柑橘黄龙病和衰退病的同步PCR和RT-PCR检测

柑橘黄龙病(HLB)和衰退病(CTV)是2种危害严重的世界性柑橘病害,国内外对其病原检测的研究相当多。研究建立了同时检测HLB和CTV的多重RT-PCR体系,从影响多重RT-PCR扩增的引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行体系优化。结果表明,多重PCR反应的退火温度应优先考虑退火温度高的引物,退火温度高的引物所需浓度要大于相应退火温度低的引物。该体系实现了DNA病原和RNA病原的统一检测,进一步体现了多重RT-PCR的优越性。     

柑橘衰退病毒研究进展

综合有关文献,就柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)的生物学特征、分子生物学、抗病毒基因工程和柑橘衰退病的检测、鉴定及防治作一综述。重点讨论CTV株系分化、基因组和亚基因组RNA、CTV的血清学和分子生物学检测方法。目前的研究表明,CTV通常以不同株系的混合物存在,并且和其他病原形成复合侵染,各分离物之间存在明显的遗传多样性。不同株系的分离纯化、各株系间的交叉保护及CTV和橘蚜的互作关系还有待深入的研究。     

柑桔衰退病高效简便检测试剂盒的研制及应用

柑桔衰退病是由柑桔衰退病毒(Citrus tristezavirus,CTV)引起的一种柑桔病害,主要通过蚜虫和带病接穗传播[1]。柑桔衰退病在非洲、美洲、东亚、欧亚、太平洋地区、地中海地区等50多个国家或地区都有发生,对某些国家的柑桔生产还造成了毁灭性灾害[2 4]。在我国,CTV分布较为普遍,     

柑橘黄龙病、裂皮病和衰退病病原的多重RT-PCR检测

 建立了一种同时检测柑橘黄龙病病原类细菌(Candidatus L iberibacter asiaticus, HLB) 、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd) 、柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus, CTV) 的多重RT-PCR技术体系。运用根据3 种病原核苷酸保守区序列设计的特异性引物, 成功的对同一样品中的HLB、CEVd、CTV进行多重RT2PCR扩增, 得到1 160 bp、371 bp、273 bp 3条特异性大小与试验设计相符的条带。就影响多重PCR 的主要因素引物浓度和退火温度进行了一系列优化, 建立了能同时检测HLB、CEVd、CTV的多重RT2PCR技术体系。该体系最低能从10 pg总RNA中检测出黄龙病类细菌和柑橘裂皮类病毒, 从1 pg总RNA中检测到柑橘衰退病毒。对采自田间37份材料的实际检测表明: 存在两种或3种病原的复合侵染。     

甜橙品种(系)对柑桔衰退病毒多态性的影响

柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)存在复杂的株系分化现象,运用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需了解不同类型柑桔对CTV构成的影响.通过CTV分离株CT14和CT36分别嫁接接种28个甜橙品种(系)的研究发现,具有单一p25/HinfI RFLP组群构成的CT14在不同甜橙品种(系)上的组群构成和SSCP(单链构象多态性)图谱没有明显的变化;混有多个组群的CT36在不同的甜橙品种(系)上其组群构成和SSCP图谱差异明显,其中p25/HinfI RFLP第1组群的检出率最高.     

柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

选用柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。     

柑桔病毒和病毒类病害及其影响

柑桔病毒及病毒类病原1.病毒:柑桔病毒病害中已通过病原鉴定、为害最严重的是柑桔衰退病(CTV)。这种病毒病可能起源于亚洲,目前除了地中海流域、美国、墨西哥和古巴的部分地区外,已在许多柑桔产区流行。柑桔衰退病毒在生物学上存在各种毒株,而且几种蚜虫的传病     

高糖系温州蜜柑的病毒病对策

对温州蜜柑带来为害的病毒病种类有柑桔衰退病毒(CTV)、柑桔碎叶病毒(CTLV)、柑桔裂皮类病毒(SEV)和温州蜜柑萎缩病毒(SDV).在考虑这些病毒病的对策时,完全可以按同类方法进行处理。 高糖系温州是温州蜜柑中的一个系统,它们都患有柑桔衰退病毒,只是病状程度不同而已,温州蜜柑通常对该病毒具有抗性,即使带毒也很少表现病征。     

