中的流行状况。利用绵羊肺炎支原体抗体检测正向间接血凝试剂盒,对2018年5月采自肃南县7个乡镇64个村701户的1 581份绵羊血清进行检测。阳性率为12.1%,不同乡镇的阳性率范围为6.8%～71.1%.肃南县范围内绵羊群体中存在绵羊肺炎支原体的感染和流行,应该注意加强对该病的防控。     

天峻县羊传染性胸膜肺炎病的诊治

利用细菌分离培养方法和PCR方法对天峻县快尔玛乡某养殖户中2只病死绵羊组织进行检测,经细菌分离培养未分离到可疑病原,用PCR方法检测2只病死绵羊肺脏及1号羊脾脏,均为绵羊肺炎支原体阳性。综合临床症状、常规检测以及PCR检测结果,诊断为羊群感染了绵羊肺炎支原体,从而导致了传染性胸膜肺炎。     

绵羊肺炎支原体诊断方法的建立

从青海省海晏县发生胸膜肺炎的绵羊群中采集3份肺组织病料,进行病原的分离培养和特异性PCR检测。结果从3份肺组织中均分离到支原体,经鉴定为绵羊肺炎支原体,表明建立的PCR方法能对绵羊肺炎支原体做出正确诊断。     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体在诊断上的应用

用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体,用ELISA方法对绵羊肺炎支原体病进行血清学诊断,并与IHA试验进行了比较。其阳性检出率,抗绵羊肺炎支原体ELISA法比IHA法高7个百分点。用此法对本地羊群的250份血清进行检查,阳性率为27.20％。结果表明,所建立的检测绵羊肺炎支原体抗体的ELISA,与IHA比较其敏感性、特异性及符合率均很高,检疫时应用简便易行,具有较高的实用价值。     

规模化羊场支原体感染的流行病学调查

试验通过血清学、PCR检测及病理剖检等方法对新疆南疆5个规模化羊场进行绵羊肺炎支原体感染和流行调查.血清学调查结果显示,5个规模化羊场绵羊肺炎支原体的感染率为52.07％.PCR检测结果显示,阳性率为30％.流行病学调查结果表明,5个规模化羊场绵羊均存在不同程度的肺炎支原体感染,其中沙雅县的感染最为严重.     

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。     

绵羊肺炎支原体分子致病机理研究进展

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）引起的支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia）是严重危害养羊业的重要呼吸道疫病。绵羊肺炎支原体感染具有隐蔽性、持续性,造成患病羊生产性能下降,严重影响养羊经济效益。综合近期国内外关于绵羊肺炎支原体分子致病机制的文献报道,从绵羊肺炎支原体与呼吸道上皮细胞黏附、致下呼吸道损伤和引起机体免疫抑制三方面进行综述,以期为后续深入研究绵羊肺炎支原体致病机理、开发新型防控技术奠定基础。     

浅谈绵羊肺炎支原体研究现状

绵羊肺炎支原体是引起引起绵羊、山羊,特别是羔羊增生性、间质性、高度接触传染性胸膜肺炎（非进行性肺炎）的病原体。本文主要从病原特征、致病机理等方面对绵羊肺炎支原体进行介绍;对绵羊肺炎支原体的研究概况进行总结。     

宁夏不同绵羊品种中绵羊肺炎支原体的调查

为了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)在不同品种绵羊中的感染情况,项目采集宁夏盐池、平罗两地的4个绵羊品种(滩羊、陶寒杂、杜寒杂和滩寒杂)的鼻拭子标本403份,提取DNA并用绵羊肺炎支原体特异性PCR进行检测,统计不同品种、年龄段绵羊体内绵羊肺炎支原体的检出情况。结果表明,滩羊、陶寒杂、杜寒杂和滩寒杂的绵羊肺炎支原体的检出率依次为52.0%、83.0%、75.5%和85.7%;滩羊在3月龄以下及8月龄以上的检出率最低,分别为24.2%和34.4%,3月龄至8月龄的检出率为94.3%;陶寒杂、滩寒杂在各年龄段的检出率均在74.0%以上;杜寒杂3月龄以下的检出率为56.3%,3月龄以上的检出率在82.0%以上。结果表明,宁夏地区规模化饲养的绵羊中,绵羊肺炎支原体广泛存在,较滩羊而言,其他杂交品种羊更易感染绵羊肺炎支原体。     

宁夏某羊场绵羊肺炎支原体的分离鉴定及病理组织学观察

为了确定宁夏某羊场发生一起以体温升高、咳嗽、呼吸困难为临床特征且具有传染性的疾病的病原，采集濒死病羊的病理组织，应用细菌分离培养、分子生物学鉴定、病理组织学观察及免疫组织化学分析等方法对采集的病料进行病原检测和诊断。结果显示，细菌分离培养获得3株支原体分离株，分子进化分析发现其均属于绵羊肺炎支原体，与国际标准株Y-98的序列一致性为100%。病理组织学观察显示，肺泡上皮细胞坏死、增生，支气管管腔内和肺泡腔内大量炎性细胞浸润，支气管和气管黏膜上皮细胞坏死、脱落、固有层水肿、炎性细胞浸润。对不同脏器的免疫组织化学分析显示，绵羊肺炎支原体主要集中于肺脏和气管内，且肺脏的阳性组织百分比最高，其次是支气管和气管。结合疫病的流行病学调查，该羊场所发疾病为运输应激后感染绵羊肺炎支原体导致，该病原侵染并定植于肺脏、气管及支气管上皮细胞，引起羊严重的呼吸道病症。     

绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝标准株PG3、绵羊肺炎支原体分离株HD-1、标准株FH抗原的差异性研究

试验采用SDS—PAGE和免疫印迹分析技术研究了绵羊肺炎支原体标准株Y98与绵羊肺炎支原体分离株HD-1、丝状支原体丝状亚种PG3以及肺炎支原体标准株FH间细胞膜蛋白免疫原性的异同。结果表明：绵羊肺炎支原体标准株Y98同绵羊肺炎支原体分离株HD-1间细胞膜蛋白免疫印迹结果基本一致,而绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝状亚种PG3和肺炎支原体标准株FH抗原差异较大,缺乏共同抗原成分。     

绵羊支原体肺炎诊断及病原的分离与鉴定

通过对送检病羊的临床症状、剖检变化、病料染色镜检,初步诊断为绵羊支原体肺炎。又经无菌采取病料接种改良Frey培养氏液,再取培养液接种于固体培养液后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后将培养生长的支原体分别进行革兰氏染色、姬姆萨染色、瑞氏染色和碱性复红染色;进行了各种生化试验,进行动物和鸡胚接种试验和平扳凝集等血清学试验;最后确诊为绵羊支原体肺炎,并分离获得了绵羊肺炎支原体。该结果为绵羊支原体肺炎的防制奠定了基础。