一株丁酸梭菌的鉴定及生物学特性研究

试验对分离到的菌株DL-01进行鉴定和生物学分析,为其在动物生产中的应用提供参考。通过形态学观察、生化鉴定、16SrDNA基因序列分析的方法鉴定菌株;检测高温条件芽孢的存活率,对其代谢产物、遗传稳定性进行分析,探究其对抗生素、胆盐、人工胃液、人工肠液的耐受能力以及对致病菌的拮抗能力。结果显示:此菌株为丁酸梭菌;95℃处理10 min后,芽孢存活率达到95%;菌株代谢产生多种氨基酸、维生素、酶等物质,产丁酸性能较好;连续传代30代,菌株形态不变,DNA谱带基本相同;此菌株对多种抗生素具有良好的耐受性;在猪胆盐浓度为0.35%时,菌株DL-01仍然能够生长;经过2.5 h人工胃液和人工肠液处理后,活菌数达99%以上;能抑制肠出血大肠杆菌和魏氏梭菌生长。结果表明,丁酸梭菌DL-01具有较好的遗传稳定性、抗逆性等优良特性,这些优势有利于将其应用到动物生产中。     

丁酸梭菌CBM01的碳、氮源优化及其对胃肠道耐受性的研究

本试验旨在探究丁酸梭菌CBM01的最佳碳、氮源及其对胃肠道的耐受性。采用控制变量的方法,以梭菌增菌培养基为基础,对丁酸梭菌CBM01的碳、氮源进行优化,同时对其胃肠道耐受性进行研究。结果显示:1)丁酸梭菌CBM01的最佳碳源和最佳氮源分别为葡萄糖和蛋白胨;2)丁酸梭菌CBM01在人工胃液和人工肠液中作用3 h后,存活率分别为90.33%和92.09%;3)丁酸梭菌CBM 01可耐受的最高胆盐浓度为0.40%。由此可见,丁酸梭菌CBM 01对胃肠道环境具有良好的耐受性,是一株开发潜力巨大、应用前景广阔的益生菌。     

丁酸梭菌在养猪业中应用的研究进展

丁酸梭菌又名酪酸梭菌、丁酸梭状芽孢杆菌,是芽孢杆菌科、梭菌属的一种产丁酸的革兰氏阳性菌厌氧细菌。具有芽孢结构,能够耐受饲料加工过程中的高温、高压环境,对人工胃液、肠液和胆盐也有较强耐受性。丁酸梭菌是人和动物肠道中的正常菌群,能产生短链脂肪酸、氨基酸、酶等多种益生物质,具有促生长和增强机体免疫力等功能,其主要代谢产物丁酸还可作为肠道上皮组织细胞再生和修复的营养物质[1]。作为一种益生素的活菌制剂,能够改善畜禽消化道菌群平衡,提高机体的抗病毒、新陈代谢、养分消化吸收的能力,预防消化道疾病,具有调节消化道菌群和促进畜禽生长的双重作用。     

丁酸梭菌对肉仔鸡饲料加工过程及消化道环境的耐受性研究

本试验通过模拟肉仔鸡饲料制粒条件及其消化道环境,研究丁酸梭菌在饲料制粒过程中及在肉仔鸡消化道内对不良环境的耐受性。试验分别对丁酸梭菌的温度、压力、人工胃液及肠道消化酶耐受性进行评价。高温耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮在85℃的条件下分别处理2.5、5.0、7.5 min,对照组不作处理。高压耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮分别在0.20、0.30、0.40 M Pa压力下处理5 min,对照组不作处理。人工胃液耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮在p H分别为2.00、3.00、4.00的人工胃液中处理48 min,对照组以p H为7.00的磷酸盐缓冲液(PBS)替代人工胃液。肠道消化酶耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮用p H为3.00的人工胃液处理48 min后,再在肠道消化酶混合液中处理198 min,对照组以p H为7.00的PBS替代肠道消化酶。每组均设3个重复。试验结束后平板计数法检测试验饲粮的丁酸梭菌活菌数,计算存活率。结果表明:85℃高温处理2.5、5.0、7.5 min后丁酸梭菌的存活率分别为70.43%、52.69%、46.35%;0.20、0.30、0.40 M Pa压力下处理5 min后丁酸梭菌的存活率分别为64.38%、87.14%、101.74%;p H为2.00、3.00、4.00的人工胃液处理48 min后丁酸梭菌的存活率分别为113.27%、123.07%、78.52%;经肠道消化酶混合液处理198 min后丁酸梭菌的存活率为47.71%。结果提示,丁酸梭菌能够耐受肉仔鸡饲料加工过程中的高温、高压环境,对人工胃液有较好的耐受性,但对肠道消化酶的耐受性较低。     