T3基因型柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用

根据不同基因型柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）ORF1a的序列差异,设计T3基因型CTV的特异性引物T3-4F/R,通过优化得到最佳反应条件建立T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性试验。应用该方法测定柑橘植株中T3基因型CTV分离株含量。建立了一种特异性检测T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,其灵敏性比普通RT-PCR方法高100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.1%,相关性系数为0.992。组内和组间变异系数均小于2.94%,表明该方法重复性好。田间样品中T3基因型CTV含量差异较大,最高含量是最低含量的1 250倍。本研究中建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测柑橘植株内的T3基因型CTV分离株,可用于研究T3基因型的CTV的变化规律。     

柑桔衰退病毒相关研究进展

柑桔衰退病毒引起的柑桔衰退病是一种广泛分布于世界各柑桔主产区的重要柑桔病毒病害,对柑桔产业的危害极大。随着我国柑桔产业的快速发展,近年来柑桔衰退病在我国多个柑桔产区暴发,造成了严重的经济损失。为了给深入开展柑桔衰退病毒研究和有效防控柑桔衰退病提供参考,根据已有研究文献报道,就柑桔衰退病毒的起源、类型、传播方式、蛋白功能、病毒与寄主的互作关系、茎陷点症状形成、蚜传机理,以及防治方法进行了综述。     

柑橘4种病毒多重PCR检测技术的建立及应用

柑橘衰退病毒(CTV)、柑橘碎叶病毒(CTLV)、柑橘黄化脉明病毒(CYVCV)和柑橘叶斑驳病毒(CLBV)是影响柑橘生产的重要病毒性病害,建立快速、准确的检测方法是防控该病害的基础。本研究通过筛选针对4种病毒基因组保守区域设计的特异性引物,优化影响多重RT-PCR扩增的引物浓度、退火温度,建立了可同时扩增4种病毒的多重RT-PCR检测体系。该检测体系扩增的特异片段大小分别是CTLV 889 bp、CYVCV 612 bp、CTV 462 bp和CLBV 294 bp,扩增产物清晰,特异,检测灵敏度较普通单重RT-PCR灵敏度低约10倍。采用多重RT-PCR和单重RT-PCR对收集到的59份田间样品分别进行检测,结果显示2种方法检测结果一致,4种病毒的检出率在11.9%～54.2%之间。建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、灵敏地检测单一或复合侵染的4种柑橘病毒。     

应用SSCP技术分析我国柑橘衰退病毒的混合感染

以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(CitrusunshiuMarc.)、橘(C.reticulataBlanco)、甜橙(C.sinensisOsbeck)和柚(C.grandisOsbeck)样品。对PAS-ELISA法初步检测呈阳性的样品进行柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)CP基因(coatingproteingene,CPgene)的RT-PCR扩增,结果来自14个样品采集地的120份样品感染了CTV,单个采样点的感染率为20.0%～71.4%,而总感染率达49.6%,表明CTV在这些地区广泛发生。单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)分析显示,120份CTV的CP基因RT-PCR的扩增产物共产生120种SSCP带型,而且存在广泛的混合感染。     

柑桔裂皮类病毒RT-PCR检测体系的建立及优化

柑桔裂皮类病毒(CEVd)是严重危害柑桔生产的一种世界性病害.本研究以感染CEVd的柑桔叶片为材料,提取总RNA,采用RT-PCR进行检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:rTaqDNA聚合酶和Hotstart TaqDNA聚合酶能有效排除非特异性带的干扰;使用PCR增强剂,能有效解决CEVd非特异性带的干扰,提高了PCR的扩增效率.     

天草、不知火等日本柑桔品种的病毒病鉴定与脱毒

2000年开始，我们先后应用指示植物对天草、不知火等10个从日本引进柑桔品种的原材料感染柑桔裂皮病类病毒（CEV）、柑桔碎叶病毒（CTLV）、柑桔衰退病毒（CTV）、柑桔鳞皮病毒（PSV）的情况进行了鉴定；2002年4—5月应用A蛋白DAS—ELISA法检测温州蜜柑萎缩病毒（SDV）。结果表明，10个品种的原材料不带裂皮病、碎叶病和温州蜜柑萎缩病，但都带有衰退病毒强毒系，津之香的原材料带有鳞皮病。对带病的品种植株，     

