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荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞分离培养及冷冻保存方法研究 总被引:5,自引:0,他引:5
试验对荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞的分离、体外培养及5种冷冻保存方法进行了研究。结果表明:用DMEM/F12 20%胎牛血清 100IU/mL双抗的完全培养液进行组织块培养,能获得良好的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞原代培养物;成纤维细胞混合培养物经TrypsinEDTA(0.25%Trypsin,1mmol/LEDTA.4Na)消化所收集到的细胞主要为成纤维细胞,经2~3代传代,可得到纯化的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞。纯化培养的成纤维细胞在冷冻保护剂和血清成分相同的条件下,选用5种不同的冷冻保存方法进行冷冻保存,其中使用70%细胞悬液 20%胎牛血清 10%DMSO的冷冻保存悬液,先在4℃预冷平衡0.5h,接着在液氮罐口的气态氮中悬挂4h,然后沉入液氮的方法冻存的细胞,解冻后,经台盼蓝染色后进行细胞活力分析,活细胞率为86.68%;培养48h后细胞贴壁率为86.40%,明显高于其他几种方法。 相似文献
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为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。 相似文献
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采用30d胚龄左右的牦牛胚胎,用2种不同的消化液消化后,将所得的牦牛胎儿成纤维细胞(yakembryonicfibroblasts,YEF)培养于不同血清含量的RPM11640培养液中,并接种于2种不同材质的培养瓶表面,对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清(FBS)添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明,含150mL/LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长,可传代27次以上;经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2.5g/L胰蛋白酶消化,所得的YEF的细胞活率差异不显著(P〉0.05),其原代细胞在含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著(P〈0.01);不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。 相似文献
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利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10 μg/mL FSH、1 μg/mL E2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH、1 μg/mL E2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%.卵母细胞培养<20 h、20 h、24 h、28 h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20 h、24 h、28 h组与<20 h组相比差异显著(P<0.05).卵裂率20 h、24 h组(51.79%、58.16%)显著高于<20 h组(38.24%)、28 h组(36.98%)(P<0.05),但20 h、24 h组卵裂率差异不显著(P>0.05). 相似文献
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本试验对1头黄占鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶(Ⅰ型)消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存。利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黄占鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黄占鹿的核型式为4(M)+62(A),XY(A,M);对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%。 相似文献
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本文以中华传统文化的视觉和祖国兽医学的理论与方法对"平凉红牛"本质内涵进行了挖掘与梳理,并深度解读"平凉红牛"的天地禀赋特质及与文化自信的内在联系,为破解"平凉红牛"的保护与开发利用及可持续发展提供必要的依据。 相似文献
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本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂对F1代鸭胚成纤维细胞进行冷冻保存,检测复苏后细胞的生长情况。利用此方法可以获得高活性的鸭胚成纤维细胞,并可成功传至第三代。其中F1代与F2代细胞活力最好,达到90%以上。3种冷冻剂保存的细胞复苏后均与F1代细胞的活力存在明显差异,均小于80%,其中用DMSO冷冻保存的细胞复苏后活力最强,生长密度保持较好。 相似文献
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为研究马身猪体细胞的生物学特性,试验以3日龄马身猪耳缘组织为材料,采用组织块贴壁法建立马身猪耳缘组织成纤维细胞系,并对体外获得的细胞系进行生物学特性检测。结果表明,获得的马身猪耳缘组织成纤维细胞系符合成纤维细胞的基本特征,细胞贴壁生长,呈典型的梭形、星形和多边形,细胞汇合成单层的时间为10~13 d,生长曲线呈S型,中期染色体二倍体(2n=38)占主体,约占细胞总数的84%,符合细胞建系的要求;脂质体(LipofectamineTM 2000)转染绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)的转染效率为25%。马身猪耳缘组织成纤维细胞系的成功建立为地方猪种遗传资源的保护开辟了新的方法。 相似文献
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ZHANG Qi GUO Xiao-hong GAO Peng-fei JIN Yu-shu LI Meng CHENG Zhi-min ZHANG Ning-fang LE Bao-yu LIU Hong CAO Guo-qing LI Bu-gao 《中国畜牧兽医》2017,44(8):2289-2294
In order to study the biological characteristics of somatic cells of Mashen pig, the ear marginal fibroblast cell lines of Mashen pig were established from 3 days old Mashen pig by direct explant method,and the biological characteristics of cell lines were detected. The results showed that the cell lines obtained from Mashen pig were in conformity with basic properties of typical fibroblasts, the shape of adherent cells were typical spindle, star and polygon, the time of grew into monolayer cells was 10 to 13 d, the growth curve was typical S shaped. The frequency of metaphase chromosome number (2n=38) was about 84% of the total number of cells, and it had met the establishment standard of fibroblast cell line. The transfection efficiency of green fluorescent protein(pEGFP-C1)transfected by lipofectamine-mediated method was 25%. The successful establishment of the fibroblast cell lines of Mashen pig had opened up a new method for the conservation of genetic resources. 相似文献
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本研究以组合酶分步消化法并利用Percoll梯度分离、贴壁纯化的方法,从不同时期的鸡睾丸组织中分离精原细胞。结果发现:①Percoll分离后,出壳6d雏鸡获得的细胞总数、精原细胞总数、精原细胞纯度分别为282.1、174.6、61.9%,其中精原细胞纯度比孵化15d、19d鸡胚和出壳后13d雏鸡分别高10.2%、5.7%和2.5%;②贴壁纯化后精原细胞纯度达到82%,比未经贴壁纯化的精原细胞纯度高出15.6%;③在无饲养层培养条件下,比较Percoll梯度分离前、后鸡精原细胞体外培养的情况,Percoll梯度分离前精原细胞贴壁在时间上比分离后较快,且分离前精原细胞体外存活时间亦比分离后长。 相似文献
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为了提高野牦牛成纤维细胞分离培养效果,研究了组织保存方法、原代培养方法、培养液类型、添加细胞生长因子和冷冻保存液配方对野牦牛体细胞分离培养与传代的作用。结果表明,PBS、D/F12和TCM199适合野牦牛皮肤组织的保存,D/F12和TCM199培养液适合组织块培养,组织块成活率达到(86.29±4.62)%,组织块法适合野牦牛成纤维细胞的原代培养;D/F12培养液培养野牦牛成纤维细胞效果较好,群体倍增时间和平台期密度分别为38.47 h和2.075×106/mL,正常二倍体核型百分率为84.33%;表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)产生了较明显的促增殖作用,平台期细胞密度明显增加;2种冷冻保存液(D/F12添加胎牛血清和二甲亚砜及胎牛血清添加二甲亚砜)均能用于野牦牛细胞冷冻,细胞存活率分别是87.33%和89.00%。 相似文献