环渤海湾苹果主产区苹果轮纹病菌致病性研究

通过无伤接种当年生红富士苹果枝条,评价了环渤海苹果产区苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株的致病性.结果表明:分离自苹果不同罹病部位的轮纹病菌菌株的致病性存在明显差异,分离自病果菌株的致病性强于分离自病枝菌株的.分离自病果的轮纹病菌菌株群体中,强致病性(A)菌株所占比例较大(75%).轮纹病菌菌株的致病性呈现区域性特点,分离自连片区域中的大连金州和瓦房店菌株,致病性基本一致;分离自毗邻的烟台市牟平区、威海市乳山、文登和荣成4县(市)的菌株,平均病情指数均值皆在50左右.而分离自不同地区的部分苹果轮纹病菌菌株,致病性程度亦存在明显差异.其中烟台市海阳县和福山区菌株引起的病情指数分别为78.61和76.26,而同处胶东半岛的蓬莱县菌株所致病情指数只有26.61.     

苹果轮纹病菌种内遗传多样性研究

 【目的】分析苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana)的遗传多样性并确认其优势类群。【方法】对采集分离的64个菌株进行形态特征和致病性测定,对部分菌株的进行了ITS序列测序,采用ISSR分析这些菌株的遗传多样性。【结果】通过形态特征和致病性明确了所分离的64个菌株是苹果轮纹病菌。17个菌株ITS序列与贝格伦葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana de Not f. sp. piricola(Nose) Koganezawa et Sakuma)的序列一致,并且被分成两个类型H1和H2。用13条ISSR引物从64个菌株中扩增出121条条带,其中88条多态性条带,多态性比率为72%。64个菌株的遗传相似性从0.44到0.99,并且被分成2个ISSR类群,类群1包含21个菌株、类群2包含43个菌株。【结论】本研究中贝格伦葡萄座腔菌的遗传多样性与菌株的地域、症状以及分离部位没有相关性。苹果轮纹病菌被分成2个ISSR类群,类群2是优势类群。     

不同农药品种与不同施药方式对苹果轮纹病菌的控制效果

以感染苹果轮纹病的红富士为试材,分离出轮纹病菌纯培养,选择4%农抗120水剂、10%世高水分散粒剂等12种不同作用机制的低毒、低残留化学药剂分别进行室内毒力测定和田间涂干防治试验。结果表明,不同作用机制的杀菌剂对轮纹病菌的杀毒活力存在明显差异,三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌有较高的室内生物活性,其苯醚甲环唑EC50为0.206μg/g、戊唑醇EC50为0.360μg/g;其次为取代苯类杀菌剂,其甲基托布津EC50为0.781μg/g;有机硫类杀菌剂生物活性较低,其代森锰锌EC50为9.425μg/g;生物杀菌剂春雷霉素,对苹果轮纹病菌也有较好的室内生物活性,其EC50为1.834μg/g。早春苹果萌芽前分别采用全树喷药和涂干显示出一定的防治效果,进一步地提高防效,还需后续采取其他措施。     

10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力及田间防治效果研究

采用十字交叉法和喷雾法测定了10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力和田间防效。多菌灵和氟硅唑对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用较强,其EC50分别为0.0429μg/m L和0.0507μg/m L;其次为苯醚甲环唑和丙环唑,其EC50分别为0.1144μg/m L和0.1959μg/m L。采收前田间、贮藏期调查发现,430 g/L戊唑醇悬浮剂3000⁴000倍液、250g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液对苹果轮纹病均具有良好的防治效果,且对苹果树安全。     

10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力及田间防治效果研究

采用十字交叉法和喷雾法测定了10种杀菌剂对苹果轮纹病菌的室内毒力和田间防效。多菌灵和氟硅唑对苹果轮纹病菌菌丝生长的抑制作用较强,其EC50分别为0.0429μg/m L和0.0507μg/m L;其次为苯醚甲环唑和丙环唑,其EC50分别为0.1144μg/m L和0.1959μg/m L。采收前田间、贮藏期调查发现,430 g/L戊唑醇悬浮剂3000~4000倍液、250g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液对苹果轮纹病均具有良好的防治效果,且对苹果树安全。     