浙江南部柑桔病毒病和类似病毒病鉴定

应用指示植物对采自浙南8个县(市、区)28个乡镇田间40个柑桔品种133份样品的带毒情况进行了检测。结果表明:浙南至少已发生4种柑桔病毒病或类似病毒病害。感染了碎叶病毒(TLV)的有8个品种,衰退病毒(CTV)18个品种,裂皮病类病毒(CEV)11个品种,黄龙病类细菌(CYS)2个品种。共计有27个品种感染1种或1种以上病毒类病害,其中感染3种的有2个品种,感染2种的有9个品种。     

橘蚜传播率不同的柑橘衰退病毒分离株CPm的表达特性和分子特征

柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)通过媒介昆虫传播必需要有病毒小外壳蛋白(minor coat protein,CPm)的参与。为解析褐色橘蚜传播率不同的CTV分离株CPm的分子特征和表达特性,通过克隆、测序获得其CPm基因序列,将对应的氨基酸序列运用DNAStar软件进行相似性和序列比对分析,并应用Western blot技术分析了3个传播率不同的中国CTV分离株CPm的表达特性。结果表明,低传播率的分离株CTLJ与其他分离株CPm氨基酸序列差异较大,同源性仅为93.3%～94.2%,氨基酸序列中有14个位点发生变异,其中9个位点是该分离株特有的。尤其有些位点的氨基酸极性和电荷发生了变化,引起了蛋白质二级结构的改变。然而,传播率不同的CTV分离株CPm的表达水平却无显著差异。这些结果揭示了CTV被褐色橘蚜传播的效率与其CPm的表达特性无关,可能与其氨基端序列变异有关。     

应用沙田柚和酸柚实生苗鉴定茎陷点病的研究

柑桔衰退病(Citrus tristeza,CTV)在我国分布广泛,只是由于我国基本不用酸橙做砧木,不表现衰退病危害。但是,20世纪90年代以来,浙江、四川和广西等省(区)的一些文旦柚、沙田柚等柚类果园受到了茎陷点型衰退病———柚矮化病的严重危害[1-3],致使衰退病问题在我国突然间严重起来     

通过单蚜传毒纯化柑橘衰退病毒(CTV)分离物

对龙凤C、立间、FJ59和0号4种CTV(柑橘衰退病毒)毒源分别用单头橘蚜传毒进行分离纯化.用直接组织点免疫(DTBIA)和P25衣壳蛋白基因所表现出来限制性片段长度多态性(RFLP)对各毒源的蚜传阳性率和组群特征进行分析.从271株受毒植物中共获得31株感染CTV的阳性株,4种毒源的阳性检出率分别为25.0%、3.7%、3.1%和17.8%.有22株仅带有单一组群CTV,其中从龙凤C获得6株Ⅰ组群,3株Ⅲ组群;从FJ59获得1株Ⅰ组群;从0号获得7株潜伏侵染的Ⅰ组群,2株Ⅲ组群;从立间获得出3株Ⅳ组群CTV.     

柑橘衰退病毒弱毒株筛选方法研究进展

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)引起的衰退病是一种严重危害世界柑橘产业的病毒病害。随着我国柑橘产业的发展,柑橘衰退病的危害也日趋严重。目前交叉保护技术是防治柑橘衰退病最有效的手段。现有研究表明,由于CTV存在复杂的株系分化现象,导致弱毒株筛选仍存在诸多困难。对运用生物学方法、血清学检测以及分子生物学技术鉴定CTV弱毒株的最新研究进展予以综述,同时就现有交叉保护防治技术的不足和解决途径进行讨论和展望,旨在为更好地防治柑橘衰退病提供借鉴。     

柑桔衰退病及其防治

柑桔是世界第四大贸易农产品，是我国重要的果树树种。柑桔生产对农村经济和社会发展发挥着重大作用。柑桔衰退病毒（Citrus tristeza virus，CTV）是对世界柑桔生产具有严重危害的一种病原物，20世纪30年代以来，柑桔衰退病在世界柑桔产区连续暴发，70年代以后发病更为频繁，非洲、美洲、东亚、欧亚、太平洋地区、地中海地区等50多个国家和地区都有发生的报道。