5株凝结芽孢杆菌的鉴定及抗逆性分析

通过细菌形态学、生理生化特征分析,5株鉴定均为凝结芽孢杆菌。以总菌数、抑菌性、热稳定性、耐人工胃肠液、耐胆盐能力等为评价指标,比较5个凝结芽孢杆菌产品的抗逆性。结果表明,5株凝结芽孢杆菌经65℃处理30 min后,存活率均超过100%;A株抑菌性最好,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率分别可达99.85%和101.4%,显著高于D株(P0.01)和E株(P0.01)。经过人工胃液和人工肠液处理后,菌株A和B在模拟胃液(pH 2.0)存活率较高,均在80%以上,同时这A株菌完全耐受模拟肠液(pH 7.6);A株和B株耐受胆盐浓度可达1%,其他三株的耐受胆盐浓度可达0.3%。A株较其他株凝结芽孢杆菌具有较好的益生特性,在饲料生产上具有重要的应用价值。     

蚯蚓源贝莱斯芽孢杆菌Y1鉴定及生物学特性研究

为了获得生长性能优良和抗逆性好的蚯蚓源芽孢杆菌菌株,本试验从蚯蚓肠道内分离1株生长较快的细菌并命名为Y1,随后进行16S rRNA测序、生理生化鉴定、抗逆性试验、药敏试验、抑菌试验和动物安全性试验。结果显示：该菌为贝莱斯芽孢杆菌,革兰染色呈阳性;生长曲线显示该菌6～12 h为对数期,15～27 h为稳定生长期;在人工胃液、人工肠液中10 h的存活率分别达到60.40%和61.60%;能够耐受0.3%胆盐;对氨苄西林、青霉素G、羟氨苄青霉素耐药,对环丙沙星、头孢羟氨苄、氟苯尼考、替米考星、庆大霉素高度敏感;对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用;在动物安全性试验中,接种该菌的SPF级KM小鼠未出现异常及死亡现象。结果表明,蚯蚓源贝莱斯芽孢杆菌Y1具有良好的生长性能,能耐受动物胃肠道环境,有可能作为益生菌应用于畜禽养殖。     

产β-葡萄糖醛酸苷酶菌株胃肠道耐受性与酶学特性研究

为发酵转化黄芩苷生产活性产物黄芩素、研发益生菌和中草药黄芩协同联用绿色混合型饲料添加剂产品奠定基础,试验采用酶解底物显色法和薄层层析法,从健康鸡肠道内容物中分离筛选出一株产β-葡萄糖醛酸苷酶的JY24菌株,经菌落形态、生理生化及16SrDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌。结果表明:(1)JY24菌株对人工胃液、人工肠液均有一定耐受能力,胆盐最高耐受浓度为0.3%～0.5%;(2)JY24菌株所产β-葡萄糖醛酸苷酶的最适温度为35℃,40℃、50℃和60℃处理1 h相对酶活分别为72.96%、31.63%和0;(3)最适pH 6.5,在pH 6.0和7.0环境下,酶活相对稳定,处理1 h相对酶活分别为73.54%和73.63%;(4)浓度为2.5 mmol/L的Ca~(2+)、Fe~(3+)和Zn~(2+)可使酶活升高11.48%～21.05%,对该酶有激活作用,Fe~(2+)和Cu~(2+)可使酶活性下降15.84%～18.28%,对酶活有抑制作用,K~+、Na~+、Mg~(2+)和Mn~(2+)对酶活无明显影响。     