淮北地区苹果轮纹病重发原因与防治对策

论述苹果轮纹病发病特点及消长规律，发病原因及防治对策。     

苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性

[目的]研究苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性,为今后该病菌对代森锰锌抗药性的检测和治理提供基本的理论依据。[方法]以海棠轮纹病菌作为对照,采用菌丝生长速率法测定了77个苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性。[结果]EC50值处于1.428 5～34.067 1 mg/L,平均为（13.676 5±6.358 8）mg/L,与代森锰锌对5个野生海棠轮纹病菌菌株的EC50平均值（10.140 5±2.035 2）mg/L无明显差异。正态检验表明,77个苹果轮纹病菌菌株对代森锰锌的敏感性符合正态分布。[结论]山东省未发现对代森锰锌产生抗药性的轮纹病菌菌株,EC50平均值（13.676 5±6.358 8）mg/L可作为苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性基线。     

中国部分省份苹果轮纹病菌及相关类群的系统学关系

【目的】对苹果轮纹病菌（Botryosphaeria dothidea）及其相关类群的rDNA-ITS序列进行分析,探讨他们之间的系统学关系,为进一步研究其系统发育和演化提供理论依据。【方法】对来源于陕西、山西、山东、河南及四川5个省份的113株苹果轮纹病菌和2株梨轮纹病菌的rDNA-ITS区段直接测序,经GenBank同源性检索比对（BLASTn）及DnaSP 4.0软件分析后,结合GenBank下载序列构建系统发育的邻接树和最大简约树,同时计算遗传距离和序列核苷酸差异数。【结果】115株供试菌株分为9个单倍型（Hap₁～Hap₉）,其中Hap₇（B.obtusa）来源于山西省;Hap₉（苹果壳色单隔孢溃疡病菌,B.stevensii）来源于四川省;其余单倍型均为B.dothidea,其中Hap₁的出现频率最高,包含86株分离株。邻接法和最大简约法分析结果显示,用于构建发育树的序列均形成了3个大的聚类组。聚类组Ⅰ包含B.obtusa、B.rhodina（柑橘葡萄座腔菌）和B.stevensii等3个种,其中B.obtusa和B.rhodina各自独立聚为一支,而B.stevensii全部序列分为3支。聚类组Ⅱ包含2个分支:其中B.lutea单独聚为一支;B.ribis（茶麃子葡萄座腔菌）和B.parva亲缘关系较近,共同聚为一支。聚类组Ⅲ由B.dothidea和贝伦格葡萄座腔菌（B.berengeriana）共同构成,支持B.dothidea与B.berengeriana为同物异名的观点。遗传距离及序列核苷酸差异数显示,B.dothidea与其他种间的遗传距离在4.91%～7.57%,序列核苷酸差异数为31～54bp;B.dothidea不同单倍型之间的遗传距离为0.19%～1.93%,序列核苷酸差异数为1～10bp。【结论】B.stevensii显示出了复合种的特性,其分类地位还有待于进一步研究。B.dothidea与其他相似种的亲缘关系较远,且在B.dothidea种内存在核苷酸序列的分化,但分化程度较低。B.dothidea不同地理来源的菌株之间存在差异,但地理分化特征不明显。     

山东省苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性测定

2007年8～10月从山东主要苹果产区轮纹病果上分离获得54个苹果轮纹病菌菌株,采用菌丝生长速率法分别测定了各菌株对代森锰锌的敏感性。结果表明:代森锰锌对54个菌株的EC50值呈单峰频次分布,分布在1.9287～20.8004μg/mL之间,均值为(9.4383±0.5561)μg/mL;在54个菌株中选择对代森锰锌最敏感的泰山海棠菌系进行重复测定,将其EC50平均值3.0963μg/mL确定为苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感基线;Duncan新复极差法和系统聚类的分析结果表明,不同地理来源的苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性都处在较高水平,总体上不存在明显差异,没有出现敏感性下降的抗药性亚群体。     

Inheritance and Molecular Marker of Resistance to Bot Canker in Malus domestica

Apple bot canker[Botryosphaeria dothidea(Moug.)Ces.et de Not.]is distributed worldwide,resulting in a serious crop loss every year in apple(Malus domestica Borkh.)production.The resistance of each seedling derived from a hybrid population(Jonathan×Golden Delicious)was evaluated by disease index either from natural infection in the field or from inoculation with five isolates of B.dothidea,Ls1,Lw023,Lw048,Mx1,and Zz26.The inheritance of the resistance to bot canker was analyzed via frequency distribution analysis,and microsatellite and AFLP markers linked to the resistance loci were screened.From the binary frequency distribution patterns,it was found that the segregation ratio of resistant/susceptible genotypes infected by pathogen isolates Lw023 and Ls1 was 1:15:and that by Zz26 and Mx1 was 15:1.The variation of resistance was involved in the segregation of two to four alleles of major genes,the resistance was recessive when infected by Lw023 and Ls1.but was dominant when infected with Mx1 and Zz26.A microsatellite maker,CH02a04-450,and two AFLP markers,E-AG/M-GAC-280 and E-AGG/M-CTT-110,were identified,and their map distances to the resistance loci were 5.1,5.1 and 6.2 cM,respectively.The three markers are located in different linkage groups,while CH02a04-450 is on linkage group 2 or 7.E-AG/M-GAC-280 was successfully converted into SCAR 159.Finally.CH02a04-450 and SCAR159 were re-examined in inoculated segregation population and presented a good reliability on predicting phenotypes of resistance.     

苹果EST数据分析平台的构建及初步应用

为更有效地利用苹果EST公共数据资源,方便信息交流与共享,本研究构建了苹果EST数据分析平台Malus domestica Micro-Workstation,并整合了专为苹果定制的序列延伸系统。该数据分析平台具有本地信息查询、序列简单注释和短序列延伸等功能。以所建平台为辅助工具,从已公布的324 308条苹果EST序...     

苹果属不同种对褐斑病菌生长发育的影响

利用荧光显微镜技术观察苹果褐斑病菌(Diplocarpon mali)接种苹果品种富士和砧木山定子叶片后不同时间点的生长发育特点。接种富士6h后分生孢子即可萌发入侵,24h在表皮细胞中形成吸器,3d在叶组织中形成菌落并已扩展至海绵组织,5d后观察到特殊的角质层下菌丝束(SHS)组织,7d即可观察到大量分生孢子盘。虽然病菌在山定子叶片中的生长发育过程与在富士上相似,但发育明显延迟,接种后3d在角质层下扩展并侵染表皮细胞形成吸器;7d时仍局限在侵染点周围,未观察到SHS组织;11d始见个别分生孢子盘。且接种后12h在侵染点周围的表皮细胞壁上有明显的胼胝质沉积,说明山定子对褐斑病的抗性明显大于富士,可用于进一步的抗病机理研究和应用。     

干旱胁迫对平邑甜茶不同生长时期氮素吸收利用的影响

为研究干旱胁迫对苹果砧木平邑甜茶不同生长时期N素吸收利用效率的影响,以1年生盆栽平邑甜茶为材料,设置干旱胁迫和对照2组处理,其中干旱胁迫是在施肥前对平邑甜茶提前2周控水,保持盆土45%～55%田间最大持水量;对照正常供水,保持盆土75%～85%田间最大持水量。以¹⁵N标记的尿素为N源,分别于4月10日、5月10日、7月10日和9月10日4个生长时期施1.0 g ¹⁵N标记的尿素,分析干旱胁迫对平邑甜茶4个生长时期的植株N含量、各器官肥料N的百分率(N_dff)、¹⁵N分配率、利用率以及N素转运代谢相关基因表达量的影响。结果表明：1)与对照相比,4个生长时期中,干旱胁迫均降低平邑甜茶植株N含量、各器官对N的吸收转运能力以及N素利用率,其中在7月生长期降低的最显著,植株N含量降低27.0%、根、茎、叶的N_dff值分别降低23%、35%、40%、N素利用率降低42%。2)干旱胁迫下平邑甜茶各器官氮素分配由地上部分向地下部分转移,优先供应植株生长中心。3)干旱胁迫下平邑甜茶根系对N素吸收...     

降尘对苹果叶片光合作用及营养特性的影响

以塔里木盆地为研究区,利用多重比较方法分析降尘对苹果(Malus domestica Borkh.)叶片的光合作用及营养特性的影响。结果表明,降尘使苹果叶片的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、胞间CO2浓度(Ci)均下降。受降尘影响后,元帅(M.domestica cv.Delicious)和富士(M.domestica cv.Fuji)苹果叶片中的氮素含量增加、钾素含量减少;而金冠(M.domestica cv.Goldcn Delicious)苹果叶片的氮素含量下降、钾素含量增加;不同品种的苹果叶片磷素含量受降尘影响后呈现不同的变化。     