狐源罗伊氏乳杆菌ZJF036益生特性研究

本试验旨在研究狐源罗伊氏乳杆菌ZJF036发酵特性、黏附能力及动物安全性,探究罗伊氏乳杆菌ZJF036的益生特性。试验检测了罗伊氏乳杆菌ZJF036的生长特性、产酸性能、药物敏感性,对人工胃液、人工肠液和胆盐的耐受性,细菌的疏水率和自凝聚率,对狐狸小肠上皮细胞的黏附能力以及对小鼠血液生理生化指标的影响。结果表明:罗伊氏乳杆菌ZJF036培养4～10 h进入对数生长期;培养菌液的最低pH为3.80;罗伊氏乳杆菌ZJF036对麦迪霉素、头孢曲松和素氯霉敏感,对万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那和氨苄西林不敏感;细菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌作用;罗伊氏乳杆菌ZJF036在人工胃液和人工肠液中3 h存活率可达90%以上,能够耐受0.4%的胆盐环境;罗伊氏乳杆菌ZJF036的疏水率为82.27%,在2和4 h自凝聚率分别为32.47%和41.70%;罗伊氏乳杆菌ZJF036对狐狸小肠上皮细胞的黏附数为(77.0±8.0) CFU/细胞,明显高于鸡源鼠李糖乳杆菌GG;此外,小鼠安全性试验表明,血液生理生化指标均未见异常。综上所述,罗伊氏乳杆菌ZJF036生长迅速,具有良好产酸性能和抑菌能力,可以耐受人工胃液、人工肠液和胆盐,对狐狸小肠上皮细胞具有很强的黏附能力,对小鼠安全可靠。罗伊氏乳杆菌ZJF036可作为犬科动物益生菌制剂的备选菌株。     

7株具益生性能粪肠球菌的性能评价

研究通过对7株粪肠球菌的生长特性、产乳酸能力、耐受人工胃肠液能力、耐胆盐性能及抑制病原菌能力测定,进而综合评价其益生效果,并获得1株益生效果较好的粪肠球菌HEW-A223:它生长周期短、延滞期短且产酸能力强;人工胃肠液耐受性较好,耐胆盐性强;并且能够抑制致病型大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的生长等优良特性,为实际生产时选用菌种提供可靠依据。     

低乳糖牛乳的研制

为解决乳糖不耐受的问题,通过对酶的不同添加量、不同水解温度、时间和pH值等单因素试验确定了乳糖水解率大于60%的条件:酶添加量为0.8g/kg,温度为38℃,酶解时间为3h,pH值选择6.8-7.0。     

一株乳酸菌GF103的分离鉴定及体外益生效果评价

本研究旨在利用分子生物学手段鉴定乳酸菌GF103的菌种属性,并通过体外法评价其作为益生菌的益生效果,筛选出具有益生作用的乳酸菌。试验从北京市大兴种猪场附近土壤中分离得到一株能抑制病原菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的乳酸菌,编号为GF103,经16SrRNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。经体外益生效果评价得知,乳酸菌GF103在pH=3的条件下活菌数较高,能够耐受0.3%胆盐。乳酸菌GF103在人工模拟胃液中培养0.5 h活菌数不受影响(P>0.05),培养3 h活菌数降低1 log值(P<0.01);在人工模拟肠液中培养3 h活菌数不变(P>0.05)。结果表明,乳酸菌GF103具备益生菌特性,可进一步研究其作为微生物添加剂在动物上的应用效果。     

饲用地衣芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨地衣芽孢杆菌的抗逆性与益生性,研究通过5个试验评定地衣芽孢杆菌的耐高温、耐酸性、耐胆盐、抑菌性和黏附性,于85℃水浴分别处理地衣芽孢杆菌2.5 min、5 min、7.5 min模拟制粒条件;利用pH值分别为2,3,4的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%的胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定地衣芽孢杆菌的黏附能力。结果表明:85℃处理地衣芽孢杆菌2.5 min后活菌数最高,与对照组相比提高了2.25%(P>0.05);用pH值为2,3,4的胃液分别处理,与对照组相比活菌数分别提高0.77%(P>0.05)、1.54%(P>0.05)、1.34%(P>0.05);地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0和16.16 mm;在黏附性试验中,每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上平均可以黏附27个地衣芽孢杆菌。说明制粒过程、人工胃液、人工肠液不影响地衣芽孢杆菌的活菌数,地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著抑制作用,使金黄色葡萄球菌基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7～24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速...     