八棱海棠耐盐碱性评价

为探明八棱海棠的耐盐碱性种质资源价值,以实生苗为试材,采用水培的方法评价了八棱海棠耐盐性和耐碱性.结果表明:1)0.4％ NaCI处理30 d时,八棱海棠的盐害指数为51.1,根据耐盐性评价标准判定为中等耐盐型树种;其实生个体间存在广泛的抗性分离现象,极强、强、中、弱和极弱耐盐型植株分别占群体总数的20.6％、23.9％、37.0％、12.0％和6.5％.2)pH9.5碱处理(Na2CO3)30 d时,八棱海棠的碱害指数为16.3,根据耐碱性评价标准判定为极强耐碱型树种;其实生个体间存在广泛的抗性分离现象,极强、强、中、弱和极弱耐碱型植株分别占群体总数的79.1％、15.3％、4.2％、1.4％和0％.八棱海棠中存在极强耐盐型和极强耐碱型植株,是优异的耐盐/碱型种质资源树种.     

苹果PGIP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

【目的】从富士苹果幼果果实中克隆多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因,并进行原核表达,为进一步研究PGIP的生物学功能奠定基础。【方法】根据Genbank中已经发表的苹果PGIP基因序列设计引物,采用RT-PCR从苹果果实中扩增PGIP基因cDNA,回收目的基因片段并连接到pMD18-T载体,鉴定后进行测序。然后将PGIP全长cDNA和去信号肽的cDNA导入到pET-32a(+)表达载体中,分别获得融合表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X,将其分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用不同终浓度IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳。对pET-PGIP-X基因工程菌表达产物的可溶性进行检测。【结果】苹果PGIP cDNA序列长为1 091 bp,编码区为993 bp,可编码330个氨基酸残基,将其命名为MdPGIP;重组表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X在宿主大肠杆菌中分别表达出分子质量约49.6和46.1 ku的融合蛋白,pET-PGIP-X表达产物以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了苹果PGIP基因,并在大肠杆菌中获得高效表达。     

珠眉海棠(Malus zumi Mats)盐应答MzDREBb基因的克隆与功能研究

通过microarray(微列阵芯片)分析,从珠眉海棠盐胁迫cDNA文库中分离得到盐诱导的MzDREBb基因全长cDNA序列,研究苹果属植物DREB转录因子在胁迫中的作用。结果表明:MzDREBb全长1 185 bp,开放阅读框共714 bp,5''-UTR和3''-UTR的长度分别是121和350 bp;MzDREBb编码237个氨基酸,有一个AP2/ERF结构域;系统分类将MzDREBb归入DREB家族的A-5亚组;MzDREBb定位在细胞核中,具有转录激活活性;半定量RT-PCR表明MzDREBb基因受到盐诱导。超表达MzDREBb基因的拟南芥耐盐能力增强。以上结果表明MzDREBb基因在盐胁迫应答中起重要作用。     

珠眉海棠水通道蛋白MzPIP1;1基因的克隆与表达分析

通过对珠眉海棠盐胁迫微列阵分析,从盐胁迫cDNA文库中分离得到盐诱导的水通道蛋白基因MzPIP1;1 cDNA序列全长1 135bp,开放阅读框共870bp,5′-UTR和3′-UTR的长度分别是91和174bp。MzPIP1;1编码289个氨基酸,有6个跨膜结构和2个NPA(Asp-Pro-Ala)保守区。聚类分析表明:MzPIP1;1和其他4个物种PIP1类同源性在80%以上,属于质膜水通道蛋白PIP1类。拟南芥原生质体瞬时转化结果表明MzPIP1;1定位在质膜上。半定量RT-PCR表明MzPIP1;1基因受到盐和低温诱导。推断MzPIP1;1基因在盐胁迫下的表达调控与珠眉海棠耐盐能力密切相关。     

珠眉海棠(Malus zumi Mats)盐应答MzSTO基因的克隆与表达分析

通过微列阵芯片(Microarray)分析,从珠眉海棠盐胁迫cDNA文库中分离得到MzSTO (Salt tolerance protein)全长基因.结果表明:MzSTO基因cDNA全长1 066 bp,开放阅读框共729 bp,5'-UTR和3'-UTR的长度分别是49 bp和288 bp; MzSTO编码242个氨基酸,N端有2个保守的B-box锌指结构域(CX2CX8CX7CX2CX4HX8H);半定量RT-PCR表明MzSTO基因受到盐和干旱胁迫抑制,受冷处理诱导,并响应ABA(abscisic acid).以上结果表明MzSTO基因可能通过依赖ABA的途径参与非生物逆境胁迫.