1株牦牛瘤胃源无色杆菌的鉴定及生物学特性评价

【目的】对分离得到的1株牦牛瘤胃源菌株进行鉴定和生物学特性分析,开发新型动物源益生菌。【方法】通过显微镜和菌落观察试验菌株的形态学特征,采用VITEK2微生物生化自动鉴定仪鉴定其生化特性,并对其16S rDNA进行PCR扩增、相似性比对和遗传进化树构建。进一步对其生长性能、产酸能力、自凝聚、疏水性、溶血性和耐药性、耐酸耐胆盐及胃肠环境适应性等生物学特性进行研究。【结果】试验菌株经过形态学、分子鉴定和16S rDNA扩增鉴定为无色杆菌（Achromobacter）,命名为无色杆菌YKS2。该菌株2 h进入对数生长期,持续增长至20 h后开始出现平台期并缓慢下降。发酵48 h后pH未降低,说明该菌株不具产酸性能;自凝聚力为28.7%,表面疏水性在氯仿中达到77.1%,其他溶剂均>60.0%,平均达到60%以上,表明细菌有一定的黏附能力;在血琼脂平板培养48 h后未出现溶血环;通过K-B法测试了对14种抗生素的敏感性,发现其对常见的12种抗生素敏感;在pH 2.0的培养基中不能存活,在pH 4.0的培养基中存活率为61.4%;对0.1%和0.3%胆盐培养基有较高的耐受;在人工胃液重悬后培养3 h的细菌存活率为78.18%,在人工肠液中处理4、8 h后,与对照组相比,菌落数极显著增长（P<0.05）,说明YKS2菌株能够耐受一定程度的人工肠液。【结论】牦牛瘤胃源YKS2菌株为肠杆菌科无色杆菌亚种,无溶血、产酸及耐强酸特性,非耐药菌株,增殖性能较好,具有耐胆盐、耐胃肠液、自凝聚及表面疏水特性,可作为一种候选益生菌菌株进行进一步的评价和研究。     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析，同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性，牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示，该菌生长4 h时进入对数生长期，20 h后生长趋于稳定，进入生长稳定期；同时该菌表现出较好的耐酸性，在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%；有较好的耐胆酸盐性，在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现，该菌的发酵产物具有抑菌活性，同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现，该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性；其抑菌活性及抑菌稳定性较好，具有耐酸碱及耐高温特性。     

羊瘤胃乳酸菌的分离鉴定及抗逆性筛选

为开发羊源乳酸菌菌种资源,从健康成年散养山羊瘤胃内容物中分离乳酸菌,经生化试验、基因测序以及同源性分析、构建遗传进化树等方法对分离出的乳酸菌进行鉴定,并通过耐酸和耐胆盐试验筛选抗逆性良好的乳酸菌.结果表明:从散养山羊瘤胃内容物中分离出11株乳酸菌,将其编号为R1～R9、R11和R12;其中R1、R2为杜氏肠球菌,R3、...     

自然发酵泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定与体外益生特性研究

利用MRS固体培养基从自然发酵的泡菜汁中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株R1,经16S rRNA基因序列分析,并结合生理生化特性和糖发酵试验将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株R1具有很强的产酸能力,24 h内可使MRS液体培养基p H从6.14降为3.59。菌株R1的发酵上清液对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸡肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌均有很好的抑制作用。体外益生试验表明,菌株R1能耐受0.3%的胆盐、p H 3.0的酸度以及60℃、30 min的热处理,对人工胃液和人工肠液也有很好的耐受性。菌株R1对头孢类和青霉素类抗生素较敏感,对诺氟沙星、卡那霉素、链霉素等抗生素不敏感。     

多抗性保加利亚乳杆菌的诱变和筛选

通过紫外诱变和硫酸二乙酯诱变,筛选出抗生素抗性(头孢氨苄和氨苄西林)的保加利亚乳杆菌,同时模拟人体胃酸环境(pH1.5～4.5)和十二指肠高胆酸盐环境(0.1g/100mL～0.4g/100mL)对诱变后的保加利亚乳杆菌的抗性进行了研究。结果表明,保加利亚乳杆菌突变株可抗头孢氨苄和氨苄西林(均为2mg/mL),并且在pH2.5～4.5时具有较强的生存能力,培养4h活菌数仍达108cfu/mL以上,在pH1.5条件下仍有部分存活。在0.1g/100mL～0.3g/100mL胆酸盐条件下培养4h,活菌数仍达106cfu/mL以上,且能在0.4g/100mL胆汁盐中存活。